洗涤用酶制剂质量规格及测试方法第1部分：碱性蛋白酶（征求意见稿）

1、GB/T 9983发表国家市场监督管理局国家标准化管理委员会-实现-释放清洗用酶制剂质量规格及试验方法第一部分：碱性蛋白酶qualityspecificationanddeterminationmethodof为代理效率增加第1部分： alkali属性(征求意见的原稿)GB/T xxxx-xxxx机型中华人民共和国国家标准ICS 71.100.40Y 43战斗机1机动战士GB/T -前言本文将根据GB/T 1.12020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意，本节中的某些内容可能包含专利。 本节的发行机构不负责识别这些个的专利。此文件是GB/T* 洗涤用酶制剂

2、质量规格及测试方法的第一部分，GB/T*公布了以下内容：第1部分：碱性蛋白酶。第二部分：脂肪酶。这份文件是中国轻工业联合会提交的。本书由全国界面激活剂和清洗用品标准化技术委员会(SAC/TC272 )归口。本文件的起草单位：本文件的主要起草人：本文件首次公布。清洗用酶制剂质量规格及试验方法第1部分：碱性蛋白酶一个范围本书规定了清洗用碱性蛋白酶的质量规格、检查方法、检查规则和标识牌、包装、运输、储藏。本文适用于通过微生物发酵精制等工艺得到的洗涤剂工业用蛋白质组研究。2规范化参考文件以下文件的内容是通过本文的规范性引用构成本文件时不可缺少的条款。 在此，注日期的引用文件是只有与该日期对应的版本适用

3、于本文件的日期不填写的参照文件。 最新版本(包括所有修改单)将应用于此文件。GB/T 191包装储藏图表示GB/T 601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T 603化学试剂试验方法中使用制剂及制品的制备GB 4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB 4789.3食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群群修订数GB/T 6003.1-2012试验筛技术要求和检验GB/T 6005试验筛金银丝编织网、穿孔板及电成形薄板的筛孔的基本尺寸GB/T 6368界面激活剂水溶液pH的测定电位法GB/T 6682分析实验室用水规范和试验方法GB/T 8170数据修正规则和界限数值的显示和判

4、定GB 15258化学品安全标签条编制规定JJF 1070定量包装商品净含量订正量检验规则国家质量技术监督检验检疫总局令2005第75号定量包装商品计量监督管理办法3术语和定义以下术语和定义适用于本文档。3.1碱性蛋白酶在碱反应条件下切断蛋白质分子内部的肽键，可以将蛋白质分子转化为小分子多肽和氨基酸的酶催化剂。3.2碱性蛋白酶活性蛋白质组研究活性由蛋白质组研究活性单位表示，定义为1g固体酶粉(或1mL液体酶催化剂)，在一定温度和pH条件下，1min水解作用干酪素产生1g酪氨酸，即一个酶活力单位，由U/g或U/mL表示。四项要求4.1外观液体剂型：从鹅黄色到褐色液体，产品均一，不阶层化，无漂浮物

5、、沉淀物。 有特殊的发酵气味。固体剂型：白色、灰白色、黄褐色或其他颜色可自由流动的颗粒，制品均匀，翅性好，不凝固。有特殊的发酵气味。注：根据洗衣粉产品行业的特点，固体物质可以根据客户的要求使用其他颜色。4.2理化指标应符合表1的规定。表1清洗用碱性蛋白酶的理化要求项目指标ph(25、1%水溶液)10按酶活力计算(u/g或U/mL )是20000干燥重量减少b/%。8.0纤度b(150m标准筛通过率/% )0.5a可按照供求双方合同规定的酶活力规范执行b不适用于液体制剂4.3微生物限量必须符合表2的规定表2清洗用碱性蛋白酶微生物限量项目指标菌落总数/(CFU/g或CFU/mL )50000大肠菌

6、群组/(CFU/g或CFU/mL )304.4定量包装要求各批产品销售包装的净含量应符合国家质量技术监督检验检疫总局令2005第75号定量包装商品计量监督管理办法。5试验方法除非另有说明，分析时仅使用被确认为分析纯的试剂和GB/T 6682规定的三级以上的水。5.1外观取10g (或10mL )左右的样品，干燥后放入干净的透明试验容器中，在非直射光条件下观察，根据指标的要求进行评价，作成记录。5.2 pH值根据GB/T 6368的规定进行测量。 测定温度25、1%试样溶液浓度。5.3酶活力按照附录a (仲裁法)和附录b进行检查。5.4干燥重量减少5.4.1机器5.4.1.1电热干燥箱5.4.1

7、.2分析天平，感量0.0001g5.4.1.3称量瓶5.4.2分析步骤将样品2g (准确地说为0.001g )装入一定重量的称量瓶中，装入1032的电热干燥机箱中，卸下盖，将侧置于称量瓶旁边，干燥2h，取出，盖上盖，装入干燥机中蒸发制冷至室温，进行称量。5.4.3修正算法干燥重量减少按式(1)进行修正x1=m1- m2m1- m 100(1)式中：x1-样品的干燥重量减少，%。m1-测量干燥前装入瓶中的样品的质量，单位为克(g )。m2-测量干燥后装入瓶中的样品的质量，单位为克(g )。测量m-瓶的质量。 单位是克(g )结果会显示到小数点以下。5.5纤度按照附录c进行检定。5.6集群总数按照

8、GB 4789.2的规定进行测量5.7大肠菌群群按照GB 4789.3的规定进行测量6检查规则6.1检查分类6.1.1发货检查工厂发货检查项目包括产品的感官要求、酶活力、菌落总数和大肠菌群群。6.1.2型号检查型号检查包括表1、表2规定的所有项目，在以下情况下进行型号检查。a )正常生产时，定期进行型号检查，一般情况每年一次b )生产技术、技术装备、产品材料、催化剂等变化或异常，以及生产管理要素(包括人员素质)的变化可能影响产品品质和性能的情况c )长期停产后恢复生产的；d )发货检查结果与上次的型号检查有很大差异时e )质量监视机构、使用单位提出型号检查要求的。6.2小组批款和抽样原则6.2

9、.1蛋白酶产品分批交货与抽样检验，同时交货的同一类型、规格、批号产品构成交货批次。6.2.2产品应当由生产厂质检部门按照本标准规定的验收方法验收合格，出具产品品质验收合格证明商品发货。 收货单位应在进货一个月内通过合格证进行检验，必要时可按6.2.3取样进行检验。6.2.3取样根据批次尺寸，根据表3确定样品尺寸，从批次中随机抽取样品单位。表3批量和样品尺寸批量生产二到五十51500 500样品尺寸(桶/箱/袋)234注：取样前请将选定的样品包装中的样品均匀混合，在保证均匀的基础上进行取样。6.3判定规则和复查检验结果数据必须按照GB/T 8170的规定修理至与技术要求量值的有效位数一致，然后与

10、技术要求规定的极限值对照判定检验批产品的合格或不合格。检查结果的一个指标不符合标准时，重新抽取2倍量的样品进行取样，重新检查不合格项目。 再检查结果满足本标准的规定时，即使将该批次的产品判断为合格，如果仍不合格，则将该批次的产品判断为不合格。6.4仲裁收货方发现产品品质不符合本标准规定的要求，应在到货一个月内与生产者谈判。 检验结果不同，不能达成协议的，双方应采样6.2.3。 取样总量控制在450g以上，将选择的样品充分混合后，分别装入3个漂亮地干燥的样品瓶中，签名。 请在标签条中标明产品名称、规格、批号、生产者名称、取样日期、取样者。 接受双方各执行一份，第三份签字后准备仲裁检查。 样品保管

11、在暗处，在推荐保管温度下保管，保管期限为1个月。 仲裁检查的结果是最后的依据。7标识语、包装、运输和保管7.1标识语产品的外包装最好使用满足GB/T 191条件的标识语。产品包装上要贴上牢固的标签条。 标签条内容必须包括产品名称、净含量、生产者或销售者的名称、地址和联络人、制造日期和货架期、保管条件、批号及其他需要标注的内容。 化学物质安全标签条的内容必须满足GB 15258的条件。7.2包装产品内涵和/或包装容器内涂料应符合有关规定。7.3运输产品在运输时轻装轻卸，翻倒使不得。 避开阳光和雨，在箱子上踩、堆、使不得重物。7.4储藏7.4.1产品必须储存在冷却干燥的环境下。 严禁与有毒、有害、

12、有腐食性的物质共存。7.4.2栈内存必须采取必要的防护措施，栈内存高度适当，不得损坏运输包装。八货架期固体制剂和液体制剂在25以下，货架期在12个月以上。 企业应当按照上述要求具体表示。 货架期内的实测酶活力不得低于显示酶活力。注：货架期外的酶催化剂还有使用价值，使用时请重新测量酶活力。附录a(正规化附录)碱性蛋白酶酶活力的测定森林法(仲裁法)A.l原理蛋白酶在一定温度和pH条件下，水解作用干酪素基质，产生含酚化学基的氨基酸(如：酪氨酸、色氨酸等)，在盐化学基性条件下，还原福林试剂(Folin )，生成钼蓝和钨蓝，分光光度修正后，在波长680nm下吸光率溶液酶活力与吸光率成比例，由此能够补正产

13、品的酶活力。A.2设备和设备A.2.1分析天平，感量0.0001gA.2.2紫外可见分光光度校正A.2.3磁加热搅拌器A.2.4 pH修订：精度以0.01pH为单位A.2.5磁性搅拌器A.2.6刻度吸管：1mL、2mL、5mL、10mL。A.2.7离心机A.2.8恒温水族箱：精度0.2A.2.9移液器A.3试剂和溶液除非另有说明，分析时仅使用分析纯试剂和蒸馏水或脱络离子水或相当纯度的水。A.3.1福林试剂(1摩尔/升)在2000mL的研削口回流装置中，加入人钨酸钠金属钍(Na2WO42H2O)100g、钼酸钠金属钍(Na2MoO42H2O)25.0g、水700mL、85%磷酸50mL、浓盐酸1

14、00mL。 弱火沸腾回流10h。 取下回流冷凝器，向换气箱内加入50g硫酸锂(li2s 04 )、50mL水和99%浓元素溴水，微沸15分钟，除去多馀的元素溴(冷却后绿色也加入元素溴水，沸腾除去过剩的元素溴)，蒸发制冷，蒸发制冷后混合过滤。 得到的试剂呈金黄色，应储藏在棕色瓶子中。A.3.2森林使用溶液一份林试剂和两份水混合，摇匀。 也可以使用市售森林溶液进行制备。A.3.3碳酸纳米金属钍溶液(42.4g/L )称量42.4 g无水碳酸钠(na2c 03 )，用水溶解，定容至1000mL。A.3.4三氯乙酸(65.4克/升)称量三氯乙酸65.4g，用水溶解定容至1000mL。A.3.5氢氧化纳

15、金属钍溶液(0.5mol/L )称取氢氧化纳金属钍片剂20.0g，加入水900mL搅拌溶解。 将溶液等待至室温后，将水定容至1000 mL，均匀搅拌。A.3.6盐酸溶液： c(HCL)=1mol/L和0.1mol/L用GB/T 601调制。A.3.7硼酸缓冲溶液(pH=10.5 )、缓冲溶液的制备需要通过pH修正测定pH并进行调整加入硼酸钠9.54g、氢氧化纳金属钍1.60g、水900mL，搅拌至均匀。 盐酸溶液1mol/L或0.5 mol/L氢氧化纳金属钍溶液(A.3.5 )调整为pH=10.5士0.05，定容为1000mL。A.3.8干酪素溶液(10.0g/L )取标准干酪素(NICPBP

16、国家药品标准物质) 1.000g，精确O.001g，加入相应的缓冲溶液约80mL，加入磁场力搅拌器，搅拌至磁力搅拌器上均匀无大颗粒后，打开加热功能，缓慢加热直至干酪素全部溶解，留心沸腾不引起蛋白变性这种溶液储存在冰箱内，有效期为3天。 使用前请再次确认pH值为10.5进行调整。不同来源或批号的干酪素影响试验结果。 使用不同的干酪素作为基质时，请在使用前与上述标准干酪素对照结果。A.3.9 L-正丁酸标准储备溶液(100g/mL )预先准确称量在105下干燥至恒重的L-正丁酸O.1000g士0.0002g，用1mol/L盐酸溶解(A.3.6)60mL，溶解后定容于100mL，即1mg/mL正丁酸溶液中。吸入10.00mL的正丁酸溶液1mg/mL，用盐酸溶液0.1mol/l(a.3.6 )定容至100mL时，得到l正丁酸标准储备溶液100g/mL。A.4分析程序A.4.1定标曲线的绘制a)l酪氨酸标准溶液：按照表1，以移液器精密量进行调制。 L-酪氨酸稀释液应在稀释后立即测定。表A.1 L-酪氨酸标准溶液管理人员正丁酸标准溶液的浓度/(g/mL )正丁酸标准储备溶液(A.3.9 )的体积/mL水的体积/mL000101101922028330374404655055b )分别采集