细菌的分离培养与鉴定ppt课件

1、细菌的分离、培养和鉴定、培养基的制备、消毒和灭菌、三种细菌的接种和四种细菌的生化反应、1、培养基的制备，步骤：1称药、2溶解、3调节酸碱度5、过滤、分装、6包扎和标记、7灭菌、2消毒和灭菌、物理灭菌：干热灭菌：150-170，1-2小时；高压釜121(101.53千帕)，15-30分钟；其他：过滤灭菌和紫外线灭菌。化学消毒：主要使用一些化学消毒剂，如：75酒精，1溴代丁胺等。3.三种细菌的分离、接种和培养。细菌分离方法：稀释法、平板分割线法。细菌接种方法：斜面培养基接种法、液体培养基接种法、穿刺接种法、倾注平板法和平板涂布法。细菌培养方法：好氧培养法、CO2培养法、厌氧培养法、4，3.1细菌分

2、离培养法、连续稀释法、平板分割线分割线分离法：该方法常用于分离含菌量较多的样品，如混合菌。连续划线分离法：这种方法通常用于分离和培养样本中的细菌或细菌很少的培养物，5，6，1区，2区，3区，4区，1区，2，3，4区，平板划线法(学生操作)，7两个相邻的区域应该有重叠的区域。结果观察：观察各区的生长情况，看是否有单个菌落生长出来；应记录菌落的形态、颜色、大小、边缘和透明度。8，将平板送到37培养箱中培养24小时。结果(必需)两种单个菌落分成四个区域，无杂菌，琼脂不破碎。接种了9、10、3.2个细菌。斜面接种法主要用于单个菌落的纯培养、菌种保存或细菌某些特性的观察。液体接种法主要用于一些液体生化试

3、管或发酵接种。穿刺接种该方法主要用于半固体培养基、明胶和双糖管的接种。11，(1)斜面琼脂培养基接种法(2人一组)，大肠杆菌/枯草芽孢杆菌/葡萄球菌，送培养24小时(2人一组)，一组37个恒温箱，一组60个恒温箱，一组4个冰箱，接种细菌后斜面上划线，12，(2)液体培养基接种法(2人一组)，1。菌株(任选一种)大肠杆菌/枯草芽孢杆菌/葡萄球菌2。用pH5.0/7.2/9.0营养肉汤分别接种各菌株。把它送到37培养箱24小时，13。液体培养基、沉淀生长、混浊生长、表面生长、14、(3)琼脂半固体接种法(1人)1。大肠杆菌/枯草芽孢杆菌/葡萄球菌；2.用接种针接种；3.在37培养箱中孵育24小时；

4、15，3。半固体培养法观察细菌是否有力量；1，3:力量：云状；2:无动力：沿穿刺线生长并增厚；16，4。细菌的生化反应。1糖的发酵)2 IMViC试验、靛蓝基质产生试验、甲基红试验、钒磷试验、柠檬酸利用试验、3硫化氢产生试验、4尿素分解试验、17糖发酵试验，不同的细菌具有不同的分解糖和代谢物的能力。例如，大肠杆菌可以发酵葡萄糖和乳糖；痢疾志贺菌能发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖。即使两种细菌能发酵相同的糖，结果也是不同的。例如，大肠杆菌有甲酸脱氢酶，它能进一步将葡萄糖发酵产生的甲酸分解成CO2和H2，从而产生酸和气体；然而，痢疾志贺氏菌缺乏这种酶，葡萄糖发酵只产生酸而不产生气体。18，吲哚(产生吲哚

5、)试验，一些细菌有色氨酸酶，它能分解蛋白胨中的色氨酸产生靛蓝基质，这是无色的，不能直接找到。此时，几滴吲哚试剂滴在培养基的液面上，上层为玫瑰红，上层仍为黄色，为阳性。19、甲基红试验，将细菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，37培养48小时，加入3滴甲基红试剂。大肠杆菌等细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，但丙酮酸并不凝结成乙酰甲基甲醇，而是转化成甲酸、乙酸等酸性物质。培养基中有许多酸，而且酸碱度很低，所以它是红色和阳性的。然而，好氧生物将丙酮酸转化为乙酰甲基甲醇，培养基中酸含量少，酸碱度高，呈黄色阴性。20，VP(Voges-Proskauer)试验表明，大肠杆菌和产气大肠杆菌都能发酵葡萄糖、产酸和产气，但不能

6、区分。但产气杆菌能将丙酮酸脱羧成中性乙酰甲基甲醇，在碱性溶液中氧化生成双乙酰，双乙酰与含胍化合物反应生成红色化合物，对VP试验呈阳性。大肠杆菌不能产生乙酰甲基甲醇，因此VP试验为阴性，21，柠檬酸利用试验，将细菌接种在柠檬酸盐培养基上，37培养48小时。产气杆菌等细菌可以利用柠檬酸盐作为碳源，分解柠檬酸盐生成碳酸盐，使培养基呈碱性。培养基中的指示剂(溴百里酚蓝)由浅绿色变为深蓝色，表明柠檬酸盐利用试验呈阳性。大肠杆菌不能分解柠檬酸盐，培养基颜色不变，为阴性。22，H2S生产，将细菌接种在乙酸铅培养基中，在37培养24小时后观察结果。有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化氢，穿刺部位呈深棕色，表示反应呈阳性。如果培养基颜色没有变化，则为阴性。23、尿素裂解，在尿素培养基中接种细菌，在37培养1824小时。变形杆菌能快速分解尿素(24小时)产生大量氨，使培养基呈碱性和紫红色，这是一种积极的反应。24，实验结束后，将接种针和接种环放在适当的位置，并将它们放好！将所有原始应变