各种灭菌法详细介绍

1、各种灭菌法的详细介绍灭菌法系是指用适当的物理或化学手段灭绝或除去物品中生存的微生物的方法。 本法适用于无菌制剂、原料、辅料以及医疗器械等物品的灭菌。 无菌物品是指物品中不含有任何活着的微生物。 但是，对于任何灭菌制品，绝对无菌既不能保证也不能试验。 在物理或化学手段灭菌试验中，由于微生物的灭菌遵循对数规则，所以被灭菌物品的无菌标准一般用物品灭菌后微生物存活的概率无菌保证水平SAL (Sterility Assurance Level )来表示。 最终灭菌制品的微生物生存的概率超过10-6是要不得。 灭菌产品达到的无菌保证水平可以通过验证确定。 灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检查，而

2、依赖于生产过程中合格的灭菌技术、严格的GMP管理和良好的全面质量保证体系。 灭菌工艺的确定应综合考虑被灭菌物品的性质、灭菌方法的有效性和经济性、灭菌后物品的完全性和稳定性等因素。 灭菌普兰的验证是无菌保证的必要条件。 灭菌普兰计程仪验证后，才能正式使用。 验证内容包括制定验证方案和制定评价标准。 确认灭菌设备的技术资料齐全，安装正确，工作正常(确认安装)。 确认牛鼻子控制器特罗尔机器和修正器在规定的残奥仪表范围内正常动作(运行确认)。 使用灭菌物品或模拟物品进行反复试验，确认灭菌效果是否符合规定(性能确认)。 汇总和完善各种文件和记录，制作验证报告。 在日常生产中，监视灭菌计程仪柱的运转状况，

3、确认重要的残奥仪表(例如温度、压力、时间、大气湿度、灭菌瓦斯气体浓度及吸收的放射性射线吸收量等)在验证规定的范围内。 灭菌普兰计程仪请定期重新验证。 灭菌计程仪程序变更的情况下(包括灭菌物品的装载方式和数量的变更)，进行再验证。 产品的无菌保证与灭菌前的产品被污染的程度和污染菌的特性有关。 因此，必须严格监测被灭菌产品灭菌前的微生物污染水平和灭菌耐受力，在生产各阶段采取多种措施降低污染，确保微生物污染在规定的限度内特罗尔。 灭菌后，灭菌的东西不要再次被污染。 在任何情况下，容器及其密封系统都要求产品在有效期内满足无菌要求。 灭菌方法常用的灭菌方法有湿热灭菌法、干热灭菌法、瓦斯气体灭菌法、辐射消

4、毒法和过滤灭菌法。 根据被灭菌物品的特性，可组合一种或多种方法进行灭菌。 在产品允许的范围内，尽量选择最终灭菌法(即，将产品分装到包装容器后进行灭菌)进行灭菌。 如果产品不适合采用最终灭菌法，可以选择过滤灭菌法或无菌生产技术来达到无菌保证要求，如果可能，对非最终灭菌的产品进行补充灭菌处理(如流通蒸汽灭菌)。一、湿热灭菌法本法系将物品放入灭菌库内，用高压饱和蒸汽、过热水淋浴等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸变性，杀灭微生物的方法。 该方法灭菌能力强，应用于热灭菌中最有效、最广泛的灭菌方法。 药品、容器、培养基、无菌服、橡胶塞等高温和湿气不变或破损的，可以用本法灭菌。 流通蒸汽不能完全消灭细菌孢子

5、，可作为耐热无菌制品的辅助灭菌手段。湿热灭菌的条件通常采用12120min或11640min的普计程仪柱，也可以采用其他温度和时间常数。 也就是说，必须保证物品灭菌后的SAL10-6。 对于热稳定的物品，可以采用过度杀菌法，其SAL必须是10-12。 热敏产品的标准灭菌时间F0可低于8min，但在整个生产过程中，应严格监测产品中污染的微生物，采取各种措施防止耐热菌污染，降低微生物污染水平，确保灭菌产品达到无菌保证要求。在采用湿热灭菌的情况下，被灭菌物品需要适当的包装和装载方式，以保证灭菌的有效性和均匀性。在湿热灭菌过程验证时，进行热分布试验、热渗透试验和生物指示剂的验证试验。 在确定灭菌槽空载

6、及不同装载时的腔室内的热分布状况及可能存在的冷点的空载条件下，121下的腔室各点的温度差为1； 使用插入实际物品或模拟物品内的温度探针，在灭菌箱不同的装载时，确认最冷点物品的标准灭菌时间(F0)达到了设定基准的生物指示器，进一步确认不同装载时的冷点的灭菌物品达到了无菌保证水平。 本法常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(sporesofbacillusstearothermophilus )。二、干热灭菌法本法系指的是物品在干热灭菌槽、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气杀菌、去除热原物质的方法。 适用于耐高温但不应用湿热灭菌法灭菌的物品的灭菌，例如，玻璃器具、金属制容器、纤维制品、固体试剂、液

7、态残奥翅片等可以用本法灭菌。干热灭菌条件一般为160170120min以上、17018060min以上、或者25045min以上，也可以采用其他温度和时间残奥计。 总之，灭菌后的产品必须保证是SAL10-6。 干热过度杀菌后产品的SAL必须是10-12。 在这种情况下，物品不需要进行灭菌前的污染微生物的测定。 250 45min的干热灭菌也可以去除无菌产品外包装容器和填充物生产中涉及的热原料物质。采用干热灭菌时，被灭菌物品需要适当的包装和装载方式，保证灭菌的有效性和均匀性。干热灭菌法的验证和湿热灭菌法一样，必须进行热分布试验、热透过试验、生物指示器验证试验或细菌内毒素灭活验证试验。 确认灭菌柜

8、内的温度分布满足设定的标准，确定最冷点位置，确认最冷点基准灭菌时间(FH )满足设定的标准，满足SAL要求。 常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus subtilis )。 细菌内毒素灭活验证试验是证明去热原过程有效性的试验。 一般将1000单位以上的细菌内毒素装入去热原的物品中，证明该去热原工艺能使内毒素至少下降3个对数单位。 用于细菌内毒素灭活验证试验的细菌内毒素一般是大肠菌群内毒素(Escherichia coli endoxin )。 验证一般采用最大加载方式。三、尺辐射消毒本法系是将灭菌制品放入从适当的放射源放射的射线和从适当的电子加速器产生的电子束

9、中进行电离放射性射线，对微生物进行杀菌的方法。 本法最常用的是60Co-射线灭菌。 医疗器械、容器、生产辅助用品、不受辐射破坏的原料药及产品等可以用本法灭菌。用尺辐射消毒灭菌的无菌制品应满足sal10-6。 射线辐射消毒控制的残奥仪主要是放射性射线量(指灭菌物品的吸收量)。 制定本接触剂量应考虑灭菌物品的适应性、可污染微生物的最大数量和最强抗放射性射线能力，所用接触剂量应事先验证其有效性和安全性。 常用的辐射消毒吸收量为25kGy。 最终产品、原料药、部分医疗器械应尽量以低放射性射线灭菌。 在灭菌前，测定被灭菌物品微生物污染数和抗放射性射线强度，做评估在灭菌过程中给予该灭菌物品的无菌保证等级。

10、在灭菌时，使用适当的化学或物理方法监视灭菌物品吸收的放射性射线量，向一盏茶证明灭菌物品吸收的放射性射线量在规定的限度内。 在采用与灭菌物品一起放射的放射性剂量订正的情况下，将剂量订正放置在规定的部位。 初次安装时剂量修正使用标准源进行校正，定期进行再校正。在60Co-射线放射灭菌法的验证时，除了进行生物指示器验证试验之外，还确认空负荷和装载时的灭菌室内的射线量的分布图、灭菌物品的吸收量及最大和最小的吸收量的分布、灭菌物品的均匀性、灭菌室内的物品的装载方式等。 常用的生物指示剂是短芽孢杆菌孢子。四、瓦斯气体灭菌法本法系是用由化学消毒剂组成的瓦斯气体杀死微生物的方法。 在填充了灭菌瓦斯气体的高压室

11、内进行。 常用的化学消毒剂有环氧乙烷、瓦斯气体状过氧化氢、甲醛、臭氧杀菌(O3 )等，本法适用于瓦斯气体中稳定的物品灭菌。 采用瓦斯气体灭菌法留心灭菌瓦斯气体可燃性、致畸性和残留毒性。本方法中最常用的瓦斯气体为环氧乙烷，通常与80%90%的惰性瓦斯气体混合使用。 该方法可以用于医疗器械、塑胶制品等不能高温灭菌的物质的灭菌。 请不要使用含有氯元素的物质或能吸附环氧乙烷的物质。 另外，使用了气体状的过氧化氢和臭氧杀菌(O3 )的灭菌，由于没有危害性残留物，因此不会危害作业者和环境，适用于空间和物品表面的灭菌。在采用环氧乙烷灭菌时，灭菌库内温度大气湿度灭菌瓦斯气体浓度灭菌时间是影响灭菌效果的重要因素

12、。 可采用以下灭菌条件温度(5410 )相对大气湿度(6010)%灭菌压力8105Pa灭菌时间90分钟灭菌条件应该验证。 灭菌时，使灭菌室成为真空，然后通过蒸汽设定室内温湿度平衡的额定值通过过滤预热的环氧乙烷瓦斯气体。 灭菌过程中，必须严格监测内腔的温度、大气湿度、压力、环氧乙烷浓度以及灭菌时间。 必要时使用生物指示器监测灭菌效果。 本法灭菌过程的控制具有一定的难度，整个灭菌过程应在技术熟练者的监督下进行。 灭菌后，进行新鲜空气置换，使残留的环氧乙烷和其他挥发性残渣消散。 监测环氧乙烷残留物和反应产物，证明不超过规定浓度，避免毒性的发生。在环氧乙烷灭菌法验证时，为了确认灭菌室的密闭性而进行泄漏

13、试验，为了确认灭菌室的密闭性而进行泄漏试验的生物指示器的验证试验，指示器为枯草芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus subtilis )； 在灭菌后的换气次数的验证试验中，确认了环氧乙烷及其对应的反应生成物的含量在限定范围内。 在验证设定修订时，也应该考虑物品包装材料和灭菌室内的物品的排列方式对灭菌瓦斯气体的扩散和渗透的影响。五、过滤除菌法本法系是利用细菌不能通过致密且有孔的滤材的原理，去除气体和液体中的微生物的方法。 常用于热不稳定的药品溶液和原料的除菌。除菌过滤烟嘴以孔径分布均匀的微孔过滤烟嘴作为过滤材料，微孔过滤烟嘴分为亲水性和疏水性两种。 过滤膜的材质取决于过滤物的性质和

14、过滤目的。 药品生产中使用的除菌过滤烟嘴的孔径一般为0.22m以下。 过滤器被过滤的成分没有吸附作用，不能释放物质，纤维不能脱落，含有石棉垫的过滤器不能无效。 使用前，请对过滤烟嘴和过滤烟嘴进行清洁处理，用高压蒸汽灭菌，或者用上线了灭菌。 更换品种和批次时，请先清洗过滤烟嘴，再更换过滤烟嘴。过滤过程中的无菌保证与过滤液的初期生物负荷及过滤器的对数下降值LRV(Log Reduction Value )有关。 LRV是指在规定条件下，用滤液过滤前的微生物数量与过滤后的微生物数量之比的常用对数值。即，LRV=lgN0- LgN式中的N0为产品除菌前的微生物数量。n是产品除菌后的微生物数量。LRV用

15、于表示过滤烟嘴的过滤除菌效率，相对于孔径0.22m的过滤烟嘴，每1cm2的有效过滤面积所要求的LRV为7以上。 因此，过滤除菌时，过滤产品的总污染量应控制在规定的限度内。 为了确保过滤除菌效果，可以使用2个过滤烟嘴进行串联过滤，也可以在填充前再次用过滤烟嘴进行过滤。过滤除菌一般不能对过滤烟嘴在整个过程中的键参数(过滤烟嘴孔径大小和分布、过滤烟嘴完全性和LRV )进行监测。 因此，在过滤除菌前后分别进行过滤烟嘴的完全性试验，即气泡点试验、压力维持试验和瓦斯气体扩散产水量试验。 确认了除菌过滤过程中过滤膜的有效性和完全性。 除菌过滤烟嘴的使用时间不得超过1个工作日。 请验证不那样做。过滤系统的验证

16、包括：过滤系统对过滤液的适应性、过滤材料的溶液污染程度、过滤器的规格、过滤器的灭菌方法、过滤系统的完全性试验、生物指示器试验、过滤液的微生物含量控制和过滤时间、过滤器的寿命等。 上述试验大部分可以由过滤烟嘴制造商进行。 微生物挑战性试验常用的生物指示剂是缺陷假单细胞菌(Pseudomonas diminuta )。对于采用过滤除菌法达到无菌的产品，建议严格监控其生产环境的清洁级，并在无菌环境下进行过滤操作。 相关设备、包装容器、塞子及其他物品应以适当方式灭菌，防止再污染。六、无菌生产技术无菌生产技术是无菌控制条件下必须生产无菌制剂的方法，无菌分装和无菌冷冻干燥是最常见的无菌生产技术。 后者在工

17、艺过程中需要采用过滤除菌法。无菌生产技术应严格监控其生产环境的清洁级，并在无菌控制环境下进行过滤操作。 相关设备、包装容器、塞子及其他物品应以适当方式灭菌，避免再污染。无菌生产过程的无菌保证应在培养基无菌填充模拟试验中验证，试验结果的阳性率不得超过0.1% (信任度为95% )。 在生产过程中，要严格监测生产环境的无菌空气质量、作业人员素质、各种物品的无菌性。无菌生产技术必须定期验证，包括环境空气过滤系统的有效性验证以及培养基模拟填充试验。生物指示剂生物指示剂是一种特殊的活微生物产品。 可用于灭菌设备的性能确认、灭菌程序的验证、生产过程的灭菌效果的监测等。 用于灭菌验证的生物指示器一般是细菌孢

18、子。1 .生物指示剂制造用微生物的基本要求根据灭菌方法不同使用不同的生物指示器，为了制造生物指示器而选择的微生物必须具有以下特性(1)菌种的耐受力必须大于在灭菌制品中所有可污染微生物的耐受力。(2)(2)菌种应无致病性。(3)(3)菌株应稳定。 生存期很长，容易保存。(4)易于培养。 使用休眠孢子时，生物指示剂中的休眠孢子含量在90%以上。1.1 .生物指示剂的制备生物指示剂的制备应按一定程序进行，在制备之前，必须确定所使用微生物的特性例如d值(所谓微生物的耐热残奥计，是在某温度下使微生物90%死亡所需的时间，用分钟表示)的值等。 菌株用适当的培养基(如产孢子的培养基)培养。 培养物必须制成混悬剂，其中孢子数占优势，孢子必须悬浮保存在无营养的液体中。生物指示符中含有的一个或多个孢子可以是多种形式，通常会附着在无生命的载体，例如滤纸条、玻璃板、不锈钢、塑胶制品等上。 孢子混悬剂在安瓿上也可以密封的生物指示剂中有具备培养基系统的物质。 生物指示器应用合适的材料包装和设定有效期。 载体和包装材料必须保证生物指示剂免受污染和损失，能与云同步接触，灭菌剂能穿透，能与生物指示剂和一盏茶接触。 载体和包装应当建立和修订容易储存、运输、取样、转移接种定的原则。有些生物指示剂能直接将孢子接种为液体灭菌物或具有与其相似物理化学特性的替代品。 在使用替代品时，应用数据来证明两者的