分光光度计测还原糖含量-中国农大生化实验实验报告

1、实验报告实验名称：班级：测试者：实验时间：背景与目的：掌握还原糖含量测定方法之一3，5-二硝基水杨酸比色法，熟悉722分光光度计的主要用途、工作原理和操作流程。实验原理：众所周知，植物中含有一定量的还原糖。利用还原糖的还原性，与3，5-二硝基水杨酸反应生成3-氨基-5-亚硝基水杨酸，具有光吸收性。在一定浓度范围内，物质在540纳米处的光吸收与还原糖含量成正比。通过测量物质的消光值和检查标准曲线，可以得到样品中的还原糖含量。仪器和试剂：722光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)电热恒温水浴锅(型号：双排八孔标签：09035天津中环实验电炉有限公司)电磁炉罗伯瓦尔天平带塞刻度15毫升*9的试

2、管100微升1000微升移液管100毫升*9容量瓶烧杯迫击炮烟囱2mg/ml葡萄糖标准溶液10毫克/毫升3，5-二硝基水杨酸溶液蒸馏水实验步骤：1.标准曲线的生成取7个15毫升带塞子的校准试管，编号，分别加入葡萄糖标准溶液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.0毫升，然后用移液管向每个试管中加入蒸馏水，使最终体积为1.0毫升，摇匀，然后加入1毫升3，5-二硝基水杨酸溶液，摇匀，在沸水浴中准确加热540纳米，以消光值为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。2.从植物样品中提取还原糖称取1克植物样品苹果，放入研钵中，加入少量石英砂，研磨成匀浆，转移到100毫升容量瓶中，用蒸馏水清洗研

3、钵几次，然后将洗涤液转移到容量瓶中70-80毫升，摇匀，在80恒温水浴中浸泡半小时，摇匀数次，即为还原糖浸出。3.还原糖含量的测定将上述提取液冷却至室温后，过滤至滤液超过10毫升。将1毫升滤液放入15毫升带塞刻度的试管中，加入1毫升3，5-二硝基水杨酸溶液，摇匀，在沸水浴中准确加热5分钟，取出，冷却，稀释至15毫升。使用722分光光度计测量OD540值。(做两个重复组，取平均值)。数据整理和计算：编号123456789浓度毫克/毫升0.00000.01330.04000.06670.09330.12000.13330.05310.0525吸光度0.0000.0630.2540.4560.658

4、0.8390.9410.3540.350从标准曲线中找出对应于样品OD540值的还原糖A的量(毫克/毫升)，然后根据以下公式计算样品中的还原糖含量。还原糖含量(%)=a *样品总稀释体积(毫升)/(样品重量* 1000) * 100%将数据代入公式以获得(1)还原糖含量=0.0531 * 15 * 100/(1 * 1000)* 100%=7.96%(2)还原糖含量=0.0525 * 15 * 100/(1 * 1000)* 100%=7.88%(3)平均值=(7.96% 7.88%)=7.92%结果分析：获得的两组数据的吸光度值不同，因此获得的浓度也不同。可能的原因是用塞子校准管稀释时存在终

5、点校准误差。然而，两组数据被平均以将误差减小到允许的范围内。思考问题：1.比色测定的原理和特点是什么？原理：光吸收定律是朗伯-比尔定律。由于物质能够选择性地吸收光，并且其在特定波长下的光吸收与其在特定浓度范围内的浓度成比例，因此通过使用标准溶液获得标准光吸收曲线，然后通过根据获得的吸光度值在标准曲线中找到相应的点，可以知道未知溶液的浓度。吸光法简单、快速、灵敏、准确，应用广泛。2.为什么比色测定法要设置空白，设置空白时应该注意什么？排除溶液中其他因素的影响，在设置空白时注意葡萄糖浓度作为自变量的变化，以保证其他量相同。3.试分析如何测定样品的稀释倍数及其对测定结果的影响。根据实验原理，在一定的

6、浓度范围内，吸光度与还原糖含量成正比，因此所需浓度是已知的，可以通过稀释溶液来实现。如果不在范围内，就会超出比例范围，浓度就会不准确。4.为什么还原糖在稀释前要与3，5-二硝基水杨酸溶液反应？由于稀释前还原糖浓度高，3，5-二硝基水杨酸溶液过量，还原糖可以充分反应。如果先稀释，还原糖的浓度会降低，反应时间会变长，速率会变慢。5.结合实际应用，你认为这个实验的设计有什么不合理的地方？容量瓶在实验中的应用。参考文献：洁年勤基础化学，2000年9月第一版，2008年7月第八次印刷孙颖分析化学实验 2009年3月第一版袁敬明赵强3,5二硝基水杨酸法测定葡萄糖方法的改进(山西大学学报(自然科学版)01，1986722 /view/92586d37ee06eff9aef8079b.html分光光度计使用说明实验总结：这是第一次生化实验，在与同行的合作中还存在着默契不足的问题。我相信在未来的实验中会有