环境卫生学及管理监测课件

1、医院环境卫生学及消毒效能监测,1,一、空气消毒效果监测 二、手消毒效果监测,三、物品和环境表面消毒效果监测 四、使用中消毒液染菌量测定 五、内镜消毒灭菌效果监测 六、血液透析液监测,七、灭菌质量监测,2,一、空气消毒效果监测,非洁净区域空气消毒效果监测,（一）采样时间：在消毒处理后，操作前进行采 样。,（二）采样方法：根据其采样原理分：平板暴露 法和微生物采样器法。,3,1、平板暴露法：布点方法,（1）室内面积30 m2，设置内、中、外对角线3 个点，内、外布点部位距墙壁1m处；,4,（2）室内面积,30 m2，设4角及中央5 点，4角布点部位距离墙壁1m处。,5,（3）采样方法：将血平板或普

2、通营养琼脂平板 （直径9cm)放在室内各采样点处，采样高度为 距离地面1.5m，采样时将平板盖打开，扣放于 平板旁，暴露5min,盖好立即送检。,（4）检测方法：将采样后平皿置37 温箱培 养48h,计数并鉴定。,6,7,（5）平板暴露法结果计算：,因5分钟内在100cm2面积上降落的菌落数相当 于10升空气中所含的菌落数，其计算公式如下： 细菌菌落总数（cfu/ m3）= 50000N/(AT) 式中A为平板面积（cm2）；T为平板暴露时间 （min);N为平板菌落数（cfu）,注意事项：采样前应关好门窗和空调，无人走动情 况下，静止10min再进行采样。,8,（6）结果判断,标准值,环境类

3、别,范围,菌落总数cfu/m3,致病菌,类 层流洁净手术室、层流洁净,10cfu/m3(或0.2cfu/平板） 不得检出,病房,普通手术室、产房、婴儿室、,类,早产儿室、烧伤病房、,200cfu/m3(或4cfu/平板） 不得检出,供应室无菌区、,儿科病房、妇产科检查室、,注射室、急诊室、,类,换药室、治疗室、化验室、,500cfu/m3(或10cfu/平板） 不得检出,供应室清洁区、,各类普通病房和房间,注：致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌,9,10,2、空气微生物采样器采样法,（1）应使用符合卫生部消毒技术规范医院 内感染及其管理公共场所卫生监督监测要点 要求并推荐使用的产品。,（2）

4、计算方法：,细菌菌落总数cfu/m3=平均菌落数（cfu)/每分钟采 气量（L) 采样时间（min/),（3）结果判断：同平板暴露法。,11,洁净手术室静态空气净化效果的监测,手术区:,级,手术台两侧边至少各外推0.9m,两端至少各外推0.4m后,（包括手术台）的区域；级,眼科专用手术室手术区每边不,小于1.2m;,级,手术台两侧边至少各外推0.6m,两端至少各外推0.4m后,（包括手术台）的区域；,级,手术台四边至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；,级,不分手术区和周边区。,周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。,12,（一）采样时间：洁净手术室房间清洁并擦试消 毒后，使净化空

5、调系统达到自净时间并处于开 启状态，然后进行测试，室内应无工作人员。 （二）监测人员要求：穿洁净服，戴口罩，手卫 生。动作要轻，避免产生二次污染。,13,（三）布点顺序：放置培养皿从总平面中最靠里 的房间开始布置，依次向外，最后人员撤出。 每间房间也是从房间最靠里的点开始布置，最 后布置门附近的点，然后人员撤出。收取培养 皿的顺序相反，从最外边的房间开始收，每间 房间从门附近的培养皿开始收，最先布置的皿 最后收，沉降时间略有差别。,14,（四）检测方法：将血平板或普通营养琼脂平板（直径 9cm)放在室内各采样点处，采样点可布置在地面上或 不高于地面0.8m的任意高度上；在手术区检测时应无 手术

6、台，当手术台已固定时，检测高度应在台面之上 0.25m；在100级区域检测时，采样口应对着气流方 向；在其他区域检测时，采样口均向上。采样时将平 板盖打开，扣放于平板旁，暴露30min,盖好立即送检.,15,（五）空白对照：第1次对照为培养皿对照，每监测批次 中取1个培养皿做对比试验，培养皿不打开直接培养， 用于检测培养皿是否合格。第2次对照为微生物室操作 对照，每室或每区取1个对照皿，对操作过程对照试 验，方法是模拟微生物检测操作过程，但培养皿打开 后应立即封盖。两次对照结果必须为阴性。整个操作 应符合无菌操作的要求。,16,（六）布点方法,注意：乱流洁净室应尽量避开高效送风口正下方，同时

7、布点位置应避开障碍物。,1、洁净度局部百级周围千级设置13个点,17,2、洁净度局部千级周围万级设置9个点,18,3、洁净度局部万级周围十万级设置7个点,19,4、洁净度局部十万级周围三十万级设置5个点,20,5、洁净度十万级设置5个点,21,计算方法：采样后的培养皿应37条件下 培养24h，并计算菌落数。菌落数的平均 值均四舍五入选位到小数点后1位。注意 手术区与周边区分别计算。,22,卫生部医院洁净手术部建筑技术规范,（GB50333-2002）中洁净手术室等级标准（空态或静态）,沉降法（浮游法）细菌最大平均浓度,表面最大,空气洁净度级别,手术室,等级,染菌浓度,名称,手术区,周边区,手术

8、区,周边区,特别洁净,0.2个/30min90皿,0.4个/30min90皿,5个/cm2,100级,1000级,手术室,（5个/m3）,（10个/m3）,标准洁净,0.75个/30min90皿,1.5个/30min90皿,5个/cm2,1000级,10000级,手术室,（25个/m3）,（50个/m3）,一般洁净,2个/30min90皿,4个/30min90皿,100000,5个/cm2,10000级,手术室,（75个/m3）,（150个/m3）,级,准洁净,5个/30min90皿,5个/cm2,300000级,手术室,（175个/m3）,注：1、浮游法的细菌最大平均浓度采用括号内数值。细菌

9、最大平均浓度是直接所测的结果，不 是沉降法和浮游法互相换算结果。,2、1级眼科专用手术室周边区按10000级要求。 3、90皿为采样直径90mm的培养皿。,23,洁净辅助用房等级标准（空态或静态）,沉降法（浮游法）细菌最大平,等级,表面最大染菌浓度,空气洁净度级别,均浓度,0.4个/30min90皿（10个/m3）,5个/cm2,1000级（局部100级）,1.5个/30min90皿（50个/m3）,5个/cm2,10000级,4个/30min90皿（150个/m3）,5个/cm2,100000级,5个/30min90皿（175个/m3）,5个/cm2,300000级,24,主要洁净辅助用房分

10、级,等级,用房名称,需要无菌操作的特殊实验室,体外循环灌注准备室,刷手间、消毒准备室、预麻室、一次性物品、无菌敷 料及器械与精密仪器的存放室、护士站、洁净走廊、 重症护理单元（ICU),恢复（麻醉苏醒）室与更衣室（二更）、清洁走廊,25,二、手卫生效果的监测方法,（一）采样时间：在接触患者、进行诊疗活动前采样。 （二）采样方法：被检者五指并拢，用浸有含相应中和剂 的无菌洗脱水液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指跟到指 端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30cm2，涂擦过程中 同时转动棉拭子；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投 入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时送检。,26,外科手消毒监测采样

11、,2,（三）检测方法：将采样管在混匀器上振荡20秒或用力 振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭 菌平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入已溶化 的45-48的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀， 待琼脂凝固，置361温箱培养48h，计数菌落数。 （四）计算方法：,细菌菌落总数（cfu/cm2）=平板上菌落数稀释倍数/ 采样面（cm2）,28,（六）结果判断：,医务人员手卫生规范4.4手消毒效果应达到如 下相应要求：,卫生手清毒，监测的细菌菌落总数应10cfu/2 外科手消毒，监测的细菌菌落总数应5cfu/2,29,医务人员手卫生规范81监测要求 医疗机构应每季度对手术室、

12、产房、导管室、层 流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护 病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、 感染疾病科、口腔科等部门工作的医务人员手进行消毒 效果的监测；当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有 关时，应及时进行监测，并进行相应致病性微生物的检 测。,30,三、物品和环境表面消毒效果监测,（一）采样时间：在消毒处理后进行采样。 （二）采样面积：被采面积100c2取全部表 面；采样面积100 c2，取100c2,31,（三）采样方法（棉拭子法、压印法两种） 棉拭子法：用55cm的标准灭菌规格版，放在被检物 体表面，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭 子，在规格板内横竖往

13、返均匀涂抹5次，并随之转动棉 拭子，可连续采样14个规格板面积。剪去手接触部 分，并将棉拭子放入装有10ml含相应中和剂的试管 内，立即送检。门把等小型物体则采用棉拭子直接在 物体表面按一定顺序涂抹采样，结果计算用cfu件表 示。,32,1、步骤（在25cm2规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，连 续采4个规格板面积）,33,34,2、检测方法：,（1）细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用 力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭 菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45 48的营养琼脂1518ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝 固，置361左右温箱培养48h，计算菌落数

14、。 （2）致病菌检测,检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应 指标的检测,35,（3）计算方法：,细菌菌落总数（cfu/cm2)=平皿上菌落平均数采 样液稀释倍数/采样面积（cm2),36,（四）结果判断,标准值,环境类别,范围,菌落总数cfu/cm2,致病菌,类 层流洁净手术室、层流洁净病,5,不得检出,房,普通手术室、产房、婴儿室、,类,早产儿室、烧伤病房、,5,不得检出,供应室无菌区,儿科病房、妇产科检查室、注 射室、急诊室、,类,换药室、治疗室、化验室、,10,不得检出,供应室清洁区、,各类普通病房和房间,类 传染病科及病房,15,不得检出,注：致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌

15、。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新,生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。,37,四、使用中消毒液染菌量测定,（一）采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与 灭菌器械保存液；,（二）采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸 管吸取1.0ml被检样液，加入9.0ml含相应中和 剂的采样管内混匀；,38,（三）检测方法：,1、涂抹法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含 相应中和剂的采样管内混匀，用无菌吸管吸取上述溶 液0.2ml,滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个 平行样，一平行样板置20培养7d，观察霉菌生长情 况，另一个平板置37 温箱培养72h，计算菌落数， 同时检测致病菌。

16、,消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数50,39,2、倾注法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含 相应中和剂的采样管内混匀，分别取0.5ml放入2只灭 菌平皿内，加入已溶化的45-48的营养琼脂15ml- 18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置20 培养7d,观察霉菌生长情况；另一平板置37温箱培养 72h，计数菌落数，同时检测致病菌。,消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数20,40,（三）结果判断：,使用中消毒液染菌量100cfu/ml,不得检 出致病菌；无菌物品保存液应无菌生长。 注意：采样时应无菌操作，正确选用中和剂，采 样后1小时内检测。,4

17、1,医院需要常备消毒剂的中和剂,消 毒 剂,中 和 剂,含氯（碘）消毒剂,硫代硫酸钠（0.1%1.0%),（有效氯或碘0.1%0.5%),过氧乙酸溶液（0.1%0.5%）,硫代硫酸钠（0.1%0.5%),过氧化氢溶液（1.0%3.0%）,硫代硫酸钠（0.5%1.0%),1%双甲酮与0.6%吗啉的混合液,甲醛溶液（1%）,0.1%0.5%亚硫酸钠,25%氢氧化钠,戊二醛溶液（2%）,甘氨酸（1%）或甲醛（1%）,季按盐类消毒剂,Tween80（0.5%3.0%)+卵磷脂,（0.1%0.5%）,（1.0%2.0%）,酚类消毒剂,Tween80（0.5%3.0%),碱类消毒剂,等当量酸,酸类消毒剂,

18、等当量酸,酸性氧化电位水,硫代硫酸钠（0.5%)+PBS(0.03mol/L),42,复方消毒剂,Tween80 +卵磷脂,+硫代硫酸钠,消毒实验用试剂,磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，ph7.2）,无水磷酸氢二钠,2.83g,磷酸二氢钾,1.36g,将各成分加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调ph至7.2-7.4，于121 压力蒸汽灭菌20min备用。,无菌检验用洗脱液,吐温-80,1g,蛋白胨10g,氯化钠,8.5g,将各成分加入到1000ml 0.03mol/LPBS液中，加热溶解后，调ph至7.2-7.4，,于121压力蒸汽灭菌20min备用。,43,五、内镜消毒灭菌

19、效果的监测,（一）采样时间：在消毒灭菌后，使用前进行。 （二）采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。 用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液， 从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检 出口收集，及时送检，2小时内检测。,44,4,46,（三）检测方法：将送检液用旋涡器充分震荡，取 0.5ml，加入2只直径90mm无菌平皿，每个平皿 分别加入已经熔化的45-48营养琼脂15ml- 18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于35培养 48小时后计数。,计算方法：菌落数/镜2个平皿菌落数平均值 20。,47,（四）致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡， 取0.2ml分别接种90mm血平皿、

20、中国兰平皿和SS 平皿，均匀涂布，35培养48小时，观察有无致 病菌生长。,（五）结果判断：,消毒后内镜：细菌总数20cfu/件，不能检出致病 菌；灭菌后内镜合格标准为：无菌检测合格。,48,六、血液透析液的监测,（一）采样时间：每月1次。若采样结果超标 时，须重复检查，怀疑或确定病人在治疗中有 热原反映和菌血症时，应随时检测。,49,（二)采样方法：,透析用水：（即自来水经粗滤、砂过滤器、活性 碳过滤器、水软化器（树脂置换）、反渗透装 置、储水罐、出水加压泵等步骤处理后出口的 液体）在反渗水进入血液透析机的位置采样；,50,透析液：（即透析用水与A、B两种液体混合后进 入人体透析之前的液体）

21、应在进入透析器前采 样。,注：疑有透析液污染或严重感染病例时，应增加 采样点，如原水口、软化水出口、透析液配液 口、反渗水出口、贮水罐出口等。,51,5,(三）检测方法：用无菌吸管吸取透析用水、透析 液2.0ml-3.0ml，放入无菌试管，检测时视透析 用水、透析液污染程度分别取原液或10倍稀释液 0.5ml放入2个灭菌平皿内，45-48营养琼脂 15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于 37培养48h，计数并鉴定细菌。,53,（四）结果判断：,透析用水、透析液：细菌总数200cfu/ml，并不得 检出致病性微生物。,内毒素检测：每3个月至少检测一次 内毒素含量2EU/ml，干预限度为

22、1EU/ml,54,七、灭菌质量的监测,压力蒸汽灭菌的监测,（一）物理监测法：每次灭菌应连续监测并记录 灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。 （二）化学监测法：应进行包外、包内化学指示 物监测。采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时， 应直接将一片包内化学指示物置于待灭菌物品 旁进行化学监测。,55,（三）生物监测法：,生物指示剂有芽孢悬液、芽孢菌片以及菌片与培养 基混装（自含式）的指示管。,指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽孢（ACTT7953或SSIK31 株），菌片含量为5.0105- 5.0106cfu/片， 在1210.5 条件下，D值为1.0-1.9min。KT值 19min,ST值为3.9min。

23、,56,1、监测方法为：,将生物指示物置于标准试验懈的中心部位。标准试 验包由16条41cm66cm的全棉手术巾制成。制作方法： 将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层，然后叠 放，制成23 cm 23 cm 15 cm大小的测试包。经一 个灭菌周期后，在无菌条件下取出标准试验包的指示菌 片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，经 561培养7d（自含式生物指示物按产品说明书执 行），观察培养结果。,57,2、采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接 将一支生物指示物，置于空载的灭菌器内，经 一个灭菌周期后取出，规定条件下培养，观察 结果。,3、监测周期：生物监测应每周监测一次。,58,（四

24、）结果判断：,阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性， 试验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组 培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳 性，则灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳 性的细菌是否为指示菌或是污染所致。,59,6,6,溴甲酚子蛋白胨培养液,蛋白胨,10g,葡萄糖,5g,可溶性淀粉,1g,2%溴甲酚紫乙醇溶液,0.6ml 蒸馏水,1000ml,将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，调pH至7.0-7.2，加 入2%溴甲酚紫酒精溶液，于115 压力蒸汽灭菌30min。 置4 冰箱备用。,62,干热灭菌的监测：,（一）物理监测法：每灭菌批次应进行物理监测。监测 方法为将多点温度检测仪的

25、多个探头分别放于灭菌器 各层内、中、外各点，关好柜门，引出导线，由记录 仪中观察温度上升与持续时间。温度在设定时间内均 达到预置温度，则物理监测合格。,（二）化学监测法：每一灭菌包外应使用包外化学指示 物，每一灭菌包内应使用包内化学指示物，并置于最 难灭菌的部位。,63,（三）生物监测法：,指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢（ACTT9372）， 菌片含量为5.0105-5.0106cfu/片，在1602 条件下，D值为1.3-1.9min，KT值19min,ST值为 3.9min。,64,1、监测方法为：将枯草杆菌芽孢菌片分别装入超负荷运转 试管内（1片/管）。灭菌器与每层门把手对角线内，外 角

26、处放置2个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，关好柜 六，经一个灭菌周期后，待温度降至80时，加盖试管 帽后取出试管。在无菌条件下，加入普通营养肉汤培养 基（5ml/管），361培养48h，观察初步结果，无 菌生长管继续培养至第7日。,2、监测周期：生物监测应每周监测一次。,65,（四）结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培 养阴性，若每个指示菌片接种的肉汤均澄清，判为灭 菌合格；若阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴 性，而指示菌片之一接种的肉汤管混浊，判为不合 格；对难以判定的肉汤管，取0.1ml接种于营养琼脂平 板，同灭菌L棒或接种环涂匀，置361培养48h， 观察菌落形态，并做涂片染色

27、镜检，判断是否有指示 菌生长，若有指示菌生长，判为灭菌不合格；若无指 示菌生长，判为灭菌合格。,66,环氧乙烷灭菌,（一）物理监测法：每次灭菌应连续进行物理监测。 （二）化学监测法：每个灭菌物品包外应使用包外化学 指示物，作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌位置 放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，判定其 是否达到灭菌合格要求。,67,（三）生物监测法：,指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢（ACTT9372）， 1、监测方法：常规生物测试包放在灭菌器最难灭菌的部 位（整个装载灭菌包的中心部位）。灭菌周期完成后 应立即将生物指示物从被灭菌物品中取出，361 培养7d（自含式生物指示物应遵循产品说明

28、），观察 培养基颜色变化。同时设阳性对照和阴性对照。 2、监测周期：应每灭菌批次应进行生物监测，,68,（四）结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对 照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌 合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养 阴性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时 应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌 或是污染所致。,69,过氧化氢等离子灭菌的监测 一、物理监测法：,二、化学监测法： 三、生物监测：,指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽孢（ACTT7953） 监测周期：应每天至少进行一次灭菌循环 的生物监测，,70,生物指示菌,生物监测周期 嗜热脂肪杆菌芽孢,压力蒸汽灭菌,每周一次 （ACTT7953）,枯草杆菌黑色变种芽孢,干热灭菌,每周一次,（ACT