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文档简介

1、植物细胞骨架的光学显微镜观察,实验目的 实验原理 实验用品 实验方法步骤 实验结果 讨论,细胞生物学实验课件,一.实验目的,1.掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色的方法。 2.通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。,二.实验原理,细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。 本试验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大

2、部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。,三.实验用品,1.材料：洋葱,2.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯,三.实验用品,3.试剂 1. pH6.8的磷酸缓冲液。 2. M-缓冲液 ：50mmolL-1 (PH6.7)咪唑、 50 mmolL-1 KCl、 0.5 mmolL-1 MgC12 、 1 mmolL-1 EGTA、0.1 mmolL-1 EDTA、1 mmolL-1巯基乙醇、 4 mmolL-1甘油、1 mmolL-1 HCl调pH至7.2。 3. 1%Triton-X100:

3、用M-缓冲液配制。 4. 3%戊二醛：用pH6.8的磷酸缓冲液配制。 5. 0.2%考马斯亮蓝R250染液：0.8g考马斯亮蓝R250、46.5ml甲醇、7ml冰醋酸、46.5ml蒸馏水。,四.实验方法步骤,1.撕取洋葱鳞茎内表皮1cm2若干片，置于小烧杯中。 2.用磷酸缓冲液（Ph6.8）提前浸泡2小时左右。 3.吸去磷酸缓冲液，用1% TritonX100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。 4.吸去TritonX-100，用M缓冲液洗2次，每次10分钟。M缓冲液有稳定细胞骨架的作用。 5.用3%戊二醛固定0.51h。 6.用磷酸缓冲液（Ph6.8）洗2次，每次10分钟。 7.考马斯亮蓝R250染色30分钟。 8.蒸馏水洗2次。 9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。,五. 实验结果：,绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。,六.讨论,1.对实验结果的分析，所观察到的细胞

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