课题3　分解纤维素的微生物的分离.ppt

1、，纤维素：棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素是地球上最丰富的多糖，植物每年生产70亿吨以上的纤维素；分布植物的根、茎、叶。1，食草动物等消化道中也有分解纤维素的微生物共生。原理是制造纤维素酶来分解纤维素，但人类没有分解纤维素的能力。2、作物秸秆：稻草、稻草、稻草、草、木屑等大量纤维素，利用机会少，效率低；纤维素生物燃料：石油能源替代最有希望的科学家正在研究如何将农业废物、木材和发展更快的草本植物转化为各种生物燃料(甚至航空燃料)。主题3分解纤维素的微生物的分离(a)纤维素和纤维素酶，纤维素：连接葡萄糖末端和末端的高分子化合物广泛存在于植物的根、茎、叶等器官中。纤维素酶：C1酶，Cx

2、酶，葡萄糖苷酶等微生物分泌的复合酶协同作用将纤维素分解成葡萄糖。纤维素，纤维二糖，葡萄糖，2个20毫升试管，实验：纤维素酶分解纤维素实验，每滤纸10毫升0.1毫升乙酸钠缓冲液，a b，a试管1毫升蒸馏水，b试管1毫升纤维素酶，试管140r结果：b试管的滤纸消失。讨论：b试管的滤纸为什么会消失？考官的作用是什么？刚果红染色法、刚果红在水解后形成纤维素等多糖和红色复合物，而不是纤维二糖和葡萄糖。(b)筛选纤维素细菌，用添加在刚果红的纤维素培养基培养微生物时，该培养基上出现以菌落为中心的透明源，可以说明该菌落是纤维素分解细菌，因为已经分解了由姜科红染成红色的纤维素。一，实际测试计划，你根据实验流程图

3、和提供的三条信息以及“操作提示”对问题的思考，设计详细的实验计划。*，取样环境，1，土壤取样：纤维素丰富的环境(多年落叶形成的腐殖土，积累多年的腐枝败叶等)，工作阶段，讨论：如果找不到合适的环境，可以把滤纸埋在土壤里，把滤纸埋在土壤里有什么效果？你认为滤纸应该埋在土壤里多深？将滤纸埋在土壤中可以实现纤维素细菌的相对集中，实际上是适合纤维素细菌生存的环境。滤纸一般要埋在约10厘米深的土壤里。2，选择培养，增加纤维素细菌的浓度，使必要的微生物能从样品中分离出来。目的：准备可选培养基，工作：P29，培养基成分分析，提示：收购是完整培养基和可选培养基的种类。整个培养基可以用作对照组，也可以将纤维素变成

4、葡萄糖。a，旁列的公式是液体培养基还是固体培养基？怎么了？因为公式中没有凝固剂(琼脂)，液体培养基，b，这个培养基对微生物有选择效果吗？如果有，如何选择？有选择作用，在本配方中，纤维素用作主要碳源，只有能分解纤维素的微生物才能大量繁殖。c，通过“纤维素酶选择培养基配方分析”，酵母膏也可以提供少量碳源，因此，能否设计显示其他微生物也可以在该培养基中生长繁殖的对照实验？但是因酵母膏的含量少，只有以纤维素为碳源的微生物才能大量繁殖。在选择培养的状态下，能适应其营养条件的微生物可以快速繁殖，不符合其营养条件的微生物的繁殖可以被抑制，起到“富集”的作用。为什么我们选择培养可以“富集”的微生物？根据主题1

5、的稀释法，选择培养的培养基将达到稀释的101107倍。3 .拔模稀释，4 .在纤维素细菌的鉴定培养基上涂上样品涂层，(1)准备鉴定培养基p29，(2)涂层平板：将稀释度为10416的细菌悬浮液分别涂在扁平培养基上0.1毫升，30倒置培养。纤维素酶降解菌培养基(水溶性羧甲基纤维素钠)，方法1:先添加刚果红的颜色反应。方法2:加入刚果红。微生物培养，背板，5。刚果红染色法，制作透明源的群体是分解纤维素的群体。这两种方法的优点和缺点是什么？有透明源的基本是可以分解纤维素的微生物。操作碍事的刚果红，就不会有集落混合问题，操作简单，生产集落剂的微生物也会产生模糊的透明源2。有些微生物分解色素，产生明显的

6、透明源。方法1 NaCl溶液的作用？想：冲洗作用，与纤维素结合的刚果红，透明圈不够明确。通过这种方法可以知道酶活性的大小，实际上刚果红是结合在培养基上的多糖基质，但分解纤维素的细菌可以制造纤维素酶，分解这种多糖基质，使其成为单糖，使刚果红不能结合，氯化钠溶液不能凝固的刚果红可以洗掉，大而小的透明环留下，大的透明环以及分解纤维素的能力很强！土壤取样，选择培养，渐变稀释，在识别培养基上取样涂层，殖民地选择，什么环境取样？培养的目的？选择徽章的特性？选择什么样的殖民地？识别徽章特性？如何鉴别？根据：对生存环境的微生物要求，去相应的环境；提高纤维素分解菌的浓度，确保样品中纤维素分解菌的可分离性；液体培

7、养基用固体培养基刚果红染色法进行实验探讨，选择有透明源的菌落，产生明显透明源的菌落，在选择接种纤维素降解菌的选择培养基中培养到300C 370C，进行纯化培养。纯化培养，4，结果分析和评价，1。说明在培养过程中，没有菌落生长的情况下，培养基的生产合格，选择培养基是否制造，以及培养过程中是否筛选菌落控制培养基。如果观察产生透明环的殖民地，就可能获得了分解纤维素的微生物。2.分离的结果是否一致，因为土壤中的细菌数远远多于真菌或放线菌数，最容易分离的是细菌。但是，根据采集土壤的环境，不同的学生可以得到真菌和放线菌等不同的分离结果。为了确认分离是纤维素分解菌，还需要_ _ _ _ _ _ _ _ _

8、_ _ _实验。纤维素酶的发酵方法有_ _ _ _ _ _ _ _ _发酵和_ _ _ _ _ _ _ _ _发酵。纤维素酶测定方法定量测定纤维素酶降解滤纸等纤维素生成的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _量。发酵纤维素酶的生产，液体，固体，葡萄糖，5，主题扩展，思考：这个实验主题2的实验过程的相似性和不同之处是什么？主题2将土样梯度稀释剂直接涂在以尿素为唯一氮源的选择培养基上，分离，统计菌落。本课题首先选择培养，增殖纤维素降解菌，稀释，涂在识别培养基上，选择群体。，土壤取样，选择培养，渐变稀释，在识别培养基上取样涂层，殖民地选择，什么环境取样？培养的目的？选择徽章的特性？选择什么样的殖民地

9、？查看徽章的特性？如何鉴别？根据：对生存环境的微生物要求，去相应的环境；目的：提高纤维素分解菌的浓度，使其能从样品中分离出所需的微生物。刚果红染色法，分解纤维素的微生物的分离，纤维素酶，种类，作用，催化活性，刚果红染色，筛选原理，实验设计，土壤取样，选择培养，涂层培养，纯化培养，一般来说，多细胞植物和动物不属于微生物。例如，葫芦科属于苔藓，铁蕨属于蕨类，多细胞高等植物。b，在对微生物营养物质、微生物营养物质的叙述中，正确()a不能是碳源。不能是氮源。b碳源也提供能源，仅提供c水以外的矿物，武器盐类d无机氮源也提供能源分析为对不同微生物、微生物进行具体分析所需的营养素大不相同。对于a，b选项，其表示法不完整。一些碳源可能是碳源，例如二氧化碳。也有可能是氮源的碳源，例如Nh 4h co 3。一些碳源