白血病分子生物学分型.ppt

1、白血病分子生物学型、上海血液学研究所主要溶剂、白血病分子生物学、白血病的分子机制白血病分子检查白血病分子检查白血病分子检查的林爽应用、白血病的分子机制、基因(gene):合成有功能的蛋白质多肽链或RNA所需的全部核酸序列。癌症基因：存在于细胞或病毒中，是能够诱导正常细胞转换并获得新生物学特性的基因。肿瘤基因激活的方式：点突变染色体重排基因扩增了肿瘤抑制基因(tumor suppressor genes)，其产物对细胞生长增殖有负面作用，可能抑制细胞的恶变。白血病的分子机制，白血病的分子机制，增殖和分化阻止凋亡，“二次打击”学说，d . Gary Gill Iland Best Practice

2、 16360409-417，白血病的分子检查，Southern blotRT-PCR:染色体破裂点可用于跨越大面积区域的融合基因。嵌套RT-PCR:大大提高反应的特异性，提高放大效率。RQ-PCR:定量放大产物。多PCR:与管道一起放大多个目的段。分子检测白血病定量PCR、实时Quantitative PCR(RQ-PCR)TaqMan探针法、特异性多基因定量成本高、SYBR Green I法、成本低，最适合早期筛查融合曲线功能无模板特异性敏感度低，白血病的分子检查定量PCR，白血病的分子检查定量PCR，CT值：荧光信号在统计上大幅增加时(通过阈值线)，周期数CT值与起始模板量成反比。白血病的

3、分子检测定量PCR、RQ-PCR的检测系统：牙齿系统中内置了96孔PCR测量仪，每个反应孔都有检测PCR反应管荧光强度的监测探针。平均每8-12秒检测一次，实现实时检测目的。系统的电脑系统同时持续分析测试系统中的信息，持续计算每个反应管的荧光强度，最终得到CT值。牙齿系统可以根据标准品的CT值和复印数自动绘制标准曲线，并计算未知样品的目的基因拷贝数。，白血病的分子检查定量PCR，RQ-PCR方法的优点：敏感特异性定量封闭化学(污染风险低)PCR后处理(不需要胶水、照片摄影等)高自动化定性：单点测定定量：大部分据点测量是基因型和SNP鉴定，RQ-PCR白血病的分子生物学检查对白血病诊断分类及预后

4、判断具有以下意义。弥补MIC检查的不足，为研究新型亚型监测白血病小残留病(MRD)牙齿白血病的发病机制奠定了基础，PCR方法检测MRD中常用的分子标记，AML1-ETO，t(8；21)(q22；(q22) 68%原发性AML，M2的阳性率为2040%，M2b的阳性率为M4和M1到90%，MDS和骨髓增殖综合征AML1-ETO白血病细胞具有一定的分化能力，可以分化为成熟的中性粒细胞和嗜酸性细胞。缓解率高，无病生存期长，预后优于其他AML亚型(M3除外)，AML1-阴性ETO，AML1-ETO对初发患者进行t(8)。21) AML1-ETO融合基因的检测和预后判断及制定治疗方案的重要AML1-ET

5、O定性结果不能用于评价患者的MRD状态。RQ-PCR可以实时反映体内AML1-ETO水平。持续定量AML1-ETO转录本水平可以判定复发危险较高的患者，以便早期介入防止血液学复发。PML-RAR，t(15；17)(q22；Q21) 98%M3患者为t(15；17)之后，发现了4种M3特异性包括RAR在内的突变染色体易位t(11)。17)(q23；Q21)、t(5)；17)(q35；Q21)，t(11；17)(q13；Q21)和dup(17)(q 21.3；Q23)，分别生产PLZF-RAR、NPM-RAR、NuMA-RAR和STAT5b-RAR融合基因的临床上，具有PLZF-RAR或STAT5

6、b-RAR融合基因的患者对ATRA治疗不敏感。由于PML-RAR、PML基因破裂点不同，产生3茄子不同PML-RAR异构体约55%的M3患者为L型，40%为S型，5%为V型，每个患者一个茄子PML-RAR融合蛋白形态上S型白血病细胞总是低分化，牙齿患者可以看到L型阴性PML-RAR阳性提示的分子复发往往比林爽复发3-6个月快，并能有效地反映RQ-PCR牙齿发病、治疗、缓解、复发前过程的白血病细胞负荷，在MRD监测中具有比RT-PCR更高的价值。PML-RAR Q22)和t(16；16)(p13；Q22)主要在M4Eo中，10%不伴有异常的酸性细胞M4，M2 CBF-MYH11融合蛋白通过干扰核

7、心结合因子(CBF)的转录激活作用，表明致病CBF-MYH11患者对化疗敏感。CBF-MYH11有多种变异型，最常见的是A型，占80% RT-PCR检查CBF-MYH11的M4Eo监测结果显示，大部分患者完全缓解时PCR牙齿模糊，但部分器官幸存者PCR仍为阳性，最近的研究显示RQ-PCR检查CBF9)(p23；(q34)主要见于M2或M4，伴有M1、MDS-RAEB和DEK-CAN的患者，年龄比较轻，预后差的患者进行分子监测，有助于判断患者的预后，调整治疗方案。BCR-ABL (P190)，T 22)(q34；Q11)成人ALL 1530%和儿童ALL 9号染色体的开裂点与CML相同，但22号

8、染色体破裂点具有异质性。牙齿融合蛋白p190刺激细胞增殖的能力比p210强。在基因工程实验中，p190诱发白血病的特点是早期、发展、恶性程度高，BCR-ABL患者的预后不好，5年存活率为20%，观察缓解后骨髓移植治疗，BCR-ABL(p190)，自身或移植ALL患者需要移植前后BCR-ABL牙齿。19)(q23；(P13)56%的儿童ALL和3%的成人ALL的白细胞数高，高血清乳酸脱氢酶和中枢神经系统症状，预后差异，平均无病寿命(DFS)只有6个月，3年DFS只有20%，只有对这些患者进行强化治疗，才能进行预后核型和E2A21)(p13；Q22) 25%的儿童ALL是儿童ALL中最常见的分子异

9、常，迄今为止在T-ALL，AML或NHL中没有发现t(12)。21)在婴儿白血病中，成人白血病患者中频率低(2%)，这种患者的发病年龄低(2岁10岁)，WBC数量低(50，000/L)，因此现有细胞遗传学方法的检出率只有0.05%，应用FISH或RT-PCR方法测试阳性率因此，TEL-AML1融合基因的早期检测对确定林爽预后的适当治疗方案具有重要意义。包括MLL相关融合基因、MLL基因在内的分子异常在5.2%AML、22%ALL、复合白血病及部分淋巴瘤中可见，尤其在接受托波异位素等相关白血病治疗中也可见。最常见的是t(4；11)(q21；Q23) MLL-AF4融合基因ALL t(9；11)(

10、p22；Q23) MLL-AF9融合基因AML t(11；19)(p13；(q23) MLL-ENL融合基因AML和ALL，MLL相关融合基因，迄今为止MLL相关融合蛋白的致病性还不明确。11)(q21；q23)t(4)；11)发生率因年龄而异。婴儿蛋中最常见的是5070%，儿童和成人中分别有2%，36%的发病年龄低(通常2岁)，白细胞数高，内脏大，中枢神经系统等患者的病情危险。患者对标准治疗方案很可能无效，需要加强治疗。目前应用高剂量Ara-C治疗提高预后。MLL-AF4、2岁婴幼儿急性白血病患者定期进行MLL-AF4融合基因检查，筛选和强化高危患者治疗，提高生存率。RT-PCR支持所有t(

11、4；11)患者首次发病时，检测出MLL-AF4融合基因。牙齿融合基因所涉及的两个基因的分裂点理性是大小，因此PCR必须包含所有的裂痕点，以避免假声结果。TAL1基因重排，t(1；14)(p32；Q11)，TAL1-TCR融合基因3%T-ALL易位将TAL1基因与TCR部位并列，其5段正常转录调控被TCR 5部分取代，后者在T细胞中有高表达，TAL1基因重排，1p32缺失，SIL-TAL1，TAL1基因重排，TAL1基因重排，Ta还没有在B-ALL，AML，T细胞NHL中发现的儿童T-ALL中最常见的非随机遗传缺陷，大部分T-ALL的后线基因和TAL1以上患者的血象高白细胞数，高血红蛋白含量但是

12、伴随TAL1日程曹征患者的4年无事故生存率(EFS)表明，与没有TAL1日程曹征的患者相比，TAL1日程曹征患者分别为5911%和447%，预后较好。BCR-ABL(p210)、t(9；22)(q34；Q11) 90% CML患者BCR-ABL融合蛋白(p210)的酪氨酸蛋白激酶活性高于正常ABL，作用于BCR牙齿ABL激酶活性调节区，5%CML患者可能是隐匿性Ph染色体所致。因此，Ph染色体CML患者可以使用FISH或RT-PCR等更敏感的分子检查手段，BCR-ABL融合基因RT-PCR也可以区分e1-a2和b2-a2/b3-a2的两个茄子BCR-ABL转录本，从而区分ALL患者和CML转录

13、本。BCR-ABL(p210)、嵌套RT-PCR检查BCR-ABL融合基因用于CML移植患者移植后的MRD监控。但是患者的血液学复发之前的624个月，骨髓检查呈阳性。RQ-PCR更好地观察患者治疗(格雷维、骨髓移植等)后BCR-ABL转录水平的变化，反映治疗效果。FIP1L1-PDGFR，del(4)(q12)；Q12)在HES和CEL中可见，其发生频率为23% (0 56%)，裂纹点不同，FIP1L1的各种选择性剪切形式徐璐产生不同的融合蛋白，但所有情况下融合蛋白必须保持毒化框架，保持PDGFR的激酶活性区域。FIP1L1-PDGFR融合蛋白具有不均衡的蛋白酪氨酸激酶活性。基因突变，45%AML患者的核型正常，预后为中等危险群，但实际上是异质性高的群体，通过基因突变检查将分类基因突变分为两个茄子主要类别，Class I突变激活信号传导途径，造