特异性抑制Ik1具有抗心律失常的作用

1、Ik1的特异性抑制具有抗心律失常作用摘要目的探讨特异性抑制内向整流钾电流(ik1)是否具有抗心律失常作用。方法采用改良langendorff小鼠心脏灌注系统同步记录心电图、单向动作电位和复极离散度。心律失常是由机械消融房室结和氟烷引起的。结果转基因小鼠房室结消融前后室性早搏发生率明显低于对照组，氟烷诱发室性心动过速阈值浓度明显高于对照组。其机制可能与转基因组的map时间和复极离散度低于对照组有关。结论ik1在心律失常的发生中起重要作用，特异性抑制ik1可能是未来有效的抗心律失常策略之一。【关键词】内向整流钾电流；老鼠。心律不齐抗心律失常作用摘要目的为了进一步深入了解心肌缺血对心肌缺血再灌注的抑

2、制作用。方法采用转基因小鼠表达的显性负胰岛素2.1(TG)和儿童型对照小鼠(wt ),我们研究了心肌缺血再灌注心脏模型对心肌缺血再灌注的抑制作用。关键词特异性抑制1；老鼠；心律不齐临床上，各种原因引起的心肌病和心力衰竭都伴有内向整流钾电流(ik1)的下调1。目前，由于缺乏特异性ik1抑制剂，其下调是否具有有益的抗心律失常作用仍有争议。从理论上讲，抑制ik1会降低静息膜电位的稳定性，促进去极化，增加自律性，并导致心律失常2。然而，抑制ik1可以均匀地延长动作电位时间和不应期，减少心室复极的离散，防止折返的形成，延迟异常兴奋的传递，并具有抗心律失常作用3。在这项研究中，ik1小鼠被转基因特异性抑制

3、，分离的langendorff心脏模型用于通过机械消融房室结和氟烷诱发心律失常。测量了单向动作电位时间和复极离散时间，为讨论上述争议提供了有力依据。1对象和方法1.1建立具有心脏特异性抑制作用的ik1转基因小鼠。将kir2.1选择性过滤位点的标志序列gyg突变为aaa，其c端与gfp和-肌球蛋白重链启动子相连，然后将其所有基因注入c57bl/65jl受精卵，建立转基因小鼠4。通过pcr鉴定gfp表达，阳性表达作为转基因组(tg)和阴性表达作为对照组(wt)。1.2离体灌注心脏的心脏电生理检测用阿维菌素麻醉小鼠，取出心脏，用酪胺浸泡，用灌注针快速连接主动脉。用酪胺(含2.5毫升2)逆行灌注1 2

4、分钟后，将心脏置于langendorff反向主动脉灌注系统中，用充有95%和5%co2的krebs-henselet溶液(37)灌注。灌注压力为80mmhg后，将心脏浸泡在krebs-henselet溶液中，稳定10 20分钟，检测心脏的电生理指标。检测离体心脏心电图时，在心脏周围放置三个ag -agcl电极。单相动作电位通过使用直径为0.01英寸的涂有特氟隆的银线测量，电极的尖端用砂纸打磨，然后放入3m氯化钾溶液中，在4.5v DC电压下用氯气电镀。为了减少对心脏的损伤，将电极轻轻推至心脏表面不到1分钟。1.3房室结消融和氟烷介入诱发的房室结机械消融使用镊子轻轻夹住房室结，导致房室传导阻滞。

5、为了用氟烷诱发心律失常，将不同量的饱和氟烷溶液(17.5nmol/l)注入灌注系统顶部的储水箱(4ml)中。首先，注射300l，然后加上和减去这个量，直到诱发室性心动过速(vt)。1.4统计方法所有数据均以平均标准偏差(xs)表示，并采用t检验进行比较。2个结果表1房室结消融术对离体心脏心律失常发生率和频率的影响2.2单相动作电位的检测为了探讨ik1在心脏兴奋中的作用机制，我们检测了离体心脏的单相动作电位和心室复极离散度。结果表明，甘油三酯组的平均动脉压比甘油三酯组高75%和90%。此外，tg组的心室复极离散度(左心室图-右心室图)明显低于wt组。见表2。表2离体心脏单相动作电位的75%和90

6、%值注：*p0.012.3氟烷对心律失常的影响为了进一步测试ik1的特异性抑制是否能抗心律失常，使用氟烷诱发心律失常。结果表明，甘油三酯组(n=10)诱导的室性心动过速阈值浓度比甘油三酯组(n=10)高67%(见图1)。图1氟烷对心律失常的影响3讨论Ik1在心肌复极后期恢复电导，ik1从正膜电位起点到平衡电位的外向电流在末期起到促进复极和稳定静息膜电位的作用5。此外，在动作电位平台期(20 50mv)，其内向整流特性保持很低的电导，由该电导产生的相对较小的内向电流参与了动作电位平台期的稳定和形成5。许多研究表明，ik1在高血压心肌肥大和心力衰竭以及人类心力衰竭和心肌病的动物模型中下调1。然而，

7、ik1的下调在电重构过程中是否具有补偿性保护作用仍有待阐明。长期以来，由于没有特定的ik1抑制剂，ik1的下调是否具有抗心律失常作用仍有争议。支持抑制由ik1引起的心律失常的研究包括：(1)通过腺病毒转基因技术将kir2.1突变基因转染到豚鼠心脏的一部分，以抑制由ik1引起的心律失常的增加6。(2)临床长qt综合征7型(ik1因系统性kir2.1突变而降低)无心脏结构改变和心脏性猝死，但室性心律失常的发生率增加7。(3)kir2.1和kir2.2敲除小鼠死于完全性腭裂，出生后8 12小时不能进食，心肌细胞内不能检测到IK18。支持抑制ik1抗心律失常的研究主要是药物研究，包括：(1)rp588

8、66及其活性成分terikalant(rp-62719)，其可抑制ik1并具有抗心律失常和抗纤维性颤动的作用9，但后来发现该药物抑制延迟整流钾电流快速激活剂(ikr)的作用比抑制ik1的作用强250倍10。因此，不能认为其抗心律失常作用仅由抑制ik1引起。(2)ik1抑制剂uk66914在大鼠和兔心脏中具有抗缺血/再灌注心律失常作用，但它抑制各种钾电流11。(3)jtv-519抑制ik1并具有抗心律失常作用，但也抑制钠电流和钙电流12。(4)阿米西酞普兰可抑制ik1和室性心动过速，但其作用还包括抑制钙电流13。(5)氯化钡对豚鼠心脏ik1的抑制可以停止心室颤动，但氯化钡也可以抑制其他钾电流14。在本研究中，具有心脏ik1特异性抑制的小鼠品系的存活率与对照组相同，并且没有心律失常。55.8%的心肌细胞表现出转基因表达，但没有心肌肥大，并且ik1在转基因心肌细胞中的抑制程度达到95%4。我们的研究表明，房室结机械消融前后ik1小鼠离体心脏聚氯乙烯的发生率明显高于对照组，且需要较高浓度的氟烷诱导室性心动过速，这高度提示ik1的特异性抑制具有抗心律失常作用。其机制可能是ik1的特异性抑制均匀延