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文档简介

1、选择三个重要的知识点整理,第一章基因工程,1 .限制核酸核酸内切酶(限制酶催化剂)主要从原核生物(截断外来DNA,保护自个儿)中分离纯化,识别序列由6个核苷酸(或4、5、8个)构成。 末端的种类:平末端和粘性末端,2.DNA连接酶催化剂,效率,3 .运载体,(1)作用:作为运载体将目的基因转移到宿主细胞球内。 利用这个在宿主细胞球内大量复制目的基因。 (2)种类:质粒、噬菌体诱导体、动植物细小病毒等。 (3)条件:一个或多个酶切位点可以自我复制标识牌基因;(4)一般来说,由于天然运载体往往不能满足人类的所有要求,基因工程将一些天然运载体改造成人造的。 4 .基因工程形成的重组DNA是DNA分子

2、片段的连接,并不是合成DNA分子或转录mRNA的过程,5.DNA连接酶催化剂:不需要铸造模型DNA多聚酶:时,6 .基因操作步骤:目的基因建构表达运载体(核心) 获得导入接纳体细胞球的目的基因检测和鉴定目的基因(1)获得基因组文库(全部)的部分基因实况拉力赛(部分),如cDNA实况拉力赛(2)PCR技术那样扩增目的基因的原理:增加DNA复制指数方式的必要性:模板DNA, 原料(游离的4种脱氧核苷酸)、引物、DNA多聚酶()人工合成(基因小)化学合成: DNA合成器(已知序列)逆转录法:未知序列表达运载体(核): 目的基因、启动子、终止子、标记基因导入接纳体细胞球() 植物细胞球农杆菌转化法:孪

3、生子叶植物、裸子植物的体细胞球或受精卵基因枪法花粉管路法()动物细胞球:显微注射技术接纳体细胞:受精卵(a包括目标基因表达所需的物质; b有全能性) ()微生物细胞球:原核生物(繁殖快、单细胞球多、遗传物质较少)为接纳体细胞球的大肠菌群: Ca处理细胞(受体细胞)目标基因的检测与鉴定: DNA分子杂交技术(原理:碱基互补对)目标基因作为探针,将mRNA翻译成蛋白质:抗原抗体交鉴定:个体生物科学水平.逆转录形成的目的基因中不含内含子的原因: mRNA形成时转录内含子的RNA内含子:能否转录外显子:外显子、外显子的原核和真核生物能否转录非编码区:调控基因的作用(启动子和终止子) 植物基因工程技术利

4、用提高农作物抵抗力的植物生产药。杀虫基因: Bt毒蛋白基因(我国转基因抗虫棉)、蛋白酶催化剂阻化剂基因、淀粉酶催化剂阻化剂基因、植物凝集素基因、1.0 .致病微生物:病毒、真菌、细菌等。 转基因玉米:赖氨酸含量比对照30%,1.2 .动物基因工程:生长素基因导入-提高生长速度导入肠乳糖酶催化剂基因-改善畜产品质量的药物-乳腺生物反应器或乳房生物反应器的优点:易于提取、产量高、质量好, 低成本转基因动物作为脏器移植捐献者的优点:抑制抗原基因的表达、清除抗原决定基因、无免疫移植排斥反应、1.3工程菌一种基因工程药物-重组人胰岛素细胞球因子、抗体、疫苗、激素等。 我国生产:白细胞介素-2,干扰素(糖

5、蛋白,我国首批生产药物),乙肝疫苗,1.4 .体外基因治疗和体内基因治疗:处于初始临床试验阶段,1.5 .基因工程在两种之间移植基因,克服两种间因生殖隔离造成基因交流障碍,定向培育生物新品种1.6 .基因重组:1)有性生殖:非等位基因重组:2)DNA连接技术基因工程、1.7、基因工程原则上只能生产存在于自然段的蛋白质,1.8 .蛋白质工程科学:第二代基因工程基因修饰或基因合成,第二章细胞工程,第一章植物组织培养离体组织, 器官或细胞球愈伤组织植株2 .植物细胞球杂交技术、生殖方式:无性繁殖、脱分化、再分化、外植体、固体培养基、营养:蔗糖、矿元素元素体(无机盐)、荷尔蒙激素:生长素、细胞分裂素(

6、也有赤霉素),注:愈伤组织后需要给予光条件,原理:植物细胞的全能性, 去除细胞贴壁的方法:酶催化剂解法(纤维素酶和果胶酶)、诱导原生质体融合的方法:物理法:离心、振动和电刺激、化学法:聚乙烯管二醇(PEG )、生长素含量细胞分裂素:去分化和根原形成生长素含量细胞分裂素:再分化和芽原形成的诱导,一、植物细胞工程、 杂种细胞球形成的标识牌:产生新的细胞贴壁,植株细胞球杂交的原理:胞质膜的流变性,植物细胞球的全能性,意义:克服不同物种远缘杂交障碍的3植物细胞工程的应用(1)显微繁殖意义:保持亲本优良性状,快速繁殖(2)作物脱毒取材部位:茎尖,根尖(分生区),(3) 人工种子:胚状体和人工种皮(营养物

7、质,抑菌剂),(4)单倍体,(5)细胞球产物的工厂化生产:从愈伤组织中提取紫草红草,(2)动物细胞工程,(1)动物细胞培养1,过程:原代培养幼龄动物的组织块分散在单一细胞球混悬剂细胞中,抑制壁接触,抑制胰蛋白酶和胶原酶, 胰蛋白酶和胶原蛋白酶催化剂、继代培养、2,原理:细胞球增殖,1.0代内,维持正常二倍体染色体组型3,动物细胞培养条件:无菌、无毒营养:糖、氨基酸、增殖促进因子、无机盐、微量元素体、动物血清(液体培养基)温度和PH气体环境(CO2,O2 )、动物细胞培养、植物组织培养、原理目的结果培养液成分、细胞增殖获得细胞球全能性、细胞球或细胞分泌蛋白,脱毒株、显微繁殖、人工种子,获得新株,

8、获得大量细胞球和细胞球产物、无机盐、维生素、荷尔蒙激素、氨基酸、核苷酸、葡萄糖、血清液体培养基、蔗糖、矿物质、维生素、植物激素、有机添加剂固体培养基,(二)动物体细胞核移植技术胚胎细胞核移植体细胞核移植(卵母细胞:减二中期),原理:动物细胞核全能性(三)动物细胞融合1,诱导方法:聚乙烯管二醇、电刺激、灭活细小病毒2,原理:胞质膜流动性(四)单克隆抗体1,原理:免疫原理、动物细胞融合、动物细胞培养2、细胞类型(种)、融合细胞类型(种), 杂交瘤细胞细胞球特点:无限增殖、单抗体生成、优点:专一性强、灵敏度高、产量大,应用:治疗诊断试剂、疾病和药物(生物导弹),第三章胚胎工程,1 .精子发生:为初情

9、期生殖功能衰退(哺乳动物睾丸的曲细精管内),1 )精原细胞、有丝分裂、有丝分裂其中一部分,一次精母细胞,2 )一次精母细胞,MM,4个单倍体精子细胞球,3 )变形:类似蝌蚪,分头首尾。 细胞核-精子头部的主要部分高尔基体膜-精子头部的顶体中心体-精子尾部腺粒体-聚集尾部基部形成腺粒体鞘的其他物质:浓缩、脱落到原生质体。2 .卵子发生1 )场所:卵巢内,输卵管中,2 )从时间:性别分化到生殖功能衰退,3 )过程3360卵原细胞球,有丝分裂,大量卵原细胞球,其一部分,初级卵母细胞(被卵细胞细胞球包围),卵细胞形成,扣分,成熟卵子,m :排卵前后完成(进入输卵管), 一个极体和一个次级卵母细胞m :

10、精子与卵子结合时,生成成熟卵子和第二极体,4 )卵子是否受精的重要标识牌,在卵黄膜和透明带的缝隙中可观察到两个极体,3 .排卵:卵子从卵细胞中排出,4 .受精场所:输卵管中,1 )精子能够收获,2 )卵子准备:更加成熟、2.3 ) 达到过程的掌门人反应,释放掌门人酶催化剂,越过放射冠透明带的反应-防止多精入卵的第一屏障卵黄膜封闭作用-防止多精入卵的第二屏障入卵后,尾部脱离,核膜破裂,形成雄原核后卵子被激活,完成减二分裂,形成雌原核,5 .卵裂期:在透明带内进行, 胚胎总体积略有减少,细胞球进行有丝分裂,6 .直到桑椹胚(3.2个)所有细胞球都有全能性7 .囊胚:内细胞球块发育到各种组织滋养层胎

11、膜胎盘,8 .透明带破裂:孵化,9 .原肠胚:内细胞球块表层细胞外胚层(细胞分化最旺盛) 以下的细胞球内胚层层包围的原肠腔1.0 .试管授精1 )卵母细胞的促性腺激素采集和培养(小)宰母畜卵巢中采集医学超声探测仪,用真空泵抽吸2 ) 精子采集和:假阴道握手法可采集电刺激法:培养法化学诱导法:肝素或钙元素离子载体1.1 .胚胎早期培养:无机盐有机维生素荷尔蒙激素氨基酸核苷酸血清等,1.2 .胚胎移植: 1 )接纳体生殖系统生理变化相同, 同一个大姨妈环境;2 )位于游离态;3 )不发生免疫排斥;4 )连接接纳体子宫正常大姨妈和组织的1.3;胚胎移植基本计程仪程序; 1 )接纳体选择处理;2 )交配或人工受孕;3 )胚胎的收集、检测、保存;4 )移植;5 )检测;14 .胚胎的分割;桑叶胚或囊胚,15 .胚胎干细胞(或称干细胞) : 1 )的特征有:体

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