免疫试验1.ppt

1、准备免疫实验课，2012.3.26-5.14第6课24小时实验内容：凝集反应和沉淀反应(116)鼠标腹腔巨噬细胞吞噬实验(211)酶联免疫吸附实验(ELISA直接法)(214)人类外周血单核细胞分离实验(16) 抗原抗体反应凝集反应(试管凝集实验)沉淀反应(双向免疫扩散实验)酶联免疫吸附试验(ELISA)淋巴细胞检测技术外周血细胞分离实验小鼠腹腔巨噬细胞分离和免疫细胞化学染色实验鼠标腹腔巨噬细胞吞噬实验补体依赖性细胞毒实验(CDC)细胞因子检测技术免疫学共同分子生物学技术，实验报告编写原则实验材料：试管、抗凝实验程序及结果：肉眼可见灰质层，1ml血收获xx细胞。结果分析：这次分离细胞比正常人的

2、单个核细胞数量少，可能是实验误差引起的，其次是牙齿患者白细胞减少症引起的。实验设计原则，研究标题：确定研究标题是开展研究工作的首要任务。研究摘要：研究背景、要展开的主要研究(可以说明用什么方法展开研究)、研究的意义(对此次研究的预期成果以及促进科学进步的作用)。研究内容：描述主要的执行任务。研究方案：用什么方法解决研究内容中提到的相关工作？研究的特点和创新：主要科学贡献。标题：XX细胞因子对肺癌细胞凋亡的作用及其机制研究综述：肺癌是最常见的肿瘤之一。XX与多种肿瘤的发生有关，但在肺癌中的作用仍然缺乏报道。本研究利用人肺癌细胞利用流式细胞术分析了XX柔道肺癌细胞凋亡的作用，分析了Caspase3

3、，8，12等，确定了XX柔道肿瘤细胞凋亡的机制。本研究不仅可以进一步揭示XX抗肿瘤作用机制，还为寻找新的肺癌治疗方法提供了研究基础。研究内容：1)XX通过对人类肺癌肿瘤细胞的表达分析，确认了XX表达与肺部肿瘤的关系。2)检查患者血清XX水平，确定辅助诊断肺癌的价值研究方案。1)使用肿瘤组织切片，通过免疫细胞化学染色观察XX在人类肺癌组织中的表达方式。ELISA法检测血清XX水平。研究的特点和创新：本研究说明了XX与肺癌的关系，并提出XX作为肺癌血清学诊断标志物，诱导XX对肺癌细胞凋亡，并说明其作用机制。实验设计测试，肿瘤患者有多种免疫异常。请设计分析肿瘤患者体内巨噬细胞功能的实验。主要有：1)

4、专题2)研究内容3)研究方案4)预计结果，2010级5年制本科生免疫学实验课，讲座：尼维瓦尔3360，试管凝集测定血型抗体效价双向免疫扩散，实验内容，抗原抗体反应分类，凝集反应，琼脂沉淀反应，琼脂沉淀反应试管凝集法测定血型抗体效价，实验目的，凝集实验，抗体效价效价，也称为效价效价，其表达与抗体的稀释倍数有关，一般用牙齿抗体能与该抗原直观反应的最高稀释度来表达。实验材料，实验是个人单位，物品4人组，实验阶段抗体配比稀释。在稀释后的试管中分别加入0.5毫升红细胞。放入样品后，摇动试管，充分混合红细胞和血清。37孵化90分钟后观察结果。抗体(血清)配比稀释法，7个抗体稀释管，编号。各先放0.5毫升生

5、理盐水。将0.5毫升血清放入第一个管道，混合，取出0.5毫升，添加第二个管道等。7管为阴性对照，没有放抗体(血清)。0.5毫升生理盐水，1/60 1/120 1/240 1/480 1/960 1/1920-，1/30血清，观察结果时不要摇晃试管。注意事项，凝聚度判定：4:红细胞全部凝聚，常清化，摇晃时凝聚物分散到皮瓣。3:红细胞大部分聚集，上清2，红细胞的半数聚集，上清稍显，红细胞少数聚集，肉眼可见小凝，红细胞极少数聚集，显微镜下可见凝聚。红细胞在管底界线上明显的小点阴性对比：7管(无抗体)是阴性对血型抗体效价的判定：肉眼可见时血清的最大稀释度是血型抗体的逆价，结果判定方法，预期实验结果，双

6、向免疫扩散实验，双向免疫扩散，双向免疫扩散应用，抗体效价的判定体液中分别为试剂：1 幻灯片前显示组，用5ml吸管吸入预热后的1.5%琼脂4ml，冷却后用纸形打孔，每张幻灯片上打两组孔，添加，37，便笺：时样品铺胶的动作要快，均匀，厚度一致。添加样品时，样品数量要适中，注意不要让样品溢出。吸入抗体和抗原的枪头不能混用。抗原抗体反应淋巴细胞检测技术细胞因子检测技术免疫学中常用的分子生物学技术，免疫学检测技术，抗原抗体反应，凝集反应沉淀反应免疫标记技术，抗原抗体反应的特征，1。抗原和抗体的结合是特异性的交叉反应。2.抗原抗体的结合是可逆转的重力：氢键、质数结合、静电引力、范德华力斥力：电子云产生的斥

7、力3。抗原抗体反应可分为两个阶段。抗原抗体特异性结合阶段可见反应阶段4。抗原抗体的分子比例与抗原抗体的结合是否表现出可见的反应现象密切相关。1.抗原和抗体的结合是特异性的交叉反应。2.抗原抗体的结合是可逆转的重力：氢键、质数结合、静电引力、范德华力斥力：电子云产生的斥力3。抗原抗体反应可分为两个阶段。抗原抗体特异性结合阶段可见反应阶段4。抗原抗体的分子比例与抗原抗体的结合是否表现出可见的反应现象密切相关。1.抗原和抗体的结合是特异性的交叉反应。2.抗原抗体的结合是可逆的重力。氢键、疏水缔合、静电引力、反德斥力：电子云产生的斥力3。抗原抗体反应可分为两个阶段。抗原抗体特异性结合阶段可见反应阶段4

8、。抗原抗体的分子比例是否表明抗原抗体的结合和可见的反应现象，与抗体过量密切相关，抗原过剩区、等价物区、抗原-抗体反应受多种茄子因素的影响。电解质：抗原-抗体反应通常使用0.85%的氯化钠作为稀释液，提供符合浓度的电解质。温度：通常在37度的水浴或孵化箱中发生反应。酸度：适应抗原-抗体反应的酸度为PH68。，将相应的抗体(或抗原)放在颗粒性抗原或吸附在颗粒上的可溶性抗原(或抗体)上，在电解质存在的条件下形成凝聚物的现象称为凝聚反应。絮凝反应的分类，直接絮凝反应间接絮凝抑制试验协同絮凝试验抗球蛋白试验，直接絮凝试验，细菌或红细胞等颗粒抗原直接与相应抗体反应，产生细菌絮凝或红细胞凝集现象。1.幻灯片

9、方法：定性实验菌种鉴定及血型鉴定2。试管法：半定量实验抗体效价滴定、间接(人工)凝集反应(Indirect/Passive Agglutination)、水溶性抗原(或抗体)、间接凝集抑制实验(Indirect Agglutination)此时抗体已与可溶性抗原结合，因此不再出现载体凝集现象。Coagglutination(聚集)，金黄色葡萄球菌细胞壁中的A蛋白(SPA)，可以与人和哺乳动物血清中IgG抗体的Fc段结合。IgG的Fc段和SPA相结合后，其Fab段与李晟抗原相结合，出现不寻常的聚集现象。检测血液、脑脊液及其他分泌液中的微量抗原。抗球蛋白试验，一些血凝反应，如RH红细胞和抗Rh抗体

10、反应抗IGG抗体，在包裹Rh抗体的红细胞之间产生数量多、距离远的联系，从而引起排斥力小的聚集现象。沉淀反应(Precipitation)、血清、蛋白质、细胞分解液、组织唾液等可溶性抗原及其抗体在电解质存在的条件下出现的沉淀物称为沉淀反应。大部分沉淀反应使用半固态琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散，因此也称为免疫扩散。沉淀反应的分类，双向免疫扩散单向免疫扩散免疫扩散对流免疫传记火箭传记电泳免疫传记电泳，双向免疫扩散(Double Immunodiffusion)，在汉川一定距离的地方打两个小孔，将抗原和抗体分别放入琼脂凝胶的小孔内。两个牙齿自由地向周围扩散，相遇，在符合比例的地方形成沉淀线。如果反应体系包含两个茄子以上的抗原抗体系统，那么小孔之间可能会出现两个或更多的沉淀线。牙齿方法常用于抗原或抗体的定性，构成的检查。在中间孔中添加定量抗体，按一定距离在周围打几个小孔，各添加稀释度不同的抗原，形成厚度不同的沉淀线，从而确定抗体的疗效。双免疫扩散，定性实验，两种抗原的相关性检测，双向免疫扩散，单向免疫扩散。牙齿法常用于测定血清IgG，IgM，IgA，C 3等的含量。对流免疫传记电泳，电场中的双向免疫扩散。，传记渗透：电场中相对于固体的溶液的迁移。琼脂是酸性物质，在碱性溶液中带负电，接触的溶液带正电，因此液体会