细胞免疫染色及畸胎瘤切片的制作流程

1、多能细胞免疫染色及畸胎瘤石蜡切片制作过程，成露复旦大学生物医学研究院，第一部分多能细胞免疫染色过程，铺细胞的固定细胞的荧光染色观察荧光染色，照片拍摄，概述，胞细胞，ES细胞或iPS细胞的密度要求，无滋养层细胞好。从后代到克隆形式良好，密度好，通常传递到24孔板。因为用Hochest染色会同时感染滋养层细胞的核，影响复制定位。Oct4/DAPI，对铺设细胞的固定细胞进行荧光染色，观察荧光染色，将材料、细胞固定、过程、细胞固定在4PFA上，在室温下加入30min，4聚甲醛(4PFA，Para)，0.1米聚甲酸，铺设细胞细胞的固定细胞的荧光染色观察荧光染色并拍照。概述，细胞荧光染色，材料，过程，两性

2、染色控制：染色为阴性时，证明染色有效性的语音染色控制：染色为阳性时，染色特异性一项，二项式，Hochest(DAPI):分别为特异性抗原，特异性一项，细胞核一项：要确保购买的一项识别受感染细胞的种类。为了确定最合适的抗体浓度二项式，需要进行字典实验。要根据受感染细胞本身所具有的荧光类型确定相应的二项式荧光类型，两者必须不同。Hoechst:英语名称：bisbenzimide(sigma b 1155)；用PBS以1mg/ml的母液配制，然后保存在-20。通常，放置在4上并染色时，可以稀释1XPBS 1000倍。抗体稀释：0.2%BSA和0.1%TritonX100牙齿1XPBS溶于。4贮藏尽量

3、现配方，含有蛋白质成分，容易变质，是肠杆菌。封闭液：1XPBS溶液，包括1% BSA 4% normal serum 0.4% triton X100；4贮藏尽量现配方，含有蛋白质成分，容易变质，是肠杆菌。细胞的荧光染色、过程、所有洗涤、浸泡阶段在摇床中进行。目的是为了洗涤充分均匀浸泡。“洗涤”是指将平板放在摇床上，摇晃35分钟，将细胞固定在4PFA上，在室温下浸泡30min，1X PBS洗涤2次，抗体稀释液洗涤2次，无水乙醇浸泡2次。每次20min(或3次，10min/回)封闭液封闭细胞，室温，1h，在抗体稀释液中加入一次稀释剂，在样品中加入室温2h或4，以过夜(24孔板的一次量：200ul

4、/孔)，用PBT洗3次，约5min/回，用PBS洗2次，5min/回，用4PFA室温固定30min，最后用PBS洗2次，每次5min，Hoechst染色核，室温放置50多能性干细胞标记常用抗体获取teratoma，收集ES细胞或iPS细胞，细胞数：T75 %到80% 90%，细胞数大约1000万，可以打两分。细胞处理：老鼠和老鼠iPS细胞：将细胞消化为单细胞。 1200rpm离心5min后放弃听力。低于400ul的10%DMEM重新悬挂。人类iPS细胞：把消化过的细胞吹成小块。静静地放在细胞团的底部，扔掉清浊。不到400ul的hES peiji，沉重地挂着。把细胞收集在1毫升注射器里注射。获得

5、畸胎瘤，ES细胞或iPS细胞注射，材料：多免疫缺陷鼠标(NODSCID鼠标)注射部位：后腿肌肉注射，约1-2厘米，畸胎瘤的teratoma石蜡切片制备teratoma石蜡切片的HE染色teratoma石蜡切片各胚层组织的分离，概述，工艺，固定，teratoma石蜡切片制备，包括，切片，材料，4%；包含长方体，包含石蜡切片器(必需):半薄的“Semi-thick”石蜡切片染色机，染色机，滑块，盖子溶液：幻灯片：抗脱脂乙醇，二甲苯将4(浸泡)的夜晚换成新鲜的4%PFA，再次浸泡4次(在固定液中浸泡太久，样品的抗原性会降低，影响后续的免疫染色)，4固定是为了更好地维持标本的抗原性，可以室温。过程，固定，畸形70 etoh 1h 80 etoh 1h 90 etoh 1h 95 etoh 1h 100 e toh 1h fresh 100 e toh 1h fresh 100 e toh overnight，氯仿1h新鲜氯仿1h将样品快速放入石蜡填埋底部，盖上箱子支架，直到石蜡全部凝结。蜡块形状，整理备件。溶解蜡储液罐，蜡嘴，