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1、离子交换色谱,运用与分析,主讲：许先融 编辑：谢晓敏 资料搜集：刘佳娜 李春凤 甘权贤 资料整理：李扬帆 刘雁 08中药分析与鉴定（1）班,基本原理：,离子交换色谱 （ion exchange chromatography，IEC） 以离子交换树脂作为固定相，树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。,主要用于分离离子或可离解的化合物，包括氨基酸，多肽，核酸，核苷等各种生物大分子。,离子交换色谱的运用：,分离纯化生物大分子,Po+ZDo=Pb+ZDb,重视,Po:流

2、动相中溶质的浓度； Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度; Do:流动相中洗脱剂的浓度； Db:填料表面上洗脱剂的浓度； Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面上 被置换的洗脱剂的数目；,以离子交换色谱快速纯化 8 一 淀粉酶为例,研究探讨离子交换色谱,本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分离了a- 淀粉酶粗品,其活性 回收率高达96%,比活性达388ug/mg蛋白质纯度提高30倍。此法的研究成功 为大规模制备高纯度 a- 淀粉酶提供了一个新工艺路线。,高纯度的 8 一淀粉酶可作为酶试剂 ,研究生物作用的特性、酶反应机理,测定 生化反应的平衡常数。,1.0 摘要：,2.0实验部分, 2.1标准酶液配制

3、用微量天平准确称取5mg高纯度的 a-淀粉酶试剂,于小离心 试管中,准确加1.0ml水,溶解后 ,在1300r/min的高速离心机上离心5min,小心转移上部清液于另一离心试管中,此液相当于1062u/ml活力.,3.0结果与讨论,3.1 洗脱剂 为获得高的洗脱效率,本实验选用0.02mol/L Tris-2mol/LNacl(PH6.0)体系作为洗脱剂.（Tris-指三羟甲基氨基甲烷 ）,由图2可知 ,在 2.0mol/L以下,随盐浓度的增加 ,洗脱能力增大,活性回收率提高。洗脱液中离子强度对洗脱效率的影 响可归结为离子交换平衡的移动,这种色谱行为表明该固定相具有典型的阴离子交换特性 ,符合

4、离子交换色谱的洗脱规律。但在2.0mol/L以上 ,随盐浓 度增 加洗脱 能力下降。这种反常现象,可能是由于离子交换柱的多功能特性引起。,实验证明,离子交换柱不仅有离子交换的作用 ,而且还表现一定的疏水作用的。并且这种疏水作用 ,随溶液离子强度发生变化 。当洗脱剂 浓度大于 2.0mol/L时,由于溶液的表面张力过大 ,离子交换剂的疏水作用变得明显,对蛋白质疏水缔合作用增强 ,故被吸附 的蛋白质难以洗脱,因而 活性回收率下降。 所以选择抓Nacl浓度为2.0mol/L.,3.3 PH对活性回收率的影响,总结,凡在溶液中能够电 离的物质通常都可以用离子 交换色谱法进行分离。它不仅适 用于无机离子混合物的分离，亦可用 于有机物的分离，例如氨

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