第六章芳酸类非甾体抗炎药物分析

1、1,第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析,2,目的要求,1、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的结构与性质、鉴别和含量测定的基本原理与方法。 2、熟悉芳酸类药物杂质结构、危害、检查方法与含量限度。 3、了解本类药物的体内分析方法。,返 回,3,一、化学结构与性质 二、鉴别试验 三、特殊杂质检查 四、含量测定,内容提要,4,共性：既有苯环，又有羧基，或另有取代基 分类： 羧基直接与苯环相连 -苯甲酸类和水杨酸类 羧基为磺酸基或通过烃氧基与苯环相连 -其他芳酸及其酯类 本类药物多为固体，有一定熔点，难溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂，但其钠盐易溶于水,含游离羧基的药物可溶于NaOH。,5,第 一 节 分

2、类,水 杨 酸 类,苯 甲 酸 类,其 他 芳 酸 类,6,一、苯甲酸类药物,苯甲酸及其盐,丙磺舒,羟苯乙酯,甲芬那酸,（一）典型药物,7,（二）主要性质,酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基 ，可用NaOH直接滴定测定其含量。 具有苯环和特征官能团,有UV和IR特征吸收。 化学性质：苯甲酸（钠）的中性溶液与FeCl3反应可生成赭色沉淀；丙磺舒受热可分解为Na2SO3或SO2。,8,二、水杨酸类药物,乙酰水杨酸,对氨基水杨酸钠,水杨酸钠,双水杨酯,贝诺酯,（一）典型药物,9,二氟尼柳 diflunisal,水杨酸类药物,10,酸性：基本结构为邻羟基苯甲酸，具有酸性。水杨酸阿司匹林苯甲酸。

3、可用酸碱滴定法测定含量。 芳伯氨基特性 酚羟基特性：与FeCl3生成紫色配合物 水解特性：ASA、贝诺酯、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸；水杨酸、对氨基水杨酸钠和贝诺酯分别检查苯酚、间氨基酚和对氨基酚,（二）主要性质,11,三、其他芳酸类药物,氯贝丁酯,布洛芬,（一）典型药物,12,（二）主要性质,氯贝丁酯：油状液体，遇光不稳定；具有酯结构，易水解。,布洛芬：酸性较弱；可用中性乙醇溶解，用NaOH滴定。,都有苯环和特征基团,具有UV和IR特征吸收光谱,13,酸性： pKa 3 6 无机强酸芳酸碳酸 酚,溶解度： 游离酸不溶于水，溶于有机溶剂 碱金属盐溶于水，不溶于有机溶剂,本类药物的性质小结,酸

4、 + 碱 盐 酸 + 醇 酯,pKa 6.3,pKa 10,14,X、NO2、OH等吸电子取代基存在使酸性增强,CH3、NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱,邻位取代间位、对位取代，尤其是邻位取代了酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强 。,15,芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱，所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法。,芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。,16,取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药

5、物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基的药物可用重氮化偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。,UV,色谱法制剂分析,IR,17,第二节 鉴别试验,与铁盐的反应 重氮化-偶合反应 水解反应 分解产物的反应 紫外吸收光谱 红外吸收光谱,18,一、FeCl3反应,具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物,19,三氯化铁反应（水杨酸类）： R-OH + FeCl3紫色络合物 R-OCOCH3 +H+ R-OH + FeCl3紫色,pH4-6,20,21,直接：水杨酸、对氨基水杨酸钠、双水杨酯、水杨酸二乙胺、酚磺乙胺、对乙酰氨基酚,水杨酸 ChP（2000） 鉴别 （1）取本品的水溶液，加三氯化铁试液1滴，即显

6、紫堇色。,间接：阿司匹林、贝诺酯,阿司匹林 ChP（2000） 鉴别 （1）取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。,22,与羟胺、铁盐反应（其他芳酸类）： 氯贝丁酯（布洛芬）,异羟肟酸铁 （紫色）,氯贝丁酯,23,二、重氮化-偶合反应： 具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基药物的反应,-萘酚,橙红色,贝诺酯有该反应吗？如何进行？,对氨基水杨酸钠,24,直接：对氨基水杨酸钠、盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺 间接：对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋氨苯砜、贝诺酯,25,甲芬那酸,对-硝基苯重氮盐,橙红色,26,+K2Cr2O7 深蓝色 棕绿色 甲芬那酸+H2SO4 黄

7、色 绿色荧光,三、氧化反应,27,四、水解反应（酯结构可被水解）,阿司匹林,醋酸臭气,28,29,五、分解产物的反应 苯甲酸盐 H2SO4 苯甲酸（白色升华物） 丙磺舒 NaOH Na2SO3 HNO3 硫酸盐,显硫酸盐反应,(含硫),六、紫外吸收光谱法,31,七、红外吸收光谱法,典型化学键的红外特征吸收峰,32,水杨酸的红外吸收图谱,33002300cm-1,O-H,1660cm-1,C=O,1610,1570 1480,1440,C=C,775cm-1,Ar-H,33,37002900cm-1,N-H、 O-H,1640cm-1,N-H,1580cm-1 1500cm-1,C=C,1300

8、cm-1,C-N,1188cm-1,C-O,对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱,34,八、TLC法,制剂辅料有干扰，采用色谱法分离后鉴别。如：二氟尼柳胶囊。,九、HPLC法,35,第三节 特殊杂质检查,一、阿司匹林中特殊杂质检查,合成工艺,36,检查酚、苯酯类杂质。 原理根据这些杂质与阿司匹林的酸性强弱，利用它们在碳酸钠溶液中的溶解度差异，规定一定量样品在碳酸钠溶液中应澄清。,酚,水杨酸苯酯,乙酸苯酯,乙酰水杨酸苯酯,溶液的澄清度,37,为反应中间体和水解产物 乙酰化不完全、储藏过程中水解 原理水杨酸有游离酚羟基，可与高铁离子反应，产生紫堇色，而阿司匹林不含游离酚羟基，无此反应。 方法取一定量样品和

9、水杨酸对照品与硫酸铁铵反应，比较紫色深浅，规定样品液颜色不得较对照品颜色深。 方法灵敏，可检出1g水杨酸 应用范围原料，片剂,水杨酸,38,限量 原料：0.1%； 阿司匹林片：0.3%； 阿司匹林肠溶片：1.5%； 阿司匹林栓、肠溶胶囊、泡腾片：3.0%（HPLC法）,39,合成工艺与降解反应,二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查,合成,降解,氧化成联苯醌,红棕色,40,为反应中间体和降解产物 方法1双相滴定法ChP(2010) 原理利用杂质易溶于乙醚，用乙醚提取，使两者分离，再用盐酸滴定，以甲基橙为指示剂。,间氨基酚,乙醚相,水相,41,双相滴定法ChP（2010年版）,取本品，研细，称取3.

10、0g，置50ml烧杯中加入用熔融氯化钙脱水的乙醚25ml，用玻璃棒搅拌1分钟，注意将乙醚溶液滤入分液漏斗中，不溶物再用脱水的乙醚提取2次，每次25ml，乙醚溶液滤入同一分液漏斗中，加水10ml与甲基橙指示液1滴，振摇后，用盐酸滴定液（0.02mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白实验校正，消耗盐酸滴定液（0.02mol/L）不得超过0.3ml。,42,方法2离子对HPLC法USP(29),色谱条件： 分析柱C18； 流动相磷酸盐缓冲液-甲醇-氢氧化四丁基铵 流速1.5ml/min 检测波长254nm 内标溶液磺胺溶液（5g/ml） 杂质对照液间氨基酚溶液（12g/ml） 供试品溶液对氨基水杨酸

11、钠样品液（6.9mg/ml）,43,系统适用性试验： 杂质对照液10ml + 内标溶液10ml100ml（1） 供试品溶液10ml + 内标溶液10ml100ml（2） R取溶液（1）重复进样6次，间氨基酚与内标磺胺峰的分离度应大于2.5； RSD小于7%（按A杂/A内比值计算）；,测定方法： 取溶液（1）和（2）分别进样，记录色谱图 计算tR内/tR杂，应为0.66 间氨基酚的含量%=10（C对/C样）（R样/R对） 限量0.25%,44,45,为何采用ion-pair HPLC法？,对氨基水杨酸钠具碱性，在水溶液中易离解；离子型化合物或能解离的化合物用常规HPLC分离时，常会出现色谱峰拖尾

12、和保留值不稳定等问题，用离子对色谱则能解决以上问题。离子对色谱是将离子对提取与色谱技术相结合，适用于pKa在2-8的弱酸和弱碱性化合物的分离，其机理尚在研究发展中。通常使用反相ion-pair 色谱，因离子对试剂在极性流动相中易于溶解，并易于调整控制反离子的浓度和流动相的pH值。,46,三、二氟尼柳中有关物质的检查,合成工艺,47,中国药典（2010）分别采用正相和反相色谱法,自身对照法检查有关物质A和B。 有关物质A：TLC法（正相）p142 有关物质B：HPLC法（反相）,48,四、甲芬那酸中特殊杂质的检查,合成工艺,邻-氯苯甲酸,2，3-二甲基苯胺,甲芬那酸,检查项目：铜盐、 有关物质,

13、49,铜盐检查法 1、分光光度法（比色法）,规定A值不得大于0.35,二乙基二硫代氨基甲酸钠,2、原子吸收分光光度法(BP)取1g样品测定，以铜标准液为对照，限量10ppm。,50,有关物质：中国药典（2010) TLC法,薄层板硅胶GF254 展开剂异丁醇-浓氨水 检测254nm紫外光下检视 样品液125mg/ml 样品液250 g/ml 点样各20l 规定样1杂质斑点强度不得超过样2主斑点 限量0.2%,51,中国药典（2010）HPLC法p106,有关物质：中国药典、USP,HPLC法,52,五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查,合成工艺,对氯酚,对氯苯氧异丁酸,53,对氯酚GC法ChP(201

14、0),色谱条件： 分析柱5%SE-30（甲基硅橡胶），2m玻璃柱； 载气氮气；柱温160C；检测器FID 杂质对照液0.0025%对氯酚的三氯甲烷溶液 供试品溶液制备： 样品10g +NaOH 氯仿洗涤（弃取）， 水层 + HCl 用氯仿提取加氯仿至10ml 进样取对照液和样品液分别进样测定， 规定样品中对氯酚峰不得大于对照品峰（0.0025%）,对氯酚的检查是否也可以用HPLC法？,挥发性杂质检查采用什么方法？如何计算限量？,54,挥发性杂质检查采用什么方法？如何计算限量？,中国药典（2010）,GC P109,55,高效液相色谱法JP(14),对氯酚的检查是否也可以用HPLC法？,56,第

15、四节 含量测定,酸碱滴定法（以阿司匹林为例） 双相滴定法(以苯甲酸钠为例) 紫外分光光度法(丙磺舒,阿司匹林胶囊) HPLC法(阿司匹林栓剂) 溴量法(对氨基水杨酸钠),57,ChP用于阿司匹林原料药的测定 方法以中性乙醇为溶剂，酚酞为指示剂，用NaOH标准溶液直接滴定。,T=Mb/a mol/L=180.2 0.1=18.02(mg),直接滴定法,原理,滴定条件,应用范围：水杨酸、二氟尼柳、双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬等,一、酸碱滴定法,58,讨论 中性乙醇 溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中和法所用的指示剂（酚酞）而言, 优点：简便、快速 缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定

16、） 酸性杂质干扰（如水杨酸） 适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析。,pKa 36 的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定 pKa 69 的药物要用非水溶液滴定法,59,原理利用阿司匹林分子中的酯键，先加过量定量的NaOH溶液使之水解，然后用H2SO4滴定剩余的NaOH，同时做空白。,水解后剩余滴定法（USP、JP）,T=M/2 0.5=45.04 (mg),过量定量,如果以硫酸标准液计，T应为多少mg？,还有哪个药物也可用此法测定含量？,60,反应摩尔比为12 优点：消除了酯键水解的干扰 缺点：酸性杂质干扰,羟苯乙酯含量测定亦可用此法 T=166.2mg/ml,61,ChP用于阿司匹林片

17、剂的含量测定 第1步用NaOH中和所有的游离酸，不计量,两步滴定法,62,第2步水解与测定，采用剩余滴定法,T=M 0.1=18.02(mg),应用：阿司匹林肠溶片，氯贝丁酯p112,63,标示量=规格量=处方量,（V空白-V样品）F18.02,W,100%,样% 平均片重/标示量=相当于标示量%,本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰,64,二、亚硝酸钠滴定法,对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在HCl中与NaNO2 发生重氮化反应,Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl,Ar-N2Cl + NaCl + 2H2O,注：对氨基水杨酸钠的法定方法 重氮化法（详见芳胺类一章）,65,这是有机

18、酸碱金属盐类的常用测定方法，在水和与水不相混溶的有机溶剂（乙醚）中用标准酸进行滴定。 例：苯甲酸钠的含量测定，以甲基橙为指示剂，用盐酸标准液滴定至水层显橙红色。p112,水杨酸钠可否用双相滴定法测定含量？,三、双相滴定法,66,乙醚的作用是：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底 滴定中要强力振摇。随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。,优点：消除了反应产物的干扰,溶剂：水乙醚,指示剂：甲基橙,67,四、紫外分光光度法,直接紫外分光光度法 丙磺舒片剂含量测定 取10片，称重，研细，精密称取适量（约相当于丙磺舒60mg加乙醇稀释至200ml，滤过，取

19、续滤液5ml，稀释至100ml，于249nm处测定吸收度，按E=338计算含量。, 1/ W,=相当于标示量%,100%,68,柱分配色谱-紫外分光光度法阿司匹林胶囊测定（USP）,水杨酸的限量测定,样品的氯仿溶液,冲洗：氯仿分次洗（阿司匹林） 洗脱：冰HAc+乙醚（解吸） 洗脱：氯仿（水杨酸） 测定：306nm，A样 A对 限量：以阿司匹林标示量计，允许水杨酸的量为0.75%,三氯化铁作用与水杨酸形成 紫色配位物，使水杨酸保留在柱上。,尿素作用高浓度尿素的存在可使 配位物在柱上的移动变慢，谱带较窄。,磷酸的作用 若有少量FeCl3被冲 洗下来，色带变黄， 影响结果，磷酸可 与Fe3+形成不溶

20、性 磷酸铁而避免干扰。,对照溶液75g10ml/50ml, 样品液100mg/50ml,69,阿司匹林的含量测定,上样：样品的氯仿溶液 冲洗：氯仿（弃去） 洗脱：冰HAc-CHCl3（阿司匹林+水杨酸） 测定 ：280nm 计算：对照品比较法（测得的是总量）,碳酸氢钠的作用：使阿司匹林和水杨酸均成钠盐保留在柱上。,冰HAc作用：解吸,70,五、HPLC法,阿司匹林栓剂采用HPLC 法测定含量(ChP2010) 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（ODS） 流动相：甲醇-二乙胺水溶液-冰醋酸 检测波长：280nm 内标物：咖啡因 系统适用性试验： n按阿司匹林应不低于2000， R阿司匹林、水杨酸与内

21、标物峰的分离度应大于1.5.,71,计算供试液 C样=（R样/R标）C标,溶液配制： 内标溶液：4mg/ml 对照品溶液：阿司匹林0.15g，精密加内标液5ml，稀释至50ml，精密量取2ml，稀释至50ml。 供试品溶液：取5粒，精密称定，在40-50C水浴上熔融，精密量取适量（相当于阿司匹林0.15g），精密加内标液5ml，加乙醇至50ml，精密量取2ml，稀释至50ml。,72,为什么阿司匹林栓剂采用HPLC 法测定含量? 其他制剂是否也可以用HPLC法测定含量?,73,中国药典（2010年版）阿司匹林肠溶胶囊、栓剂，布洛芬缓释胶囊、口服溶液、滴剂、糖浆剂。 USP(29)阿司匹林片、缓

22、释片、延时释放片泡腾片、 胶囊、缓释胶囊、丸剂及多种复方制剂、丙璜舒、甲芬那酸及其胶囊、二氟尼柳及其片、对氨基水杨酸钠及其片、双水杨酯及其片和胶囊、布洛芬及其片、口服液、布洛芬为麻黄碱片等。,74,利用对氨基水杨酸钠分子结构中酚羟基邻对位的氢较活泼，易被卤化，在酸性条件下与过量溴定量反应，剩余的溴用碘量法测定。,六、溴量法,75,原理,76,方法 本品0.2g 100.0mL 取20.0mL+Br（0.1mol/L）25.0mL+KBr溶液+HCl-冰HAc 密塞，放置10min +KI 密塞，放置5min 用Na2S2O3 （ 0.1mol/L）滴定，近终点时加淀粉指示液，滴定至蓝色消褪，将

23、结果用空白试验校正。 每1mL Br（0.1mol /L）相当于2.9187mg对氨基水杨酸钠。：,77,第五节 体内药物分析,一、血清中阿司匹林和水杨酸浓度的高效液相色谱测定法 二、尿中丙璜舒的固相萃取净化-高效液相色谱分析法 三、HPLC法测定人血浆中布洛芬含量 四、血浆中二氟尼柳的固相萃取-反相液相色谱测定法,78,98：80鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是 A. 碘化钾 B. 碘化汞钾 C. 三氯化铁 D. 硫酸亚铁 E. 亚铁氰化钾,（C）,79,95：129. 乙酰水杨酸片剂可采用的测定方法为 A. 非水滴定法 B. 水解后剩余滴定法 C. 两步滴定法 D. 柱色谱法 E. 双相

24、滴定法,（CD）,80,98：134测定阿司匹林片和栓中药物的含量可采用的方法是 A. 重量法 B. 酸碱滴定法 C. 高效液相色谱法 D. 络合滴定法 E. 高锰酸钾法,（BC）,81,99：81. 两步滴定法测定阿司匹林片的含量时，每1ml氢氧化钠溶液（0.1mol/L）相当于阿司匹林（分子量=180.16）的量是 A. 18.02mg B. 180.2mg C. 90.08mg D. 45.04mg E. 450.0mg,（A）,82,反应摩尔比为11,T滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数 c滴定液浓度，mol/L M被测物的摩尔质量，g/mol n1mol样品消耗滴定液的摩尔

25、数，常用反应摩尔比体现，即反应摩尔比为1n,83,96：78苯甲酸钠的含量测定，中国药典（2005年版）采用双相滴定法，其所用的溶剂体系为 A. 水乙醇 B. 水冰醋酸 C. 水氯仿 D. 水乙醚 E. 水丙酮,（D）,84,99：83. 双相滴定法可适用的药物为 A. 阿司匹林 B. 对乙酰氨基酚 C. 水杨酸 D. 苯甲酸 E. 苯甲酸钠,（E）,85,99x：121125含量测定方法（中国药典2005年版）为 A. 直接中和滴定法 B. 两步滴定法 C. 两者均可 D. 两者均不可 99x：121阿司匹林片 99x：122阿司匹林原料药 99x：123. 对氨基水杨酸钠 99x：124.

26、 阿司匹林栓剂 99x：125. 阿司匹林肠溶剂,（B）,（A）,（D）,（D）,（B）,86,例15 A两步酸碱滴定法 B直接酸碱滴定法 C两者皆是 D两者皆不是 1. 苯甲酸钠的测定 2. 氯贝丁酯的测定 3. 盐酸的测定 4. 酸碱滴定法 5. 阿司匹林片的测定,（D）,（A）,（B）,（C）,（A）,87,例6. 采用直接酸碱滴定法测定阿司匹林的含量时，已知阿司匹林的分子量为180.2，所用氢氧化钠滴定溶液的浓度为0.1mol/L，请问1ml氢氧化钠滴定溶液相当于阿司匹林的量应是 A. 180.2mg B. 180.2g C. 18.02 mg D. 1.802mg E. 9.01mg

27、,（C）,88,例7. 阿司匹林加碳酸钠试液加热后，再加稀硫酸酸化，此时产生的白色沉淀应是 A. 苯酚 B. 乙酰水杨酸 C. 水杨酸 D. 醋酸钠 E. 醋酸苯酯,（C）,89,例8. 水杨酸与三氯化铁试液生成紫堇色产物的反应，要求溶液的pH值是 A. pH10.0 B. pH2.0 C. pH78 D. pH46 E. pH2.00.1,（D）,90,例9. 两步滴定法测定阿司匹林片或阿司匹林肠溶片时，第一步滴定反应的作用是 A. 测定阿司匹林含量 B. 消除共存酸性物质的干扰 C. 使阿司匹林反应完全 D. 便于观测终点 E. 有利于第二步滴定,（B）,91,例10对氨基水杨酸钠中的特殊

28、杂质是 A. 水杨酸 B. 间氨基酚 C. 氨基酚 D. 苯酚 E. 苯胺,（B）,92,例11. 能用与FeC13试液反应产生现象鉴别的药物有 A苯甲酸钠 B水杨酸 C对乙酰氨基酚 D氢化可的松 E丙酸睾酮,（ABC）,93,例12. 采用双相滴定法测定苯甲酸钠含量时，加入乙醚的目的是 A. 防止反应产物的干扰 B. 乙醚层在水上面，防止样品被氧化 C. 消除酸碱性杂质的干扰 D. 防止样品水解 E. 以上都不对,（A）,94,例13. 采用双步滴定法测定阿司匹林制剂含量时，被测组分与氢氧化钠标准溶液的反应摩尔比为 A. 2:1 B. 1:2 C. 1:1 D. 3:1 E. 以上都不对,（C）,95,例14. 阿司匹林中含量最高的杂质为 A. 乙酰水杨酸酐 B. 乙酰水杨酸水杨酸 C. 水杨酸 D. 水杨酰水杨酸 E. 以上都不对,（C）,96,例15. 区别水杨酸和苯甲酸钠，最常用的试液是 A. 碘化钾 B. 碘化汞钾 C. 三氯化铁 D. 硫酸亚铁 E. 亚铁氰化钾,（C）,97,例16. 在中性条件下，可与三氯化铁试液反应，生成赭色沉淀的药物是 A. 水杨酸钠 B. 对氨基水杨酸钠 C. 乙酰水杨酸 D. 苯甲酸钠 E. 扑热息痛,（D）,98,例17. 对氨基水杨酸钠的含量测定方法有 A.