化学原料药质量研究与质量标准常见问题讨论--余立.ppt

1、化学原料药质量研究及原始记录常见问题讨论,余立O),特性研究-理化、稳定性,对照品研究-标化、校正因子,方法研究-建立、验证,原料药研究的特点,杂质研究-工艺、残留溶剂,1,4,3,2,建立标准时要考虑的问题,Growth,2008 2007 2006,2005 2004 2003,2002 2001 2000,常见研究方法误区以及供参考的经验和体会,新版药典动态对化学原料药质量研究的影响,原始记录与资料表达常见问题及改进建议,主要讨论内容,吸收系数,新药： 尽可能研究详细、全面、规范 仿制药： 重点考察与文献值的一致性 中国药品检验标准操作规范 注意测定方法的准确

2、性与规范性!,物理常数研究,理化常数研究,吸收系数,实验样品的纯度- 精制品、干燥品 实验的条件- 温湿度记录！ （环境、仪器） 温度校正 仪器台间差/编号,物理常数研究,理化常数研究,碘值、皂化值、酸值,引湿性,比旋度,熔点,相对密度,溶解度,吸收系数,黏度,凝点,理化特性与常数研究,新药：考察物质的溶解性能 为药物制剂的剂型选择 为提取、精制工艺的溶剂选择 为检验时供试品溶液的制备溶剂选择 提供参考信息 仿制药：考核仿制药品质一致性提供佐证 （晶型、微粉粒径、成盐程度、纯度）,溶解度试验的目的,问题一：溶剂选择种类不当或不足 毒性（三氯甲烷）；后续试验缺参考 问题二：提供数据不足，定位理由

3、不充分 两端（极易溶解、不溶）才可一点确定 不给折算值 问题三：试验样品质量 精品-与文献核对 3批-确定自己质量标准,溶解度试验常见的问题,按溶解度大小依次排列 极易溶解 不溶或几乎不溶 在同一溶解档中按溶剂极性大小排列 水、甲醇、乙醇；乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚等； 热水或热乙醇放在同一档之首（不用其他热溶剂）,溶解度的表述,酸和碱（注明浓度）中的溶解度放最后,吸收系数,物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml）,液层厚度为1cm时的吸光度数值。 研究意义及应用趋势的改变 作为物理常数：新药考察与仿制药核对 溶出度或含量均匀度用其计算一定研究并放入标准 不用其计算但有紫外吸收也应研究但不用放入标

4、准 拓展鉴别用途,吸收系数研究的关注点,溶剂选择考虑制剂测定用溶剂 一般大于100才用于制剂测定，放入标准 测定溶液浓度既要吸光值在0.307之间，也要兼顾制剂测定溶液浓度 限度范围一般为3%,熔点测定,药典收载三种方法 第一法：测定易粉碎的固体药品 第二法：测定不易粉碎的固体药品（如脂肪、石蜡等） 第三法：测定凡士林或其他类似物质 原始记录问题-方法不对、信息不全 干燥；校正；升温速率；传温液；初熔；全熔； 现象；次数（3次）,标准中的熔点,品种在标准中收载熔点需注意： 第一：由于采用传温液，故收载的熔点宜在200以 下。 熔点在200以上的视需要而订。 第二：应是在熔点以下遇热时晶型不转化

5、，初熔点和 终熔点易于判断的品种；对熔融分解且不易明 确判断的品种也可不订。对于熔融时同时分解 或另有要求的品种，均应在标准中标明。 第三：限度范围一般为24，包括初熔和全熔温度 个别可放宽至6； 另加“熔距”限制的除外,药典附录变化提示 引湿性试验指导原则,重金属检查法： pH测定法： 不溶性微粒检查法： 可见异物检查法： 渗透压摩尔浓度：,引湿性试验原始记录 -容易出现的错误,实验日期（全检合格之后） 实验时间（24小时） 实验温度、湿度 称量瓶提前放置记录,吸湿平衡曲线与临界相对湿度,在相对干燥或较低相对湿度环境中，一些药物或辅料不吸湿或很少吸湿。 随着环境相对湿度的增大，吸湿量缓慢增加

6、。当相对湿度到达某一定值时，药物的吸湿量急剧上升。 吸湿量急剧上升时的相对湿度(RH)即为该药物的临界相对湿度。 药物的临界相对湿度越大，则表明该药物不容易吸湿，相反则容易吸湿。药物生产或贮存在该药物的临界相对湿度以下环境，能够延长药物吸湿平衡到达的时间。,不同无机盐饱和溶液产生的相对湿度,无机盐 温度（） 相对湿度（RH% ） 磷酸氢二钠 Na2HPO412H2O 20 98 硫 酸 锌 ZnSO47H2O 20 90 硫 酸 氢钾 KHSO4 20 86 硫 酸 铵 (NH4)2SO4 20 81 氯 化 铵 NH4Cl 2025 79 醋 酸 钠 NaC2H2O23H2O 20 76 溴

7、 化 钠 NaBr2H2O 20 58 重 铬 酸钠 Na2Cr2O72H2O 20 52 氯 化 钙 CaCl26H2O 24.5 31 醋 酸 钾 KC2H3O2 20 20 氯 化 锂 LiClH2O 20 15,Page 18,干燥失重,重金属,溶液的澄清度,硫酸盐,酸碱度,氯化物,水分,铵盐,结晶性,一般检查项研究,2010年版药典变化提示,pH测定法： 氢氧化钙标准缓冲液 是要用25时取饱和溶液的上清液，所以临用时需核对温度才能取用上清液！ 纯化水：取本品100ml，加饱和氯化钾溶液0.3ml,极弱电解质品种的pH值测定 可采用相同的测定方法,药典附录通用检测方法变化提示,重金属检

8、查法： 甲管（标准）乙管（供试品） +丙管（标准+供试品） 如丙管颜色浅于甲管则将一法改为二法进行检查 勘误！第二法规定乙管（标准）中显出的颜色与甲管（供试品）比较，不得更深。,药典附录通用检测方法的使用,氯化物 5.0ml 常用 硫酸盐 2.0ml 检查法 铵盐 2.0ml 铁盐 1.0ml 注意标准液的取用量！ 应保证灵敏检测的需要！ 建议：必要时改用仪器法判断 2015版药典科研课题,纯化水、注射用水和灭菌注射用水的增修订,纯化水、注射用水的修订 增订：,电导率,氯化物 硫酸盐 钙盐 二氧化碳,替代,总有机碳测定,易氧化物,可任选一项,药典中新检验技术的应用,第一次飞跃,第二次飞跃,有关

9、物质的研究 杂质质控理念的变迁,杂质谱的定义,Impurity Profile （杂质谱）: A description of the identified and unidentified impurities present in a drug substance. 对存在于药品中所有已知杂质和未知杂质的总的描述。,已鉴定杂质 Identified Impurity,特定杂质 Specified Impurity,潜在杂质 Potential Impurity,杂质谱 Impurity Profile,已确证了结构特征的杂质,在质量标准中规定检查并有自己限度标准的杂质。已鉴定或未鉴定,理论

10、推测在生产或贮藏过程中可能产生的杂质实际产品中不一定存在,存在于药品中的所有杂质组成或模式,Click to edit title style,选择 最优,多种 互补,新杂质研究,比较杂质的数与量，一致或基本一致，物质基础相同决定可否桥接已上市药品的安全有效性结果,杂质谱 比较,杂质谱的比较,新方法,分析方法的有效性（氨苄西林钠/舒巴坦钠）,原方法,中国抗生素杂志，2009，34：734,在对各国药典方法比较的基础上确定分析方法,杂质谱的比较多种互补,不同色谱系统（流动相、色谱柱、波长） 不同检测器（uv、DAD） 不同原理的方法 -分离或检测,杂质谱的比较,平行列表、逐峰比较 新杂质个数 单

11、一新杂质量（0.1%） 新杂质总量所占比例（2.0%?）,杂质谱的比较,结构确证常用的方法,毒性快速评价平台,斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。 优点： 杂质用量少 无需知道杂质结构 实验周期短 （34天一个周期）,药物耳毒性检测 利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。 下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后1神经丘消失。,给药后,系统对照组（正常幼体）,色谱峰的归属,建议表达方式：平行列表、图谱叠加 要搞清的重点问题： 杂质产生的途径、属性？ 杂质产生需要

12、的条件？,强制降解试验,强制降解条件的摸索控制 记录 杂质增长10%20%最佳 不一定所有条件 各峰分离程度的考察比较 色谱系统的评价 以图谱和数据为基础，针对实验目的，作出相应的结论！,物料守恒,建议表达方式：列表 要搞清的重点问题： 是否有漏检的杂质？ 是否有需要用校正因子计算的杂质？ 可接受的限度？（仪器误差+响应因子） 个人观点！,杂质含量的计算,对照品 外标法,主成分自 身对照法,加校正因 子的自身 对照法,面积归一化法,标准举例-注射用盐酸阿糖胞苷,对照品,测定,随机 误差,仪器 误差,制备,精制,标定,校正因子,多组分生化药的特点,校正因子测定常见问题,质量研究的标尺 -对照品/

13、标准品,购买的 对照品/标准品,权威性,真实性,准确性,原始记录核查需要检查的问题： - 质量研究所用的对照品/标准品是否 具有合法来源？ - 如果质量研究所用对照品/标准品为 自制品，有否精制和标化记录与标化 结果？,使用购买的对照品,对照品,权威性,真实性,准确性,-发票、标签、批号、分析报告单、盐基/碱基、水分,详细精制方法与记录、质量检验报告标定方法与结果,详细富集精制方法与记录、质 量检验 报告、标定方法与结果,详细合成精制方法与记录、质量检验报告、标定方法与结果,粗品精制,富集精制,合成精制,使用自制的对照品,进行结构确证,Growth,2008 2007 2006,2005 20

14、04 2003,2002 2001 2000,数据标定：用正确的方法由至少3位实验者，不同仪器进行不少于10个数据的测定/核对,待标品质量考察：证明不仅是对的而且还是好的,对数据进行数理统计处理,对照品的标定,标定者 测定结果（%） n 均值% RSD 1. 98.82%，99.12%，99.18%，99.25%，99.17% 5 99.11% 0.17% 2. 98.96%，99.04%，99.24%，98.98%，98.98% 5 99.04% 0.12% 3. 99.12%，98.94%，99.04%，99.04%，99.18% 5 99.06% 0.09% 经Corchan检验，三位标

15、定者的方差没有差异，均来自同一正态分布。用Dixon法检验15组数据中的最大值99.25%，最小值98.82% 均非离群值。 T1-0.05S 置信区间 = X = 99.080.068 n1/2 标定结果的置信区间为99.1599.01%，因此，本批对照品的色谱纯度总均值为99.08%。 ！考虑仪器台间差与人员等单次检验的误差,对照品外标法,优点,缺点,50%,定位易,定量准,要求高,成本高,70%,有条件时首选的方法,主成分自身对照法,优点,缺点,50%,不定位,成本低,定量粗,70%,没条件时首选的方法,面积归一化法,优点,缺点,50%,不需 定位,成本低,定量粗,70%,不提倡使用的方

16、法,影响多 重复性差,加校正因子的主成分自身对照法,优点,缺点,50%,成本 较低,定量较 准确,需标 因子,定位难,70%,杂质与主成分响应因子差异大（超过0.91.1 ） 且对照品不稳定或昂贵时选用的方法,校正因子,响应因子,使用与否,加校正因子的主成分自身对照法,特定杂质峰定位的方法,杂质 对照品,混合 对照品,临时 降解,相对保留时间 +参考图,峰定位,研究与标准的紧密结合,溶剂的选择无依据：溶液稳定性考察 - 溶解度高且稳定 8小时不需提示 4小时提示临用现配或立即进样 2小时改换溶剂 - 无背景干扰或小 溶剂峰、倒峰 - 低毒价廉,柱温的确定,- 不规定 （不需加温且对温度不敏感）

17、 - 25或30 （不需加温但对温度敏感，需保持恒温） - 35 70 （需加温且对温度敏感，需保持恒温） 50 以上要加预热管,检出杂质的数与量 干扰因素 操作的便捷性,检测波长的选择,色谱柱的选择-常见问题,色谱柱与流动相性质不匹配 100%的水或Buffer最好选水相柱（AQ柱 ） 普通C18柱流动相中用到离子对试剂，用后应好好冲 最好专用！ 因色谱柱填料性质已与原来有所不同 在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现！,Click to edit title style,杂质控制,微粒控制,安全性 控制,注射剂所用的原辅料应从来源及工艺等生产环节进行严格控制并应符合注射用

18、的质量要求。,标准 增项,杂质谱的比较,供注射用原料质控重点,应在制剂申报资料中体现！,增设的特色项目,结合药品的制法和工艺特点，以及杂质的特殊性设立特色有针对性检测项目，最大限度解决安全隐患。 人尿制品增加乙肝表面抗原检查：如尿激酶、尿促性素、绒促性素、乌司他丁等 重组品种增加菌体蛋白残留量、外源性DNA残留量如重组人生长激素、重组人胰岛素等。 含不饱和脂肪酸的品种增加甲氧基苯胺值检查：如多烯酸乙酯（P272）等。,增设的特色项目-甲氧基苯胺值,含有不饱和脂肪酸的药物在生产和贮藏过程中易被氧化，初级氧化产物一般不稳定，又可进一步生成醛类等化合物，而甲氧基苯胺值（也称p-茴香胺值）就是ISO推

19、荐的一种对此类降解产物进行评价的手段，欧洲药典附录2.5.36收载了此测定方法。药物的甲氧基苯胺值越高，说明其劣变程度越严重。 测定原理：甲氧基苯胺与醛反应生成醇胺，醇胺脱水生成的醛亚胺可采用紫外-可见分光光度法在350nm波长处测定。,增设有效项目指标-甲氧基苯胺值,注意： 甲氧基苯胺试剂为无色结晶，具有一定毒性，使用时应避免接触皮肤，一旦失误，需用水冲洗15分钟以上。甲氧基苯胺的冰醋酸溶液不稳定，需当天配制使用。以异辛烷作空白做基线校正时，如果测得的甲氧基苯胺冰醋酸溶液的吸光度超过了0.2，则需重新配制试剂。 供试品溶液中加入0.25的4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后应注意避光，在350nm波长

20、处的吸光度随时间的延长缓慢增加，需准确放置10分钟后测定，尽量减小误差。 本试验受水分影响较大，样品及试剂中水分的存在会导致反应不完全，测定值偏低，当样品中水分含量超过0.1%时，可按10g样品加12 g无水硫酸钠的比例脱除水分后测定。另外，应取用新开启包装的供试品。,增设的特色项目-甲氧基苯胺值,2-乙基己酸 -内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录2010年版药典二部（附录 L）； 如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。,2-乙基己酸 勘误： -内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸的原料，增加此项检

21、查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录2010年版药典二部（附录 L）； 如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。 勘误：,目前中国不仅接受了ICH对化学药品中残留溶剂控制的理念，而且结合中国国情，建立了具有中国特色的残留溶剂检查方法。 中国药典2005版中，对残留溶剂的分类及限度标准已经与ICH的要求完全一致，但仅在附录中作为原则性统一要求。 中国药典2010版中，原料药要求在各论项下根据其生产工艺制定残留溶剂检查方法 抗生素原料药几乎所有品种均在各论项下增订了详细的残留溶剂检查方法 从附录走向各论,残留溶剂,如：头孢泊肟酯 残留溶剂 照残留溶剂测定法（附录 P）测定。 甲醇

22、、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯 色谱条件与系统适用性试验 略 内标溶液的制备 取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每1ml中约含200g的溶液，作为内标溶液。,残留溶剂,检测方法选择： 直接进样？顶空进样？等温？程序升温？限度比较？对照品法？标准加入法？内标？外标？ 验证项目确定： 回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？,残留溶剂方法建立、验证与常见问题,检测方法选择： 直接进样？顶空进样？等温？限度比较？对照品法？标准加入法？内标？外标？ 验证项目确定： 回

23、收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？,残留溶剂方法建立、验证与常见问题,原始记录较常发现的问题 连带问题：按无水无溶剂计算,残留溶剂方法建立、验证与常见问题,高聚物 凝胶色谱法（2010年版新增的19个标准）,高聚物-高分子杂质-有关物质 2010版：品种增加,方法多元化 1、 自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝胶G-10（Sephadex G 10）；短柱子的使用，减少分离时间 2、 商品凝胶柱TSK-GEL G2000SWXL ：头孢地嗪（北京所） 3、ODS柱，聚合物-氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所) 4、柱切换（中检所），实现凝胶色谱与反相色谱的统一,盐酸头孢替安聚合物分析

24、方法的比较,Sephadex G-10系统,TSK-Gel G2000swxl系统,0.8ml/min,头孢羟氨苄高分子杂质分析图谱,Sephadex G-10系统,TSK-Gel G2000swxl系统,0.8ml/min,1 - 头孢羟氨苄；2 - 高分子杂质,供注射用原料可见异物检查,头孢他啶： 取本品5份，每份3.0g，加1%碳酸钠溶液（经0.45m滤膜滤过）溶解，依法检查（附录 H），应符合规定。 头孢地嗪钠： 取本品5份，每份2.0g，分别加微粒检查用水溶解，依法检查（附录 H），应符合规定。,可见异物检查法附录方法的变化提示,临用前，也在自然光下目视检查（避免阳光直射），如有可见

25、异物，不得使用。 用于本试验的供试品，必须按规定随机抽样。 方法改变：重复3次，总时限为20秒。供试品装量每支（瓶）在10ml及10ml以下的，每次检查可手持2支（瓶）。 明显可见异物-金属屑、玻璃屑、长度或最大粒径超过2的纤维和块状物等 微细可见异物-如点状物、2以下的短纤维和块状物等） 增加乳状液型注射液,有些品种如碱性药物与玻璃容器久置起反应，产生白点、白块和玻璃屑 有些品种如甲硝唑等与重金属发生反应产生不溶物 有些品种如喹诺酮类药物对金属设备产生腐蚀，易有金属屑 有些品种如胰岛素等提取的生化大分子易产生蛋白沉淀 有些品种如头孢噻肟钠等成盐不完全，溶解度太低，产生白点、白块,引发不合格的

26、部分原因,控制生产环境和过程中的污染-外源异物 考察药物与容器的兼容性-内源异物 考察活性成分的稳定性以及与溶剂/添加物的稳定性-内源异物 药品的质量源于设计 是什么？从哪里来？为什么去不掉？安全性如何？限度多少合适？,可见异物检查的目的,供注射用原料不溶性微粒检查,头孢他啶： 取本品3份，加1%碳酸钠溶液（经0.45m滤膜滤过）溶解制成每1ml中含30mg的溶液，依法检查（附录 C），每1g样品中含10m以上的微粒不得过6000个，含25m以上的微粒不得过600个。 头孢曲松钠： 取本品3份，加微粒检查用水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法检查（附录 C），每1g样品中含10m以上的

27、微粒不得过6000个，含25m以上的微粒不得过600个。,供注射用的原料药增加不溶性微粒检查以保证制剂能符合注射剂的要求 由于光阻法测定结果仅与一定浓度范围内样品溶液成正比，故标准给出了不溶性微粒检查供试品溶液浓度 制剂最多有11个规格，均按每1g样品中含10m以上的微粒不得过6000粒，含25m以上微粒不得过600粒；,强化不溶性微粒等项目控制,强化不溶性微粒等项目控制,供注射用原料不溶性微粒检查,可见异物/不溶性微粒检查,原始记录问题 不详细 无趋势 缺方法摸索及分析 原始记录建议：逐支、固定编号记录,标准统一、规范、明确、严谨典型项目-无菌检查方法,无菌检查是药物安全性风险控制的重要项目

28、之一，但具体检查方法以前标准中均不给出，由检验者自己摸索。抗生素阳性菌选用不注意抗菌谱，存在试验的有效性、一次成功率等问题 对每个品种均要求经过验证，确定样品使用的最适宜方法（直接接种法？薄膜过滤法），最佳溶解方式、最佳冲洗液、冲洗方式、敏感的阳性对照菌等操作关键因素，并将上述内容按统一规范格式在质量标准中单独立项表述详细。,供注射用原料无菌检查,供注射用原料无菌检查,头孢呋辛钠： 取本品3份，加1%碳酸钠溶液（经0.45m滤膜滤过）溶解制成每1ml中含30mg的溶液，依法检查（附录 C），每1g样品中含10m以上的微粒不得过6000个，含25m以上的微粒不得过600个。 头孢曲松钠： 取本品

29、3份，加微粒检查用水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法检查（附录 C），每1g样品中含10m以上的微粒不得过6000个，含25m以上的微粒不得过600个。,无菌检查方法规范表述方式举例,氧氟沙星氯化钠注射液： 无菌 取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1%无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于500ml），每管培养基中加入0.1mol/L硫酸锰溶液1ml，以大肠埃希菌为阳性对照菌，依法检查（附录 H），应符合规定。 乙酰谷酰胺注射液： 无菌 取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1%无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于100ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查（附录 H），应符合规定。,

30、注射剂制剂通则变化重点提示,纯度要高、杂质要少、生物负荷要低 从源头控制杂质的数和量、染菌的数和量、热原或细菌内毒素 重点品种为营养性、无抑菌性、制剂有注射剂型 注射剂用原料注重数量 口服原料也要限定菌属种类（沙门氏菌）,原料药微生物限度检查,注射剂制剂通则变化重点提示,胰岛素（制剂为注射剂） 取本品0.2g,依法检查（附录 J），每1g中含细菌数不得过300个。 胰酶（制剂为口服制剂，来源于动物提取） 取本品,依法检查（附录 J），每1g供试品中细菌数不得过10000个，霉菌和酵母菌总数不得过100个。并不得检出大肠埃希菌；每10g供试品中不得检出沙门菌。,原料药微生物限度检查,注射剂制剂通则变化重点提示,必要时应增设相应的安全性检查，如异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚、降压物质、热原或细菌内毒素等 因为有些药物成分复杂、组分结构不清晰（如多组分抗生素动物来源提取的生化药等）、采用化学手段难于监控杂质 异常毒性：有可能污染生物毒性物质的品种（发酵） 过敏反应：有可能污染异源蛋白或未知过敏反应物质的品种 降压物质：有可能污染组胺、类组胺样物质的品种（腐败）,供注射用原料安全性检查,原料药的安全性指标,用化学手段不能控制组成、杂质无法控制的生物来源品种均增加了异常毒