荧光分光光度计的自学--熊世威201111002005.ppt

1、荧光分光光度计自学,专业：生态学 姓名：熊世威 学号：201111002005,仪器分析作业（二）,荧光分光光度计的百科解释,荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190650nm，发射波长扫描范围是200800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。,荧光分光光度计

2、基本原理,由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。 物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光,不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱；，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。 在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有

3、良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。,荧光分光光度计结构,（1）光源 为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。 （2）激发单色器 置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。,（3）发射单色器 置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。 （4）样品室 通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固

4、体时，光源与检测器成锐角安排。,（5）检测器 一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。 （6）显示装置 以前，显示装置有数字电压表，记录仪和阴极示波器等，现在，人们可以通过计算机软硬件技术根据不同要求，来选择不同的直观的视频读出方式。,荧光分光光度计的发展历程,荧光分光光度计的发展经历了手控式荧光分光光度计，自动记录式荧光分光光度计，计算机控制式荧光分光光度计三个阶段；荧光分光光度计还可分为单光束式荧光分光光度计和双光束式荧光分光光度计两大系列。其他的还有低温激光Shpolskill荧光分光光度计，配有寿命和相分辩测定的荧光分光光度计等。,荧光分光光度计的特点,1、具有荧

5、光测试光门自动启动功能 2、具有测试数据，自动打印功能。 3、检测灵敏度高，测量范围宽。 4、可连接微机工作站，扩展分析测试功能。 5、自动曲线回归。,荧光分光光度计的功能,1、波长扫描 波长扫描功能主要包括荧光强度和发光强度两种数据模式。通过荧光强度数据模式可以得到样品的激发光谱和荧光光谱，是一种比较常用的方法。 2、时间扫描 时间扫描是在规定的时间间隔内采集被测样品的荧光强度随时间变化曲线。可以用来监测被测样品的物理化学变化，动力学法可被执行。,3、光度值法 使用波长法进行定量，高达20个标准样品能被测量，通过标准浓度的每个点来绘制多边形标准曲线，回归标准曲线的制备可使用一次、二次、三次方

6、的曲线或折线，同时可获得其相关系数R及R2。 4、三维扫描 可以得到三维图、等高线图，快速进行未知样品荧光峰位的测定。 5、强大的图谱处理功能 两个谱图可进行加、减、乘、除运算，也可以计算谱图面积；具有光谱校正和快门控制等。,荧光分光光度计的技术参数,1.光源: 150W 氙灯 2.波长范围:200nm-900nm 3.灵敏度：S/N500(峰对峰) 4.光栅: 1200grooves/250nm blazing 5.波长扫描速度: 最大5000nm/min 6.波长驱动器速度:10,000 nm/min 7.波长精确度:+ 2 nm 8.波长重复性:+ 2 nm 9.狭缝宽度: 1，2，5，10，20 nm 10.尺寸: 518mm(W)604mm(D)272mm(H) 11.重量: 43.7kg 12.电源: 100132V 50/60 Hz或者180240V 50/60 Hz（可选）,1.医学和临床检验生物体试料的临床分析 2.药学和药理学天然药物分析，药品质量控制和药物代谢的研究 3.