4 灭菌与除菌2.ppt

1、第四章 灭菌与除菌（二）广药生科院周林,内容,一、无菌检查的方法 二、染菌的处理 三、制服染菌的要点 习题,一、无菌检查的方法,肉汤培养法 显微镜检查法(镜检法) 平板划线培养或斜面培养检查法,肉汤培养法,组成：0.3牛肉膏、0.5葡萄糖、0.5氯化钠、0.8蛋白胨、0.4的酚红溶液(pH7.2，呈红色)的酚红肉汤作为培养基。 方法：将待检样品直接接入经完全灭菌后的该肉汤培养基中，分别于37 、27 进行培养，每6 h观察一次微生物的生长情况，并取样进行镜检，该肉汤培养基由红色变为黄色或产生浑浊，即判断为染菌。肉汤培养法常用于检查培养基和无菌空气是否带菌，也可用于噬菌体的检查。,显微镜检查法(

2、镜检法),用革兰氏染色法(Grams stain)对样品进行涂片、染色，然后在显微镜下观察微生物的形态特征，根据生产菌与杂菌的特征进行区别、判断是否染菌。 检查杂菌最简单、最直接，也是最常用的检查方法之一。,平板划线培养,将待检样品在无菌平板或斜面上划线，分别于37 、27 进行培养，一般24 h后即可进行镜检观察，检查是否有杂菌。有时为了提高平板培养法的灵敏度，也可以将需要检查的样品先置于37 条件下培养6 h，使杂菌迅速增殖后再划线培养。,二、染菌的处理,2.1 染菌的原因（3个表格） 从染菌的时间：发酵前、中、后期 从染菌的规模：大批量发酵罐染菌、部分发酵罐染菌、个别发酵 罐连续染菌 （

3、多选题） 从染菌的类型 四环素的发酵过程最怕污染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌； 柠檬酸的发酵最怕青霉菌的污染； 谷氨酸发酵最怕噬菌体污染。,染菌的原因,表一 日本工业技术院发酵研究所1965年对抗生素的发酵染菌原因分析,表2 某厂链霉素发酵染菌原因分析,表3 上海天厨味精厂谷氨酸发酵染菌分析,2.2 染菌的处理（五点）,一、种子带菌及其防治 1）严格控制无菌室的污染 2）在制备种子时对沙土管、斜面、三角瓶及摇瓶均严格进行管理 3）对每一级种子的培养物均应进行严格的无菌检查 4）对菌种培养基或器具进行严格的灭菌处理,二、空气带菌及其防治,空气的净化工艺和设备的设计 过滤介质的选用和装填 过滤介质的

4、灭菌和管理等,2.2 染菌的处理,三、操作失误导致染菌及其防治,而淀粉质原料，在升温过快或混合不均匀时容易结块，使团块中心部位“夹生” 。 灭菌时由于操作不合理，未将罐内的空气完全排除，造成压力表显示“假压”，使罐内温度与压力表指示的不对应。 泡沫染菌。 移种时或发酵过程罐内压力跌零。,2.2 染菌的处理,四、设备渗漏或“死角”造成的染菌及其防治,2.2 染菌的处理,五、噬菌体污染及其防治噬菌体档案,噬菌体是一类病毒，原指细菌病毒，近年来发现真菌、藻类都有噬菌体。 噬菌体体积微小，只有在电子显微镜下才能看见。 是一种非细胞结构的生命，但只有进入宿主细胞才具有生命特征，并具有寄主专一性。 在遗传上研究得较清楚的是大肠杆菌的T系噬菌体。,2.2 染菌的处理,污染噬菌体的处理, 并罐法 轮换使用菌种或使用抗性菌株 放罐重消法 罐内灭噬菌体法 当噬菌体污染情况严重，上述方法无法解决时，应调换菌种，或停产全面消毒，待空间和环境噬菌体密度下降后，再恢复生产。 文献阅读,制服染菌的要点,染菌的原因（回顾） 制服染菌的要点 人物 1 操作人员 2 对空气净化系统的要求 洁净度 3 对蒸汽的要求 蒸汽的质量（稳定、活蒸汽) 4 对无菌室的要求 万级 5