肠道致病菌检验技术课件

1、第七章：肠道致病菌的检验与鉴定。PPT学习与交流，第一节总结，1 .沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌、耶氏变形杆菌是食品中常见的肠道致病菌。PPT学习与交流，2 .生物学特征，1 .形态和染色均为革兰阴性杆菌，中等大小，无孢子，大部分全身有鞭毛运动，志贺氏菌有鞭毛，无鞭毛。2.培养和生化反应(1)好氧或兼性厌氧，菌落中等，表面光滑，液体培养基生长浑浊。(2)肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌能分解乳糖和葡萄糖产生酸或气体。(3)可还原硝酸盐是亚硝酸盐。3，PPT研究与交流，3，抗原类型，4，PPT研究与交流，4，致病性，(1)，致病物质1，内毒素：可引起发热，白细胞减少，低血糖，血压下降和严重休

2、克。2.外毒素：它对小肠粘膜细胞有剧毒，会引起腹泻。5，PPT研究和交流，(2)，疾病1，伤寒和副伤寒2，食物中毒3，细菌性痢疾6，PPT研究和交流，5，微生物学检查的基本程序，样品处理生化试验的血清学鉴定报告，富集培养，分离培养，7，PPT研究和交流，思考问题，1，肠道致病菌有什么生物学特性？2.肠道致病菌有哪些抗原？也叫为什么？有什么特点？3.写出肠道致病菌检测的基本程序。PPT研究和交流，第2节。沙门氏菌测试，1。概况(1)沙门氏菌的发现和食物中毒(2)沙门氏菌的命名根据它引起的疾病，根据发现细菌的地区，并以发现者的名字命名。(3)沙门氏菌的耐药性为60 30，可被杀死。(9) PPT研

3、究与交流，(4)沙门氏菌的分类现状及定义。1.现状：肠杆菌科细菌、大肠杆菌和沙门氏菌；2.定义为肠杆菌科的一组革兰氏阴性菌，具有相似的生化反应和抗原结构，被O1噬菌体裂解。10，PPT学习与交流，2，生物学特性，(1)，形态学与染色：革兰氏染色阴性，无荚膜，无孢子，多数鞭毛，动态，短芽孢杆菌。(2)文化特征1。需氧或兼性厌氧，最适温度为37，最适酸碱度为7.27.4，11，嗜铬细胞瘤研究和传播，(沙门氏菌(红色)侵入人体细胞，12，嗜铬细胞瘤研究和传播，2，不需要营养，在普通培养基中生长良好，37和24小时，可形成中等大小的菌落，直径为23毫米，圆形或椭圆形，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐

4、。3、在液体培养基中，生长均匀混浊，有无菌膜。，13，PPT研究与交流，(3)生化特性1。谷氨酸、甘露醇和山梨醇发酵产生酸和气体(鼠伤寒沙门氏菌在少数情况下不产生气体)。不发酵乳糖、蔗糖、侧线大黄酚3。它们大多数产生H2S()，没有靛蓝底物(-)，没有尿素分解(-)，没有乙酰甲基甲醇生成(-)。它能把硝酸盐还原成亚硝酸盐。5.它生长在KCN培养基(-)，苯丙氨酸脱氨(-)，14。PPT研究和交流。(4)抗原结构主要有两种类型：抗原甲、抗原乙、抗原丙、表面抗原丁、菌毛抗原15。PPT研究和交流，2 .o .用字母o和阿拉伯数字标记O1、O2、O3和O4，例如伤寒杆菌O9、o12和16，学习并与P

5、PT交流，(2)沙门氏菌的分组和表示用大写字母和相关符号表示：a、b、c、d、e、F Z、O51 O63、o65o67、17等。(3)沙门氏菌的主要菌群及其群体特异性抗原A-O2B-O4C-O6C1-O7、C2-O6O8、C3-O8、C4-O6O 7 O14-。O10，E3，O15 E4，O1，O3，O19，18，PPT学习和交流，3，H抗原(鞭毛抗原)，耐热性差：6015或酒精处理能以两种方式破坏沙门氏菌H抗原：第一阶段：特定阶段，用英文小写字母表示A，B，CZZ11。19，PPT研究与交换，4，表面抗原：沙门氏菌有三种：Vi，M，5抗原，K抗原，Vi抗原位于细菌的表层，周围有O抗原，这些抗

6、原会阻碍O抗原的血清学凝集试验。Vi抗原的破坏：60 30，100 5含Vi抗原的沙门氏菌：伤寒沙门氏菌，丙型副伤寒沙门氏菌，都柏林沙门氏菌，20，PPT研究和交换，3。沙门氏菌食物中毒，(1)沙门氏菌引起食物中毒：鼠伤寒沙门氏菌，肠炎沙门氏菌，猪霍乱沙门氏菌，(2)食物，肉类，鸡蛋和牛奶，这些都容易引起沙门氏菌中毒，行业关注：美国两个花生酱含有沙门氏菌，21。PPT研究和交流；(3)中毒原因；1.食用患病畜禽的肉制品；2.患病畜禽、带菌者和动物造成的食品污染；3.用不干净的水处理食物；22.PPT研究和交流；(4)临床症状(病原菌)；1.肠热病：伤寒和副伤寒它是由伤寒和副伤寒细菌引起的，潜伏

7、期为720天。2.急性胃肠疾病：主要症状：头痛、发热、恶心、呕吐、腹泻、冷汗和全身不适，病程23天。3.脓毒症：由猪霍乱沙门氏菌引起的高热、寒战、厌食、局部炎症等。23.PPT学习和交流。4.微生物测试。(1)基本步骤(程序)样品检查和富集(预富集)通过生化试验进行血清学反应的初步鉴定，24。PPT学习与交流，1 .预富集：使用非选择性培养基使处于死亡状态的M重新活化；2.选择性富集：沙门氏菌优先繁殖，其他细菌受到抑制；3.选择性平板分离培养：分离所需细菌；4.生化试验：鉴定分离出的细菌是否符合被测项目的细菌；5.血清学鉴定：进一步鉴定。25，PPT学习与交流；(2)检验操作要点；1.增菌：复

8、壮待检细菌，抑制杂菌生长，提高检出率。预富集：用于加工食品，混合菌在37、48小时或1824小时内生长。富集培养基：一般采用微生物培养基和固体培养基作为富集培养基，如TTB用于伤寒沙门氏菌，42用于培养。，26，PPT学习和交流，2，平板分离，选择性培养基：BS，DHL，he，WS，SS是最好的，DHL，HE，WS是很好的，SS是最差的常用：BS和WS/SS平板，BS主要用于伤寒沙门氏菌的分离，27，PPT学习和交流，菌落在BS上，菌落在DHL上，和SS。3.五项生化试验，H2S，靛蓝底物，脲酶用PH7.2，KCN，赖氨酸脱羧酶，29，PPT研究和交换，(1)三糖铁培养物的培养，三糖铁培养物中

9、典型沙门氏菌的特征：粉红色表层，黄色底层，黑色底层H2S()和动态。在TSI培养基中，可排除表面为黄色和H2S (-)的培养物，其他培养物可能是沙门氏菌。30，PPT研究和交换，(2)其它四个生化实验，靛蓝底物PH7.2脲酶KCN赖氨酸脱羧酶反应系列号：A1和A2比较常见，B1不太常见，31，PPT研究和交换，(3)典型沙门氏菌的五个生化反应及其利用试验，A，典型的五个生化反应：A1(H2S)(靛蓝底物(-) PH7.2脲酶(-) KCN(-)赖氨酸脱羧E)，32，PPT研究和交换；通过五种生化反应鉴定沙门氏菌的最简单方案；a、对于H2S阳性细菌，可以用五种生化反应试验来区分沙门氏菌和柠檬酸杆

10、菌。b、对于H2S阴性细菌，当发现B1时：H2S(-)-靛蓝底物(-)-PH7.2脲酶(-)-KCN(-)-赖氨酸脱羧酶(E)，辅以ONPE试验，沙门氏菌和大肠杆菌(ONPE(-)均为沙门氏菌，ONPE()大肠杆菌，33，PPT研究。(1)沙门菌诊断血清类型：10种联合血清：26种主要用于伤寒、副伤寒沙门菌鉴定的联合血清：57种用于常见致病菌分组和分型的联合血清：144种用于房颤组以外细菌类型初步鉴定的联合血清：全套，34种，PPT学习交流；(2)血清学试验步骤，抗原制备抗体多价血清试验(确定是否为沙门氏菌属)组特异性抗体血清(如O2，O4，O3，O7，O8，O9，O10，O11(确定O组)O

11、单因子血清试验H因子血清试验(分型)报告，35，PPT研究与交换，5。测试结果报告，1。所有血清学鉴定和生化反应经检验，食品中发现沙门氏菌。2.血清学鉴定和生化反应均未发现沙门氏菌。36，PPT学习与交流，思考问题，1。典型沙门氏菌的五项生化测试结果是什么？2.沙门氏菌的形态和文化特征是什么？3.为什么在检测沙门氏菌时要进行预富集和富集？4.沙门氏菌有什么抗原？他们的特点是什么？如何表达O和H抗原，代表房颤组中每组沙门氏菌O特异性抗原的独特因子是什么？37，PPT研究与交换，5，哪些沙门菌菌株具有Vi抗原，Vi抗原如何影响O抗原的血清波纹试验，以及如何对含有Vi抗原的菌株进行O抗原的血清学试验

12、。6.沙门氏菌如何在不锈钢板和钛硅培养基上生长，并解释其原理。7.经过分离纯化后，如何选择最少的生化检验方法来初步鉴定试验菌是否为沙门氏菌。8.如何进行沙门氏菌的血清学检测。38，PPT研究和交流，第3节，志贺氏菌试验，1。生物学特性(1)，革兰氏阴性短杆菌的形态和染色，无荚膜，无孢子，无鞭毛23 m * 0 . 50 . 7 m，39，PPT研究和交流，2。文化特征，1 .需氧或兼性厌氧它能形成圆形，微凸，光滑湿润，无色半透明，边缘整齐。3.宋内志贺氏菌菌落大、不透明、粗糙、扁平，在SS平板上能发酵乳糖，菌落呈玫瑰红。4.它在肉汤里均匀地变浑浊，有无菌膜。40，PPT学习与交流，(3)生化反

13、应，1。葡萄糖发酵，产酸但不产气，除宋内志贺菌外无乳糖发酵。2.不要发酵万寿菊酒精，肌醇和水杨苷。3.不产生H2S，尿素分解。钒磷试验为阴性，不能使用柠檬酸盐。4.甲基红呈阳性。41，PPT研究与交换，(4)抗原结构，1。抗原组成：o抗原：群特异性抗原：a、b、c、D K抗原：除b群外，一般还有K抗原，42。PPT学习与交流，2 .志贺氏菌分类和血清型，志贺氏菌分为四组：a组(痢疾志贺氏菌)c组(鲍氏志贺氏菌):115型d组(宋内志贺氏菌):1型，43型，PPT研究和交流，志贺氏菌抗原分类，44型，PPT研究和交流，葡萄糖，乳糖-，甘露醇-，痢疾志贺氏菌1型，3型，4型，5型，6型，9型，10

14、型等。福氏志贺氏菌(1型、2型、3型、4型、5型)、肠型5型、7型、9型、11型、13型、15型、靛基质型、乳糖型、宋内志贺氏菌、靛基质型、靛基质型、甘露醇型、b组与第10组和第11组相关：b组抗原是所有b组类型中的共同抗原(2)组之间的抗原关系：c组17型与a组3型相关，c组18型与a组11型相关，46，PPT研究和交换， (3)属外抗原关系：志贺氏菌与埃希氏菌o抗原关系密切，除a组9型和d组外，宋氏菌与埃希氏菌o抗原关系不明显。47，PPT研究和交换，4，K抗原对O抗原血清学试验的影响会阻碍O抗原的血清学凝集试验，所以煮沸它。(5)志贺氏菌对外界环境的抵抗力和生存力在宋内最强，弗氏菌次之，

15、志贺氏菌最弱。一般来说，它能在潮湿的土壤中存活34天，在37水中存活20天，在粪便中(室温)存活11天。在阳光直射30分钟后，它在56-6010分钟内死亡。它对高温和化学消毒剂敏感，在1%石炭酸中15-30分钟内即可杀死。对氯霉素、磺胺类药物和链霉素敏感，但易产生耐药性。49，PPT学习与交流；2.志贺菌的致病性与食物中毒；(1)流行病学，50。PPT研究和交流，传染源，食物，病人，粪便，苍蝇，51。PPT学习和交流；(2)志贺氏菌致病性，致病因素：侵袭性，细菌内毒素，外毒素，52。慢性细菌性痢疾：慢性迁延型、慢性隐匿型和慢性急性发作型。53，PPT学习与交流，3。微生物检验，(1)检验步骤(

16、程序)样品处理和富集培养，EMB平板分离培养，初步生化鉴定和最终血清学鉴定报告，54。PPT研究与交流，(2)检查操作要点，志贺菌在室温下存活时间短，应尽快进行检测。如果不能在24小时内检测，样品应在冰箱中长时间保存。55，PPT研究与交流，1，富集培养，培养基：GN富集液在36168小时，当培养液出现轻微浑浊时，停止培养。56，PPT研究与交换，2，分离培养，强选择板：SS或HE，WS弱选择板：EMB或Macon数工作培养1824小时，菌落特征：无色、透明、中等大小、光滑、圆形菌落。57，PPT研究和交流，HE板原理和反应，一些发酵乳糖的肠杆菌，一些不发酵乳糖并产生硫化氢的肠杆菌，可能是沙门氏菌，不发酵乳糖的肠杆菌，可能是志贺氏菌。有一个黑色的中心。如果没有黑色中心，很