高效液相流动相缓冲盐选择

1、以下内容综合了安捷伦和互联网上的一些信息：一般来说，反相高效液相色谱的流动相包括有机相和水相。有机相通常用作色谱甲醇和乙腈，四氢呋喃和异丙醇不常用。甲醇具有性价比优势，但甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，甲醇在低波长下有紫外吸收，这将降低分析方法的灵敏度；乙腈比甲醇价格高，毒性大，但其洗脱能力比甲醇强，很少与样品反应。流动相系统的压力比甲醇低得多，截止波长比甲醇低20纳米，这增加了检测在低波长下可被吸收的杂质的可能性，因此我们通常倾向于使用更多的乙腈和更少的甲醇。然而，当样品的峰形不好或分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可以提供不同的选择性。在反相色谱中，流动相中水相的pH

2、和离子强度对于开发对条件的微小变化不敏感的持久方法非常重要。对于离子型化合物，典型样品的保留值随pH值的变化而明显变化，因此控制pH值对于保留值的稳定性和选择性非常重要。一般来说，在pH24的条件下，保留时间对pH值的微小变化具有最高的稳定性，因此建议将该pH值范围作为大多数样品方法(包括碱性化合物和一般弱酸)开发的初始pH值。考虑到重现性，所用的酸碱值应高于或低于分析物pKa或pKb的下一个酸碱值单位。当分析物的pKa或pKb未知时，应测试多个流动相的酸碱度(如酸碱度2.0和酸碱度6.5的缓冲盐溶液)，以提供最佳结果。流动相的优化主要体现在水相。流动相的酸碱度影响色谱分离的方式有很多。根据分

3、析物的结构性质，酸碱度可能影响选择性、峰形和保留。如果是非极性或中性的化合物，酸碱度对分离和保留的影响通常不明显。如果它是一种可电离的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随酸碱度明显变化(1)对于酸性分析物，应选择低ph缓冲液的流动相，以防止分析物电离。只有知道分析物的pKa，才能有效地选择流动相的酸碱度。缓冲范围应为1个酸碱度单位的缓冲离子pK值，使流动相的优化具有一定的灵活性。例如，醋酸盐的pKa值为4.8，缓冲范围为pH3.85.8。(2)碱性化合物只能在高酸碱度条件下获得非离子形式，但这不利于色谱柱。通常，许多碱性化合物在低酸碱度条件下的保留已经满足要求，因此可以选择低酸碱度条件。如果您

4、选择高酸碱度条件，请注意需要选择耐强碱的色谱柱。可以在水中加入酸、碱和盐来改变酸碱度，改善峰形，提高分离度。常用的酸有磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲磺酸等。当仅使用液相时，磷酸最适合于低波长。三氟乙酸、甲酸和乙酸对于液体质量是优选的。0.1%磷酸水溶液可作为液相分析方法发展中流动相的首选，并在此基础上进行优化。当不能单独使用酸时，考虑使用缓冲盐。缓冲盐的选择原则是简单、稳定、缓冲能力强、制备简单。当需要调节酸碱度时，应该有相应的酸或碱。常用的缓冲盐有磷酸盐，主要是钾盐、钠盐和醋酸盐，常用盐浓度约为10 20毫米(根据实际情况，有时可以选择较低或较高的浓度，建议最大浓度不超过50毫米)。

5、下表是沃特世提供的数据，以及常规实验室推荐的缓冲盐系统。缓冲盐/流动相改性剂前激肽释放酶激活剂缓冲范围波动性？(1酸碱值)微软兼容吗？评论TFA0.3-是是离子对试剂通常在0.020.1%的浓度范围内使用，能抑制质谱信号乙酸4.76-是是当与醋酸铵一起使用时，它具有最大的缓冲能力，并具有普通的通常使用110mM的浓度，注意钾盐和钠盐是不挥发的磷酸盐12.151.153.15不不传统的低pH缓冲体系具有良好的紫外透过率磷酸盐27.26.28.2不不当pH值超过7时，降低操作温度/缓冲盐浓度和使用保护柱可以延长柱寿命磷酸盐312.311.313.3不不当pH值超过8时，降低操作温度/缓冲盐浓度并使

6、用保护柱可以延长色谱柱寿命4-甲基吗啉8.47.49.4是是通常使用10毫米或更低的浓度氨重碳酸铵9.210.3(碳酸氢盐-)9.2(NH4)8.210.28.211.3是是通常，浓度为510mM(用于在质谱操作期间保持离子源温度在150以上)。用氨水或醋酸调节酸碱度，在pH10时有很好的缓冲能力。醋酸铵9.28.210.2是是通常浓度为1 10毫米甲酸铵9.28.210.2是是通常浓度为1 10毫米硼酸9.28.210.2不不降低温度，降低浓度，使用色谱柱延长色谱柱寿命CAPSO(3-环己胺-2-羟基丙磺酸9.78.710.7不不两性离子缓冲液与乙腈互溶，通常浓度为1 10毫米，气味小甘氨酸2.4，9.88.810.8不不两性离子缓冲溶液对色谱柱的损害小于硼酸盐1-甲基哌啶10.29.311.3是是通常浓度为1 10毫米大写字母10.49.511.5不不两性离子缓冲液与乙腈互溶，通常浓度为1 10毫米，气味小三乙胺(乙酸酯)10.79.711.7是是