各种染色方法及应用

1、染色方法，革兰氏染色瑞吉染色细胞化学染色免疫组织化染色，革兰氏染色和细胞贴壁，革兰氏染色1884年发明的鉴别不同种类细菌的染色方法。 用革兰氏染色、革兰氏染色、1、碱性染料结晶紫初染菌液涂膜，2、用碘元素溶液媒染剂的作用是提高染料与细胞球的相互作用，使两者更牢固地结合。 3、用乙醇或丙酮洗涤脱色。 脱色后在细胞球内残留结晶紫的是革兰氏阳性细菌，革兰氏阴性细菌的结晶紫被冲洗，细胞球无色。 4、用与结晶紫不同颜色的碱性染料对涂膜进行再染色。 例如复红，原本是将无色革兰氏阴性细菌最后由桃色表现为红色，革兰氏阳性细菌继续保持深紫色，细胞球化学染色是根据形态，使用化学或生化技术定位、定性及半定量分析血球

2、内的各种化学成分的方法。 为研究用于血细胞大姨妈、病理、化学结构的临床诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和发病机制提供重要依据。细胞球化学染色、血细胞化学染色的基本要求是在原位标记细胞组分和结构，反应产物应是有色沉淀物，具有一定的稳定性。 血球化学染色显示糖原、脂质、酶催化剂、蛋白质等。 (1)物理法和化学法固定，物理法干燥和火焰固定，化学法中最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和冰乙酸等。 本文揭示了血细胞化学染色的流程，(二)利用合成于人造的的酶催化剂基质，在酶催化剂的作用下生成降解产物，并与重氮盐结合发生偶氮偶联，形成不溶性偶氮色素，从而证明酶催化剂的存在。 2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧

3、化酶作用于过氧化氢，释放出新的生态氧，使无色联苯胺沉淀为蓝色。普鲁士蓝法：与细胞球内、外铁元素形成酸性第一铁元素氰化钾作用、蓝色第一铁元素氰化铁元素沉淀。 4、谢尔反应：过碘酸氧化细胞球内糖类中的六乙二醇化学基形成苯乙醛化学基，醛化学基和谢尔试剂起作用，使无色品红色沉淀红色。 5、除金属沉积法外，还有其他物理方法，如脂溶性染料染色(显示脂质)、荧光显示、放射自显影及体外生物染色，也常用于临床血液细胞学诊断。 (3)细胞球化学定量粗略估计，根据染色反应的强弱、颜色的浓淡，人为地区分阴性和各种程度的阳性。 百分比法只能反映细胞球的阳性率，不能反映颜色的强弱。 积分法是一种常用的半定量方法，结合等级

4、的估计和百分率，反映出细胞球阳性率的高低和细胞球颜色的强弱。 介绍几种对白血病鉴别诊断具有重要意义的常用细胞球化学染色法。 另一方面，过氧化酶染色(POX )、【原理】粒细胞和单核细胞细胞球内的髓过氧化酶(POX orMPO )将过氧化氢分解，释放出新的生态氧，将白汽油氧化为蓝色汽油，后者进一步变成茶色化合物沉积在细胞质内。M1 - POX ()、过氧化酶染色的临床意义主要用于急性白血病类型的鉴别，急性骨髓细胞白血病多呈呈阳性，M3和M2型最强，MI和M5型弱，有助于区别M3和M5型。 急性淋巴细胞白血病显示POX阴性反应，是急性骨髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重要指标。 二、过碘酸一雪夫(PA

5、S )染色【原理】细胞球内存在糖原和多糖体物质(如粘蛋白、黏蛋白、糖蛋白、糖脂等)的六乙二醇化学基(CHOH-CHOH )被碘元素酸(periodic acid )氧化，而是变成乙醛化学基(CHO-CHO ) 这种反应被称为过碘酸一雪夫(PAS )呈阳性。L1 PAS ()，AML-M6 PAS ()，【临床意义】(1)M6和巨幼贫的鉴别M6的血红细胞PAS呈强阳性，积分明显提高，巨贫、再障碍、贫溶时PAS反应为阴性。 (2)急性白血病类型鉴别ALL，PAS为大块状阳性，AML为阴性，急性单核细胞白血病的情况是原单核细胞和幼单核细胞PAS阳性，积分高，阳性颗粒小而多，呈分散分布。 三、骨髓铁元

6、素染色【原理】健康人骨髓中的贮存铁元素主要存在于骨髓小粒和幼血红细胞中，骨髓中的铁元素在酸性环境下与铁氰化钾起作用，形成普鲁士蓝反应，形成蓝色铁氰化铁元素沉淀，定位于含有铁元素的部位，反映骨髓中铁元素的贮存量。细胞球外铁元素、细胞球内铁元素、环状铁元素粒幼细胞球，【临床意义】骨髓铁元素染色是诊断铁缺乏性贫血和指导铁剂治疗的重要方法，也是诊断铁粒幼细胞贫血的有效方法。 “基本原理”免疫组织应用免疫学基本原理抗原抗体反应，即抗原和抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标识牌抗体的显色剂(萤光素、酶催化剂、金属络离子、同位素)显色来定位、定性和定量研究组织细胞内抗原(多肽与蛋白质)。免疫组织(组织)化

7、(学)、1 .阻断内因性过氧化酶活性2 .封闭液：3.加入一次抗体(保存液稀释)4.加入二次抗体(免疫组织化试剂盒中)5.发色6 .封闭液、免疫组织化工序、免疫组织化技术的优点，1、专一性强2、感受性强3，定位正确， 形态与功能相结合，流式细胞术、34、文档家-、流式细胞术(FLOW CYTOMETRY )利用流式细胞仪测定细胞球和其他颗粒性物质的物理、化学特性。 借鉴落射荧光显微镜技术和血细胞计数的原理，对云同步利用荧光染料、激光技术、单阻技术和计算机技术的发展，可以大幅度提高检测速度和统计精度，并且可以从同一细胞球对多个残奥仪进行云同步测量，为生物医药和临床检验学的发展提供了新的视点和有力的手段。流式细胞术、35、文档家-、FC500、36、文档家-、37、常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm )发光波长(nm )用途色FITC 488 525免疫荧光绿色PE(RD1 ) 488 575免疫荧光橘红色ecd488免疫荧光橘红色PECy7 488 755免疫荧光红pi488dna染色橘红色pecy724885免疫荧光品红色PerCP 488 670免疫荧光红to488RNA染色绿色PNH (阵发性睡眠性血色素尿)，38， 文件的家-，HbF (胎儿血色素)检查，