酶免疫技术原理

1、酶免疫检测原理,组员：龚希 韩翌 罗勋 李婧 李慧,常用酶标仪及洗板机,Bio-Rad 680,全波长酶标仪Multiskan Spectrum,BIO-RAD 1575 伯乐洗板机,美国贝克曼库尔特有限公司 MW96,酶免疫技术的原理及特点,原理： 酶免疫技术是利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高特异性抗原抗体免疫学反应检测敏感性的一种标记免疫技术。 结合了抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性。 特点： 灵敏度高、特异性强、准确性好 酶标记试剂能够较长时间保持稳定 操作简便、对环境没有污染。 易与其它技术偶联 衍生出适用范围更广的新方法。,底物显色 定性或定量的分析,原理,包被，封

2、闭,反应 加入待测抗体或 抗原和酶标抗原 或抗体,洗涤 使结合在固相上 的抗原抗体复合物 与未结合的分离,1,2,3,4,一、基本原理,1.ELISA检测抗原的方法,1、已知抗体包 被于载体表面,3、加酶标抗体 与抗原结合,4、加酶作用的底物 产生颜色,2、加待检物 抗原与抗体结合,4、加酶作用的底物 不产生颜色,双抗体夹心法测 抗原,1、已知抗体包 被于载体表面,2、加待检物无抗 原与抗体结合,3、加酶标抗体 无抗原结合,+,-,Y,Y,E,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,竞争法测抗原,+,-,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,E,Y,2、加待检物 抗原与酶标抗

3、 原竞争与抗体 结合,3、加酶作用 的底物不显色 或显色弱,3、加酶作用 的底物显色,1、已知抗体包 被于载体表面,1、已知抗体包 被于载体表面,2、加待测物 和酶标抗原， 酶标抗原与抗 体结合,2.ELISA检测抗体的方法,1、已知抗原吸 附于载体表面,2、加待检物 无抗体与抗原结合,3、加酶标抗Ig 与抗体结合,4、加酶作用的底物 产生颜色,1、已知抗体吸 附于载体表面,2、加待检物 有抗体与抗原结合,3、加酶标的抗Ig 抗体,4、加酶作用的底物 不产生颜色,间接法测抗体,-,Y,E,Y,+,双抗原夹心法 类似双抗体夹心法 竞争法 类似检测抗原的竞争法,捕获法,原理： 抗人IgM抗体包被

4、捕获待测标本中IgM类抗体 加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体 底物显色,酶免疫检测仪基本原理,酶联免疫检测仪的基本工作原理：分光光度计法 其主要结构和光电比色仪相似,酶免疫检测仪基本原理,光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,最后由显示器和打印机显示结果.,ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250ul以下，用一般的光电比色计无法完成测试。,酶免疫检测仪基本原理,酶标仪和普通的光电比色计有以下几点差异: 1.盛装待测比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,故用它作为固相载体. 2.由于盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液