仪器分析实验薄层色谱4.6.ppt

1、2011年4月1日,色谱法用途与分类 薄层色谱法 薄层色谱基本原理 薄层色谱基本特点 薄层色谱法的主要类型和吸附色谱原理 吸附薄层色谱的吸附剂 展开剂的选择 比移值(Rf值)的求取 实验二 硅胶粘合薄层的活度测定,2011年4月1日,色谱法是分离纯化和鉴定有机物的重要方法之一。 色谱法可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。,2011年4月1日,薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC),固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质）比较进行定性定量。,2011年4月1日,薄层色谱基本原理 薄层

2、色谱（Thin Layer Chromatography）常用TLC表示，它是将固定相均匀地涂在薄板（如玻璃板）上，依靠毛细作用力或重力，使流动相通过固定相的一种色谱。,2011年4月1日,特点： 快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。 试样预处理简单，对试样限制少。 载样量比较大，适用于制备。 仪器简单，操作方便。 分离能力较强。 灵敏度较高。,薄层色谱法的主要类型和吸附色谱原理,吸附薄层色谱法 原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。 吸附系数不等实现分离。 一般极性强的组分K大，Rf（比移值）小；极性弱的组分 K小，Rf值大。 分配薄层色谱法,2011年4月1日,吸附薄

3、层色谱的吸附剂,吸附剂 硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键（吸附性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同而分离。 应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等 硅胶活度与含水量的关系：含水量高，活性级数高，活度低。 活化：加热至105左右，除去吸附水提高活度。（注意温度不可过高）,吸附薄层色谱的展开剂(流动相)洗脱能力 极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序： 水酸吡啶甲醇乙醇正丙醇丙酮乙酸乙酯乙醚氯仿二氯甲烷甲苯苯三氯乙烷四氯化碳环己烷石油醚。,吸附薄层色谱的展开剂（混合剂） 先用单一溶剂展开， 若Rf值太小，则加入一

4、定量极性强的溶剂，（如乙醇、丙酮等）， 如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。,定性参数1,比移值(Rf值) 溶质移动距离与流动相移动距离之比。 Rf =L/L0 L为原点（origin）至斑点中心的距离，L0为原点至溶剂前沿（solvent front）的距离 与组分及色谱条件有关,2011年4月1日,实验二 硅胶粘合薄层的活度测定 一、实验目的 1掌握粘合薄层的制备方法。 2了解粘合薄层活度测定方法。 二、实验原理 硅胶粘合薄层活度的测定方法，目前一般都采用Stahl（斯塔尔）活度测定法，以二甲黄、苏丹红G、靛酚蓝各40mg，溶于100ml挥发性溶剂中，

5、滴加于薄层上，用石油醚展开10cm，应不移动，如改用苯展开则应分成三个斑点，其Rf值分别为：二甲黄0.58，苏丹红019（？），靛酚蓝008，展开时间约为3040分钟，经本法测定合格的硅胶薄层其活度与柱色谱法所定活度的一级相当。,2011年4月1日,三、仪器及试剂 1色谱缸 2二甲黄、苏丹红、靛酚蓝 3硅胶(色谱用)、羧甲基纤维素钠。,2011年4月1日,四、操作步骤1粘合薄层板的铺制： 称取羧甲基纤维素钠(CMCNa) 075g，加入100ml水中加热使溶解，放冷，放置后取14ml,再分次加入硅胶5g，调成糊状后倒在清洁的玻璃板上，可幌动或转动玻板，使其均匀流布于整块玻板上，而获得均匀的液层

6、。将玻璃平放晾干，然后于110活化40分钟，置干燥器中贮存备用。,2011年4月1日,2点样：取羧甲基维纤素硅胶板一块(7515cm)在距板一端lcm处，用铅笔轻轻划一直线作为起始线，在起始线中点用铅笔作一标记(o)，用内径约lmm的平口毛细管点加混合溶液，其直径应为23mm。,2011年4月1日,3.展开,将点好的样晾干或吹干后将板置于盛有展开剂石油醚(沸点6090)的色谱缸中，浸入深度为0.5cm，待展开剂前沿离起始线约10cm处，混合物应不移动，取出硅胶板，待石油醚挥发后，再按同法以苯为展开剂，展开时间约为3040分钟，取出薄层板立即划出前沿线，待苯挥散，观察斑点的位置，,2011年4月

7、1日,2011年4月1日,五、注意事项 1活化后薄层板应贮于干燥器中，以免吸收湿气而降低活性。2点样量不宜太多，否则会拖尾分离不好。3展开剂苯中含水量的多少会影响Rf值，故须用于燥的苯和器皿。4展开剂不要加得过多，起始线切勿浸入展开剂中,2011年4月1日,2011年4月1日,薄层色谱操作方法要求,制板均匀 点样集中 展开(多种方式) 预饱和 显色,2011年4月1日,五十年代中期，斯塔尔（Stahl）发展了一种新型的色谱分析技术薄层色谱法。他在研究植物细胞组成的过程中，探索了高灵敏度的微量分离方法，详细地研究了以往的微量色谱技术，并将依斯迈洛夫提出的色谱方法中的仪器、吸附剂以及操作条件等标准化，