DNA的粗提取与鉴定

1、特辑5DNA和蛋白质技术课题1复习DNA的粗提取和鉴定，复习如何观察DNA和RNA在真核细胞中的分布情况(2)证明DNA是遗传物质的三个经典实验？ (3)DNA分子双螺旋结构模型的提交者是谁？(4)DNA分子双螺旋结构模型的主要特征是？ 在外侧排列，构成基本骨架，碱在内侧排列，3、2根链上的碱通过氢键与碱对结合. G=C，加强复习：填补：1.生物的主要遗传物质：3.病毒的遗传物质：判断：1.原核和真核细胞中含有DNA和RNA，2 .大肠杆菌的遗传物质是DNA或RNA，2 .酵母细胞的遗传物质主要是DNA，3.t2噬菌体核酸、DNA、DNA或RNA、知识链接：1 .所有动物成熟的红血球都具有相同

2、的结构吗？2 .将动物和植物细胞分别放入蒸馏水，会发生相同的现象吗？ 4 .操作：比较DNA、RNA和蛋白质1011/4/513 (元素、结构、发生、分布部位、功能、理化性质、检查方法等)，3 .盐析：向蛋白质溶液中加入浓无机盐溶液则蛋白质析出的现象。 盐析是物理变化，可逆，常用于分离纯化蛋白质。 5.DNA的粗提取起什么作用？ 2 .概述了教育目标、知识和能力、DNA的结构、功能和物理、化学性质，说明了粗提取DNA的构想和鉴定原理设计，流程图显示了DNA的粗提取和鉴定步骤，尝试粗提取和鉴定植物和动物组织的DNA，过程和方法、感情态度和价值观、小组合作、问题检测复习2DNA相关知识进行设计、分

3、析实验、重点难点、DNA的粗提取和鉴定，预习问题反馈，问题1.DNA和蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度如何不同？ 34611/1/812，问题2.DNA和蛋白质在酒精中的溶解度有什么不同？ 问题3.DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂的耐性有什么不同？ 1 )盐析改变了DNA和蛋白质的空间结构吗？ 有变性吗？ 2 )高温下DNA和蛋白质的改性机制相同吗？ 可逆吗？问题4.DNA的鉴定方法是什么？ 甲基绿能鉴定吗龙胆紫和醋酸品红能鉴定DNA吗？ 核对的设定方法、目的是什么？ 二苯胺为什么现在配合了？ 67811/249/812，问题5 .选择实验材料的原则是什么？124/36/91213为什

4、么选择鸡血作为实验材料？ 猪的血，猪的肝脏好吗？3691011/47为什么放在塑料容器里？为什么放柠檬酸钠？611，问题6 .为什么加蒸馏水会使鸡的血球破裂？ (横栏)加入洗涤剂和食盐充分研磨的作用是什么？ 39/78912怎么过滤？ 滤纸是否可用？所得滤液中可能含有什么样的细胞成分？1 )为什么植物会破坏细胞膜，不需要动物细胞？ 细胞壁怎么做？破碎植物细胞，首先可以用果胶酶加入低渗透液吗洗涤剂为什么能溶解细胞膜？ 破坏DNA吗？ 123679/1346911/89，2，2 )如果研磨不充分，对实验结果有什么影响？ 68/9，试验点1 :提取DNA的方法，1 .提取DNA的基本想法，生物高分子

5、：染色体组成：构想：核酸，蛋白质，多糖类，DNA和蛋白质，DNA和蛋白质，DNA和RNA，利用蛋白质和脂质等物理化学性质的差异提取DNA(主要利用DNA的溶解性规律)、2. DNA提取原理的溶解性、问题1 .在DNA和蛋白质浓度不同的NaCl溶液中溶解度如何不同？ 在34611/1/812、溶解(溶解度最大)、析出(溶解度最小)、部分发生盐析沉淀、溶解，NaCl溶液浓度从2 mol/L下降的过程中，蛋白质溶解度逐渐增大，初步分离，问题2.DNA和蛋白质在醇中的溶解度如何不同？ DNA不溶于醇，但细胞中的一些蛋白质溶于醇，最近分离，2. DNA的提取原理耐受性，问题3.DNA和蛋白质对酶、高温和

6、洗涤剂的耐受性如何不同？ 水解，无影响，大多数6080改性，80以上改性，细胞膜崩溃，脂质和蛋白质去除，无影响，1 )盐析改变了DNA和蛋白质的空间结构吗？ 有变性吗？ 2 )高温下DNA和蛋白质的改性机制相同吗？ 可逆吗被破坏的钥匙不同。 DNA :破坏氢键，降温时恢复，可逆的蛋白质：破坏二硫化物键是不可逆的。 空间结构没有变化没有变性，2. DNA的提取原理鉴定，问题4 .如何鉴定DNA？ 甲基绿能鉴定吗龙胆紫和醋酸品红能鉴定DNA吗？ 二苯胺为什么现在配合了？ 67811/249/812，二苯胺、蓝、沸水浴、二苯胺：目前被混合的原因：容易变性和失去作用(无色浅蓝色)，其他鉴定方法：电泳、

7、紫外线照射等，蓝的浓淡和DNA含量有关。 甲基绿色DNA绿色，b，试验点2 :实验设计，1 .实验材料的选定，问题5 :实验材料的选定原则是什么？124/36/91213为什么选择鸡血作为实验材料？ 猪血，猪肝好吗？3691011/47为什么放在塑料容器里？为什么放柠檬酸钠？611，原则：材料：细胞易碎，DNA含量高，提取成功率高，鸡血(红血球) /洋葱，原因：红血球多猪肝细胞需要均质和离心力，操作繁杂，柠檬酸钠：抗凝剂、离心力或静置后避免吸附上清液、血浆、血球、塑料容器： DNA，影响提取量，2 .破碎细胞，得到含有DNA的滤液，动物细胞： (鸡血)、植物细胞： (玉) (横栏)低渗透溶液细

8、胞吸水膨胀，加速细胞破裂，提示为什么向同一方向快速搅拌/2，蒸馏水：搅拌：加入洗涤剂和食盐充分研磨的作用分别是什么？39/78912怎么过滤？ 滤纸可以使用吗？得到的滤液中可能含有什么样的细胞成分？DNA、洗涤剂、食盐、防止细胞膜崩溃，有利于DNA的放出，纱布过滤：滤液(包括DNA、RNA、蛋白质、多糖类等)，溶解DNA，搅拌研磨：破碎细胞，DNA 纱布过滤：滤液(包括DNA、RNA、蛋白质、多糖类等)、2 .破碎细胞，得到含有DNA的滤液；1 )植物为什么破坏细胞膜，不需要动物细胞？ 细胞壁怎么办？破碎植物细胞，首先可以用果胶酶加入低渗透液吗洗涤剂为什么能溶解细胞膜？ 破坏DNA吗？ 123

9、679/1346911/89，2，2 )如果研磨不充分，对实验结果有什么影响？ 68/9被鉴定为核内DNA的放出不充分，提取的DNA量减少，看不到丝状沉淀物，用二苯胺不显示蓝色等。 洗涤剂是一种离子去污剂，含有十二烷基硫酸钠和碱，能使细胞膜破裂，使蛋白质变性，使蛋白质和DNA分离，有助于DNA的释放。加入洗涤剂又轻又软，减少了泡沫的产生，3 .除去滤液中的杂质，问题7 :分析滤液的杂质去除方案的原理149/26/6为什么能反复溶解DNA，除去杂质？ 489/9/9、方案1 :方案2 :方案3 :在DNA浓度不同的NaCl溶液中的溶解度不同，2mol/L NaCl溶解DNA，过滤除去不溶性杂质，

10、0.14mol/L NaCl析出DNA，过滤除去可溶性杂质，2mol/L NaCl过滤除去DNA 若肉粉中的蛋白酶分解蛋白质杂质，与DNA分离，蛋白质和DNA的改性温度不同，高温下分离蛋白质改性和DNA，单向搅拌，3次，4.DNA析出很重要，问题8 :为什么添加醇？ 目的：提取DNA，去除溶于醇的蛋白质等杂质，抑制核酸水解酶活性，降低防止DNA分解的分子运动，容易形成沉淀析出； 低温有助于提高DNA分子的灵活性，减少破坏。 滤液95冷醇白色丝状物(即DNA )暗示着向一个方向轻轻搅拌，卷起丝状物。 (防止DNA断裂)，析出，5 .鉴定，如何设置对照鉴定DNA？ 目的是什么？a、b试管分别加入5

11、ml 2 mol/LNaCl溶液、加入了A DNA的B:空、a、b试管中各加入4ml二苯胺试剂，混合，沸水加热5min， 6 .实验流程、鸡血细胞液的制备、核内DNA的溶解、细胞的破碎、DNA的释放、DNA的析出、DNA的溶解、DNA的精制、鉴定、柠檬酸钠的搅拌、静置、上清除去、鸡血细胞液、蒸馏水、搅拌、过滤、含有DNA的滤液、NaCl、搅拌、过滤DNA 含有DNA的粘稠物(可溶性杂质除外)、NaCl、搅拌、过滤、含有DNA的滤液、95冷醇、搅拌、粗提取的DNA、NaCl、二苯胺、搅拌、蓝色。1 .细胞吸水膨胀破2 .稀释NaCl，析出DNA，1 .除去不溶性杂质，得到含有DNA的滤液，溶解D

12、NA，3 .鉴定，溶解DNA，1 .加入蒸馏水2 .加入醇析出，1 .破碎，除去核外物质除去不溶性杂质，得到含有DNA的滤液，3 .加入蒸馏水，除去可溶性杂质，使DNA粘稠物析出，试验点3 :分析评价，问题9 .提取/2DNA，是否有白色线状物二苯胺的判定为蓝色，问题10 .粗提取的dn 可能含有9/812、核蛋白、多糖类等杂质。 问题11 .结果可能不明确的原因是什么？ 4/9/8，(1)研磨不充分或蒸馏水的使用量少，DNA没有充分放出。 (2)搅拌过多，DNA被破坏了。 (3)析出DNA时，添加蒸馏水太快。 (4)二苯胺的制备时间过长。 溶解度、酒精、洗涤剂、蓝色、22、DNA的直径约为2

13、010-10 m，实验中出现的丝状物的粗细表示DNA分子直径1个的大小吗？ a:DNA分子的直径只有2 nm。 丝状物是多个DNA聚集而成的。 1 .实验材料的选定，1 )为什么柠檬酸钠能防止血液凝固？11/9/8，2，2 )用离心分离机能使DNA析出吗？ 析出的DNA的状态是？ 是11DNA还是肉眼能看到？ 3 )过滤用的是什么滤纸和半透膜能通过什么物质/8 4 )细胞对DNA提取有影响吗？ /9、24、注意事项制备鸡血球液时，在取鸡血的同时放入柠檬酸钠，静置后，上层是血清，下层是必要的血球。 在整个实验中加入2次“蒸馏水，3次NaCl溶液，1次酒精”，加入2次蒸馏水的目的不同，一个使细胞膨胀，二个是稀释溶液。 加入希望酒精使用95%的凉酒精的蒸馏水，或者加入酒精用玻璃棒搅拌的时候，请使其动作变轻，朝向一个方向。 保证DN