一般毒性作用(2).ppt

1、第六章一般毒性作用，一、概述二。急性毒性效应三。局部毒性效应。短期、亚慢性和慢性毒性效应(累积和耐受)，一般毒性：1。急性毒性)2。局部毒性)3。亚急性毒性)4。亚慢性毒性)5。慢性毒性、反复接触毒性、特殊毒性：1。致癌性；2.突变，如小鼠微核试验、小鼠显性致死试验、大鼠染色体畸变试验。致畸作用)4。生殖和发育毒性。药物依赖1。一般毒性的概念和意义一般毒性评价的主要目的：1 .确定测试物质的性能和毒性性质；2.确定受试物质毒性的剂量-反应关系；所获得的参数是：LD50、LOAEL、NOAEL 3。确定靶器官的毒性；4.评估毒性损害的可逆性；5.了解化学药物毒性作用的影响因素。第一节总结，2。一

2、般毒性试验中的动物选择(1)实验动物选择1。物种选择原则：与人类生物特征相似的动物；自然寿命短的动物；易于饲养和实验的动物；经济且容易获得的动物。(一般情况下，选择两个物种进行测试)。在毒理学系列研究中应使用相同的菌株。3.等级(质量)(清洁等级)或等级(标准普尔等级)4的动物。性毒性如果存在性别差异，则应选择敏感性别，如果不存在，则应选择两种性别进行测试(/一半和一半)。5.年龄和体重的急性测试-选择成年动物；慢性试验-新断奶的动物。同性动物的初始体重平均相差20%。6.生理和健康状况不要选择怀孕或哺乳的动物，而是选择健康的动物(健康观察期为5-7天)。(2)暴露方式的选择原则：一般来说，选

3、择测试对象实际接触人的方式。1.呼吸道暴露：气管注射和吸入暴露(静态和动态)；2.消化道暴露：灌胃、喂食和胶囊。3.透皮暴露包括皮肤应用和尾部浸渍。4.注射途径有静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射等。急性毒性的概念是指在24小时内一次或多次暴露于外源性化学品所造成的短期健康损害和致死效应。实验效果观察期：2周。24小时多次接触：低毒性或低溶解度的测试物质。一般规定：3次/24小时，每次间隔4小时以上。第2节：急性毒性；第2节：急性毒性试验的目的。1.评估急性毒性，获得LD50、LD100、LD01、LD0或MTD、LOAEL、NOAEL等。2.了解急性毒性的特征(中毒的症状和体征

4、)3。为亚急性、亚慢性、慢性和致癌试验的剂量设定提供依据。4.为毒性机制的研究提供初步线索。以LD50为剂量参考的毒性试验，试验类别剂量设定要求累积毒性试验采用1/20-1/5 LD50范围，亚慢性试验采用1/20-1/5 LD50为最高剂量，慢性(致癌)试验采用1/10 LD50为最高剂量，三。急性毒性试验方法要点(一)经典急性毒性试验(即传统LD50) 2.5-7个剂量组，每组10只以上(/每组一半)；3.剂量区间适当，一般为等比系列；4.给药途径尽可能与实际接触相一致；(空腹过夜(12-14小时)，给药后禁食3-4小时)5。观察毒性至少2周，每天一次。，LD50计算方法：曲线拟合法(概率

5、单位法或布利斯法)、插值法、科里奥利法、移动平均法、霍恩法、查表法、韦尔查表法等。剂量设定依据：指同系物或类似物的急性毒性数据；测定了最大容许致死剂量。世界卫生组织规定的剂量：口服5000毫克/千克，呼吸系统5000ppm，皮肤2000毫克/千克。通过预试验确定的致死剂量范围为00% (10%)-Lork法(改进方法的组间距为1.3-1.5)-组间距法，改进Lork简化剂量设计方案，公式：i=(lgLD90-lgLD10)/(n-1)或i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)，其中i-为组间距n-为设计剂量组的数量，组间距法用于确定各组的剂量，假设1.根据公式(I)计算对数剂量间隔：I=

6、(LG ld100-LG ld0)/(n-1)=(LG 2000-LG 500)/(6-1)=(3.301-2.699)/5=0.120 2。确定各组的实际剂量(2组剂量对数剂量(毫克/千克)1 2.701 502.3 2.821 662.2 3 2.941 873.04 3.061 1150.8 53.181 1517.1 63.301 2000.0注：剂量对之间的距离为0.12，剂量组之间的等比例为1.318。死亡率呈正态分布。最低剂量组死亡率为20%；最高剂量组死亡率为80%，各组剂量呈等比系列(一般为1.2-1.5)。特点：计算结果简单(按公式计算)，精度高。1.改良卡尔伯法，LD50

7、(或LC50)计算，公式：lgLD50Xki(p0.5) pq Si n LD50 95%置信限(LD501.96 S)，LD50计算公式：I-组间对数剂量差；Xk-最大剂量的对数值；存活率；P-各剂量组的总死亡率；N-每组动物的数量。应用示例，公式：lgld50=1.4961-0.08(2.3-0.5)=1.3521，lgld 50及其95%置信限为1.35211 . 960 . 0213=1.31041.3938 ld50及其95%。每组的动物数量相等(4或5只)。每组剂量增加固定倍数(2.15倍，3.16倍)。特点：动物数量少，查表即可得到结果(查表可得到LD50和95%置信限范围)。2

8、.Horn法也称为剂量递增法，Horn法查表-2.15例如，215，464，1000，2150 (t=2)被选作剂量组，范围为200-1500毫克/千克，Horn法查表-3.16倍组距，例如，总活死剂量范围为180-3500毫克/千克(2)急性毒性替代法的“3R”原则要求：替代常用的替代方法有：1 .极限测试)2。固定剂量法)3。急性毒性方法4。上下程序)-顺序方法，使用条件：当受试物质的急性毒性非常低时，可以使用该方法。方法要求：受试动物一般为啮齿动物；在24小时内给受试者几次机会；20只动物，一半雄性，一半雌性；给出最大剂量，一般为10000毫克/千克；毒性观察期为14天。毒性评估：LD5

9、0剂量(毫克/千克)，1。有限试验，方法要求：(实际上是非致命毒性评价)固定剂量：5，50，300，2000毫克/千克；试验前：按顺序使用一种性别的动物，试验前后的间隔时间为24小时。如果一剂中没有中毒，最后一剂中的动物死亡，则有必要将该剂量插入中间进行试验；正式试验：根据预试验结果，选择5只动物进行试验；有限试验：如果在2000毫克/千克预试验和正式试验中没有中毒，试验将终止，并且没有观察到毒性(u)。如果在正式试验中出现5毫克/千克的中毒或死亡，则试验终止，可确定为身高(t)。结果判断(经合组织):高毒性(毒性)、毒性(毒性)、有害性(毒性)、未观察到毒性(毒性)。，2。采用固定剂量法和F

10、D法进行急性毒性分级：3。急性毒性分级方法，注：根据全球统一制度标准进行评估和分级，要求：首先，进行一次动物试验，如动物死亡。如果动物存活下来，将会用更大的剂量进行试验，然后通过类比，最后根据公式计算出LD50值。观察死亡48小时，观察活体动物14天。特点：拯救动物(一般6-10只或更多)；适用于毒性反应迅速的化学药物。4.顺序法(也叫上下法)，顺序法实验，计算公式：其中：n-使用的动物总数；X-每个剂量组的剂量；F-每个剂量组的动物数量。应用实例、(3)急性毒性观察和记录：中毒症状(观察2周，记录症状出现的时间、程度和持续时间等。)；记录测试前后的重量(至少每周称重一次)；死亡记录(死亡人数

11、用于计算LD50)；大体解剖和病理检查等。急性毒性分级，世卫组织急性毒性分级标准：国内健康相关产品毒性分级，全球统一制度化学品急性毒性分级标准(2002年)，第4级上限，注：全球统一制度-全球化学品统一分类和标签制度，LD50评价问题1。将较大LD50值的95%置信限的下限与较小LD50值的95%置信限的上限进行比较。前者比后者毒性小。如果置信区间有重叠，则t检验应按公式进行：公式：2。剂量-反应曲线的斜率比较(可分析毒性特征)3。LD50值表示，在表示LD50时，应注意表示：动物品系；中毒途径；95%置信限范围。例如，LD50 1.96秒，甲基异氰酸酯大鼠的口服半数致死剂量为69毫克/千克5

12、.6，即63.474.6毫克/千克。概念：局部毒性，也称为局部损害，是指生物有机体在接触或接触化学物质的地方所造成的局部毒性损害，包括腐蚀性、刺激性和过敏性。目标：1 .评估化学品对眼睛和皮肤的刺激和腐蚀，皮肤的致敏性及其程度或等级；2.为制定安全使用化学品提供科学依据。第3节局部毒性效应，1。眼睛刺激试验眼睛刺激是指眼球表面接触试验对象后产生的可逆炎症变化。眼睛腐蚀是指眼球表面与测试对象接触造成的不可逆组织损伤。试验方法：Draize法(1944)常用动物：大白兔；Draize法：(自身对照原则)试验方法：一般用4只大白兔，每次将试验物质滴入每只实验动物一侧的结膜囊(0.1毫升)，另一侧眼用

13、生理盐水处理作为自身对照。在规定时间内观察对兔眼的刺激和腐蚀程度，并按照规定的评分标准进行评分。观察指标：结膜(发红、球结膜水肿和分泌物)、角膜(混浊程度和范围)、虹膜(角膜周围充血、肿胀和充血)。实验期：一般为7天，必要时可延长至21天(观察期足以评估刺激是否具有可逆性)。注：如果眼刺激反应72小时后仍未消退，应另取4只白兔观察洗眼效果，即滴完供试品后，用生理盐水洗眼5分钟，观察洗眼后的眼反应。(洗眼效果试验)，Draize眼外伤量表：(续)，眼刺激动物试验替代方法：1。受精卵的尿囊绒毛膜试验利用了尿囊绒毛膜和结膜之间的结构相似性。2.细胞膜损伤溶血试验。溶血程度用分光光度计测定(血红蛋白从

14、红细胞中漏出)。3.血红蛋白变性试验(用酶标仪测定)由于角膜透明度降低，蛋白质构象被化学物质破坏。4.细胞毒性试验兔角膜上皮细胞SIRC模型，观察细胞增殖、膜完整性等。(中性红不能沉积在死细胞中，死细胞可以通过微孔板读数器测量)5。生物膜替代法等。提取物中的MTT吸光度由微孔板读数器测量(MTT不能沉积在死细胞中)。2.皮肤刺激试验皮肤刺激指的是与受试者接触或覆盖受试者的皮肤，局部皮肤腐蚀指的是由于皮肤接触或覆盖受试对象而导致的局部不可逆组织损伤。皮肤刺激试验的类型：单一和多重皮肤刺激试验；完整皮肤和受损皮肤的刺激试验等。试验方法：德雷兹法(1944):常用动物：兔子或豚鼠。受损皮肤刺激试验是人工抓挠动物皮肤的某个部位(不会损伤真皮，也不会产生出血)，以比较受试对象对完整皮肤和受损皮肤的刺激反应的差异。伤口消毒药物一般需要受到受损皮肤的刺