β-内酰胺类抗生素版

1、化学药品快检工作手册培 训,中国药品生物制品检定所 化学药品快速检验教学组,化学系统,化学快速鉴别 系 统,化学快速鉴别系统： 是以疗效相近的一类药品为研究对象，按照药品结构类别，以能有效区分结构相似的药品而建立的鉴别方法。化学药品快速系统鉴别法既能快速鉴别本类药品和非本类药品的同时，也能快速鉴别同类药品中的每一个品种。,按照药品结构类别，以能有效区分结构相似的药品、快速、简便、可操作性强为基本原则，对常见品种按类建立系统化、程序化、标准化的快速检验方法。,手册收载的品种,16大类，305种制剂,解热镇痛 心血管 消化 呼吸 维生素及 微量元素 甾体激素,降糖 神经和 精神系统 消毒防腐 抗寄

2、生虫 磺胺,抗艾滋病 抗结核 抗疟 大环内酯 类抗生素 -内酰胺 类抗生素,返回,主 讲 内 容,第二章 解热镇痛用药,第一章 心血管系统用药,第九章 大环内酯类抗生素,第三章 -内酰胺类抗生素,1、掌握化学药品快检工作手册 2、掌握化学药品快速系统鉴别法 3、熟悉反应原理 4、重点掌握关键词和关键词与系统内容之间的关系 5、重点掌握带 部分内容,具体要求,内酰胺类抗生素快速鉴别系统,B酰胺类抗生素被造假制假的历史渊源以久，一直在查处的假药中占有较大的份额，这类抗生素的结构极其相似，但是不同品种间差价巨大 。,抗生素的假药的特点 是不法分子以淀粉空白片甚至以发霉 变质面粉、饲料为填充物制假造假

3、 以价格低廉的抗生素充当高价抗生素赚取差价谋求暴利，主要是青霉素以第一代头孢菌素或充当第三代头孢菌素较为常见。,假抗生素直接导致疗效不佳或完全没有疗效的严重后果,贻误治疗时间，严重威胁病人的生命安全，对于传染性感染增加公众危险。,假药危害,查处实例 例如： 安徽省某市曾查处一个抗生素的造假窝点，不法分子以相对价格较低廉的注射用氨苄西林改换包装标签的方法充当注射用头孢唑啉钠, 内酰胺类抗生素的结构特点等基本知识和反应原理, 内酰胺类抗生素的化学系统鉴别思路, 内酰胺类抗生素的化学系统鉴别的具体方法与步骤, 内酰胺类抗生素的操作要点及注意事项,关键词: 1 ）内酰胺环 2）青霉素类、头孢类、碳青霉

4、烯类 3）辅料差别 4）羟肟酸铁反应、碱性酒石 酸铜反应、三氯化铁反应,基 本 知 识,内酰胺类抗生素的结构特点（共性）,母核含有四元-内酰胺环。 青霉素 头孢 碳青霉烯,这个四元环性质特点是张力大，很不稳定，与酸碱作用易水解开环，我们下面将讲的羟肟酸铁反应，碱性酒石酸铜的反应都是利用了这个环的不稳定性特点产生化学反应.,-内酰胺类药物按骈合环可分为青霉素（骈合五元氢化噻唑环）、头孢菌素（骈合六元氢化噻嗪环）及碳 霉青烯类,一 结构分类,青霉素类,碳青霉烯类,头孢菌素类,阿莫西林,氨苄西林,头孢氨苄,头孢地尼,头孢拉定,青霉素V钾,头孢哌酮钠,苯唑西林钠,氯唑西林钠,头孢呋辛酯,品 种 介 绍

5、,抗生素性质复杂, 内酰胺类抗生素包含的品种较多，剂型几乎覆盖了抗生素类药品所能应用的全部剂型.快检工作手册红皮书主要包括注用粉针、干混悬剂、颗粒剂、片剂、胶囊。 手册收载了最常见青霉素类品种9种，头孢类品种10及其他类品种2两种，手册方法简单便捷可操作性强，有效区分所收载品种。,二品种,青霉素类：共9种。分别为：阿莫西林、氨苄西林、苯唑西林钠、氯唑西林钠、青霉素V钾、青霉素钠、美洛西林钠、氯唑西林钠。,头孢菌素类：共16种。分别为：头孢氨苄、头孢泊肟酯、头孢地尼、头孢呋辛酯、头孢呋辛钠、头孢克洛、头孢克肟、头孢拉定、头孢哌酮钠、头孢曲松钠、头孢羟氨苄、盐酸头孢他美酯、头孢他啶、头孢噻吩钠、头

6、孢唑肟钠、头孢唑啉钠。,品名 别名 分类 头孢噻吩钠 先锋I号 头孢氨苄 先锋IV号 一代 头孢唑啉钠 先锋V号 头孢呋辛酯 西力辛 头孢克洛 希克劳 二代 头孢克肟 世福素 头孢哌酮钠 先锋必素 头孢曲松钠 菌必治、罗氏芬 三代 头孢拉定 先锋VI号、雷丁诺,临床常用的还有碳青霉烯类，属于非经典的-内酰胺类 碳青霉烯类 RH R 亚胺培南 RCH3 R 美洛培南,复方制剂：共7种。分别为：阿莫西林钠克拉维酸钾（注射）、阿莫西林克拉维酸钾（口服）、氨苄西林钠舒巴坦钠、氨苄西林钠氯唑西林钠、头孢哌酮钠舒巴坦钠 、头孢噻肟钠舒巴坦钠、亚胺培南-西司他丁。,-内酰胺类抗生素专属性反应,1、羟肟酸铁反

7、应,2、碱性酒石酸铜反应,3、三氯化铁反应,操作：取供试品溶液1ml，加盐酸羟胺试液1ml，再加酸性硫酸铁铵试液1滴 采用羟肟酸铁反应可直接快速初步区分大部分-内酰胺类抗生素与其他药物，且根据产物颜色的差异快速区分青霉素类与头孢菌素药物,羟肟酸铁反应,反 应 机 理,H+,Fe3+/3,（红、棕、褐）,反 应 机 理,呈色,内酰胺类,NaOH,H2NOH,羟肟酸衍生物,H+,Fe3+,反 应 机 理,可疑的-内酰胺类抗生素,羟肟酸铁反应,假药,-内酰胺类抗生素,青霉素类,头孢类,深红色,桔红色,（）,（）,似肽键,碱性酒石酸铜,蓝紫或墨绿色,操作：取供试品溶液1ml，加碱性酒石酸铜试液0.5m

8、l,2、碱性酒石酸铜反应,碱性酒石酸铜反应,反 应 机 理,蓝紫色,反 应 机 理,3、三氯化铁反应,操作：取供试品溶液1ml，加入三氯化铁试液3滴,立即观察反应现象 。,反 应 机 理,机理文献不详 推测 1、可能与三氯化铁的Fe 3发生络合，呈色。 2、与酚羟基发生反应，呈色。,快检系统方法, 内酰胺类抗生素快 检 系 统 方 法 分 类,按制剂中辅料的多少及种类分为三类： 注射用粉针剂：几乎不含辅料或仅含少量助溶剂，如精氨酸、碳酸钠 片剂、胶囊：辅料成分简单、干扰小 颗粒剂、干混悬剂：辅料含量多、成分复杂、干扰大,片 剂、胶囊,青霉素类,头孢菌素类,羟肟酸铁反应,碱性酒石酸铜反应,三氯化

9、铁反应,H-035,颜色反应鉴别,薄层色谱系统,碱性酒石酸铜反应,三氯化铁反应,H-034,内酰胺类抗生素的化学系统鉴别的总体思路,注 射 用 粉 针,青霉素类,头孢菌素类,碱性酒石酸铜反应,三氯化铁反应,H-033,H-033,颜色反应鉴别,薄层色谱系统,碱性酒石酸铜反应,三氯化铁反应,H-036,羟肟酸铁反应,颗 粒 剂 、 干 混 悬 剂,碱性酒石酸 铜(1-5)反应,三氯化铁反应,颜色反应鉴别,薄层色谱系统,H-034,颗粒剂 干混悬剂,- 内 酰 胺 类 抗 生 素,三氯化铁 反应,头孢氨苄/甲氧苄啶 头孢拉定 头孢氨苄 头孢羟氨苄 头孢克洛 阿莫西林 阿莫西林/克拉维酸钾 头孢克肟

10、,头孢泊肟酯,头孢地尼,头孢氨苄 /甲氧苄啶 头孢拉定 头孢氨苄 头孢羟氨苄 头孢克洛 阿莫西林 阿莫西林/ 克拉维酸钾 头孢克肟,碱性酒石 酸铜反应 （1 5）,头孢氨苄/甲氧苄啶,头孢氨苄 头孢拉定,头孢克洛 阿莫西林 阿莫西林/克拉维酸钾,头孢克肟,深蓝紫色,浅墨绿色,头孢羟氨苄,墨绿色,深红色,深棕色,头孢克洛 阿莫西林 阿莫西林/克拉维酸钾,TLC,头 孢 克 洛,阿 莫 西 林,阿 莫 西 林,克 拉 维 酸 钾,H-034,注 射 用 粉 针,青霉素类,头孢菌素类,碱性酒石酸铜反应,三氯化铁反应,H-033,H-033,颜色反应鉴别,薄层色谱系统,碱性酒石酸铜反应,三氯化铁反应,

11、H-036,内酰胺类抗生素的化学系统鉴别的总体思路,羟肟酸铁反应,羟肟酸铁反应,- 内 酰 胺 类 抗 生 素,青霉素类,头孢类,注射用粉针,内酰胺类抗生素的化学系统鉴别的 具体方法与步骤,碱性酒石酸铜反应,青霉素钠 氯唑西林钠 苯唑西林钠,氨苄西林钠/舒巴坦钠 阿莫西林钠/克拉维酸钾 氨苄西林钠 氨苄西林钠/氯唑西林钠,阿莫西林钠,美洛西林钠,青 霉 素 类,三氯化铁反应,氨苄西林钠 /舒巴坦钠,阿莫西林钠 /克拉维酸钾,氨苄西 林钠,氨苄西林钠/ 氯唑西林钠,氨苄西林钠 /舒巴坦钠 阿莫西林 /克拉维酸钾 氨苄西林钠 氨苄西林钠 /氯唑西林钠,TLC,阿莫西林钠/克拉维酸钾,氨苄西林钠/舒

12、巴坦钠,氨苄西林钠 /舒巴坦钠,阿莫西林钠 /克拉维酸钾,青霉素钠 氯唑西林钠 苯唑西林钠,三氯化铁反应,1%醋酸 反应,氯唑西林钠,苯唑西林钠,微桔红色或 浅桔红色 混浊或沉淀, 有颗粒挂壁,碱性酒石酸铜反应,头孢他啶 头孢曲松钠 头孢唑肟钠 头孢拉定,头孢唑林钠 头孢噻吩钠 头孢呋辛钠 头孢哌酮钠 头孢哌酮钠/ 舒巴坦钠,蓝色变墨 绿色溶液,墨绿色变 棕黄色,美洛培南 亚胺培南/ 西司他丁,头 孢 菌 类,三氯化铁反应,头孢他啶 头孢曲松钠,TLC,头孢曲松钠,头孢 他啶,头孢唑肟钠,头孢拉定,头孢唑林钠 头孢噻吩钠 头孢呋辛钠 头孢哌酮钠 头孢哌酮钠/舒巴坦钠,蓝色变墨 绿色溶液,三氯化

13、铁反应,头孢唑林钠 头孢噻吩钠,TLC,头孢唑 林钠,头 孢 噻 吩 钠,头孢呋辛钠 头孢哌酮钠 头孢哌酮钠/舒巴坦钠,H-033,TLC,头孢呋辛钠,头孢哌酮钠,头孢哌酮钠/舒巴坦钠,头孢呋辛钠 头孢哌酮钠 头孢哌酮钠/舒巴坦钠,H-033,TLC,美洛培南,亚胺培南/西司他丁,H-033,美洛培南亚胺培南/西司他丁,三氯化铁反应,片 剂,青霉素类,头孢菌素类,羟肟酸铁反应,碱性酒石酸铜反应,三氯化铁反应,H-033,H-036,颜色反应鉴别,薄层色谱系统,碱性酒石酸铜反应,三氯化铁反应,H-033,片剂 胶囊,- 内 酰 胺 类 抗 生 素,羟肟酸铁反应,阿莫西林 阿莫西林/克拉维酸钾 氨

14、苄西林 青霉素V钾,头孢拉定 头孢氨苄 头孢羟氨苄,头孢呋辛酯 盐酸头孢他美酯 头孢泊肟酯,头孢克洛,阿莫西林 阿莫西林/ 克拉维酸钾 氨苄西林 青霉素V钾,碱性酒石酸铜反应,青霉素V钾,阿莫西林阿莫西林/克拉维酸钾氨苄西林,三氯化铁反应,氨苄西林,TLC,阿莫西林,阿莫西林,克 拉 维 酸 钾,H-035,阿莫西林阿莫西林/克拉维酸钾氨苄西林,头孢拉定 头孢氨苄 头孢羟氨 苄,三氯化铁 反应,头孢拉定 头孢氨苄,头孢羟氨苄,TLC,头孢拉定,头孢氨苄,头孢呋辛酯 盐酸头孢他美酯 头孢泊肟酯,碱性酒石 酸铜反应,头孢呋辛酯,盐酸头孢他美酯,头孢泊肟酯,是不法分子以淀粉空白片甚至以发霉 变质面粉

15、、饲料为填充物制假造假 以价格低廉的抗生素充当高价抗生素赚取差价谋求暴利，主要是青霉素以第一代头孢菌素或充当第三代头孢菌素较为常见。,假 药特 点,实 例 分 析,实例1阿莫西林胶囊（片）,以纯淀粉片代替主药,假药特点,实 例 分 析,鉴别方法,性状：有明显的青霉素特臭。,可疑的阿莫西林胶囊（片）,针对假药特点,羟肟酸铁反应,（）,（+）,桔红色,假药,实例2、头孢氨苄胶囊(片),以纯淀粉片代替主药,假药特点,实 例 分 析,性状：有明显的头孢菌素的特臭。,鉴别方法,针对假药特点一,可疑的头孢氨苄胶囊（片）,羟肟酸铁反应,（）,（+）,深红色,假药,实例分析 例如： 安徽省某市曾查处一个抗生素

16、的造假窝点，不法分子以相对价格较低廉的注射用氨苄西林钠改换包装标签的方法充当注射用头孢唑啉钠（见6397页),青霉素类,头孢类,实 例 分 析,正品,假药,RF值 0.260.31,RF值 0.700.72,羟肟酸铁反应,碱性酒石酸铜反应,实例 样品,操作要点及注意事项,颜 色 反 应,颜色反应鉴别 一些品种（制剂）的羟肟酸铁反应和三氯化铁反应，反应后溶液的颜色深浅及溶液状态（澄清、浑浊、沉淀等）的判断受实验人员的主观因素的影响较大。为便于判断，标准正文中采用以“或”连接几种颜色、状态的方法进行叙述，举例如下：,注射用粉针剂的羟肟酸铁反应：桔红色、深桔红色或浅桔红色混浊或溶液，照片如下：,注射

17、用粉针剂的三氯化铁反应：微桔红色或浅桔红色混浊或沉淀，照片如下：,颗粒剂、干混悬剂的三氯化铁反应：桔红色、深桔红色或浅桔红色，照片如下：,一些品种（制剂）的碱性酒石酸铜反应，反应现象是颜色渐变的过程，如“深葡萄紫色变深棕色”、“墨绿色变棕黄色”、“蓝色变墨绿色”、“深葡萄紫色变深墨绿色”等，且变化速度的快慢依品种各异。因此，操作该反应时需仔细观察现象。,样品的溶解性对颜色结果的影响,注射用亚胺培南西司他丁加水溶解时，发现溶解性不好使供试品溶液出现混浊，但不影响反应现象的观察和结果的判断,辅料对颜色反应结果的影响,由于注射剂辅料较少直接溶解即可，不需过滤；片剂和胶囊剂过滤与否对结果影响不大，本实

18、验仍以取粉末加溶剂溶解，取上清夜直接加入试剂后观察颜色为主；颗粒剂干混悬剂用普通的过滤方法很难过滤，辅料对实验结果会产生一定影响，大部分颗粒剂仍以取粉末加溶剂溶解，取上清夜直接加入试剂后观察颜色，参考快检手册的图片仔细观察颜色,薄 层 色 谱,操作要点及注意事项,操 作 要 点,选择参比物的依据,Rf值的计算,Rf值的计算应以UV254nm下检视的斑点位置为准（舒巴坦钠以碘蒸气熏蒸后的斑点位置计），注意从斑点前沿开始测量。,以Rf值结合相对Rf值定性的稳定性 和重现性比单独以Rf值定性高。,从斑点前沿开始测量,从斑点中心开始测量,展开剂在展开过程的挥发问题,由于本系列的展开剂中有乙醚和甲酸，挥

19、发性较强，在展开过程中一定要注意圆形展开缸的密闭性，解决方案：在展开缸的盖子与缸的接触的地方要均匀涂布真空硅脂，且用夹子夹好,注意事项,舒巴坦钠UV254nm下检视无斑点，经碘蒸气熏蒸后斑点颜色依然较浅，操作时需仔细观察。,供试品溶液的制备：参照【取样方法参照表】取本品一包，按标示量加入稀乙醇，振摇23分钟，制成每1ml约含25mg阿莫西林的溶液，静置，取上清液作为供试品溶液。,颗粒剂 干混悬剂样品前处理,其 他,因头孢氨苄与头孢拉定的化学结构十分相近，采用目前建立的化学快检方法无法对二者的各种制剂进行有效鉴别，鉴别上述两个品种时应注意结合其它方法，如近红外鉴别、授权HPLC法鉴别。,头孢氨苄,头孢拉定,关键词: 1 ）内酰胺环 2）青霉素类、头孢类、碳青霉烯类 3）辅料差别 4）羟肟酸铁反应、碱性酒石酸铜反应、三氯化铁反应,内酰胺类抗生素的结构特点（共性）,母核含有四元-内酰胺环。 青霉素 头孢 碳青霉烯,-内酰胺类药物按骈合环可分为青霉素（骈合五元氢化噻唑环）、头孢菌素（骈合六元氢化噻嗪环）及碳 霉青烯类,一结构分类,青霉素类,碳青霉烯类,头孢菌素类,临床常用的还有碳青霉