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文档简介

1、July 7, 2020,SMARTerTM RACE 技术介绍,南宁科迪生物技术有限公司,主 要 内 容,July 7, 2020,2,July 7, 2020,3,一步RT，一步PCR轻松获得全长双链cDNA,“Gubler and Hoffman procedure” (Gubler, U. 如果Tm 70 可以获得更好的结果。 RACE产物最好是在2kb以内（曾经获得过6.5k产物）,SMARTerTM RACE FAQ,2. RNA的用量： 虽然可以用10ng的total RNA用于起始转录，但是我们建议使用至少50ng total RNA或者25ng polyA+ RNA用于起始转

2、录。对于RACE来讲，最佳起始用量为1ug的total RNA或者1ug的polyA+ RNA,3. 稀释cDNA时应用tricine-EDTA： 稀释cDNA不用水或者Tris-EDTA，是因为tricine buffer能更有效的保持PH值，特别是在高温的时候。而低PH会导致cDNA的降解。,4. 不要用DEPC-treated water： 在SMART技术流程中不要使用DEPC-treated water，即使是在高压后残留极少量的DEPC也会抑制RT和PCR酶的活性。,SMARTerTM RACE FAQ,5. RACE没有产物怎么办？ 有可能的原因是： 1）RNA降解。通常在进行实验之前检测RNA完整性，如果出现问题，还要37度保温2hours以检测稳定性。 2）反转录失败 3）PCR酶失活 4）SMART Oligo降解 建议使用1ug以上total RNA为起始模板，增加一链合成时间至2hours，cDNA合成以后不再稀释，在PCR反应中使用更大量的cDNA模板。检测PCR酶活性。,SMARTerTM RACE FAQ,： ,我们将竭诚为您服务！,技 术 服 务,July 7

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