实验7 直接抗人球蛋白实验

1、实验七 直接抗人球蛋白试验,1,学习交流PPT,第一部分 直接抗人球蛋白试验原理,2,学习交流PPT,直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。 直接抗人球蛋白试验阳性,3,学习交流PPT,致敏红细胞,抗人球蛋白,直接抗人球蛋白试验,4,学习交流PPT,抗球蛋白试剂通常有三种： 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG

2、 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3进一步分析。,5,学习交流PPT,直接抗人球蛋白试验临床意义 检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究,6,学习交流PPT,第二部分 直接抗人球蛋白试验操作,7,学习交流PPT,直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？ 解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC),8,学习交流PPT,受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3m

3、in 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5的红细胞悬液（1d压积红细胞19d NS）,9,学习交流PPT,人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）： 1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min，分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份的压积红细胞各5滴混匀，备用； 2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37孵育45min； 3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍体积的NS洗涤3次

4、（1000g离心1min），最后加入NS配制成约5的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞19d NS），备用,10,学习交流PPT,未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）,11,学习交流PPT,标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。按下表加入各反应物： 反应物 待检管 阴性对照 阳性对照 5待检标本RBC 1 5阴性对照RBC 1 5阳性对照RBC 1 多特异性抗球蛋白试剂 1 1 1,受检者标本检测,12,学习交流PPT,混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗

5、C3抗球蛋白试剂，将未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。加1滴IgG致敏5红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心15s，观察凝集，记录结果。,受检者标本检测,13,学习交流PPT,如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。,结果判定,14,学习交流PPT,标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释放出来。 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白，以防止假阴性结果。 离心时间和离心力要按标准操作。 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈阴性反应。 全凝集、