酶底物法(科立得)产品培训

1、总大肠菌群组/大肠菌群及耐热大肠菌群组固定基质技术酶催化剂基质法，微生物检验的重要性，地震等自然灾难后，水体中被大量微生物污染，特别是粪便污染，如水体中含有肠道致病菌株，人饮用时会爆发泌尿系感染、菌血症和脑膜炎等严重疾病，少数肠道致病菌株可引起急性腹泻。 通常，投用含有氯元素的消毒剂进行消毒，消毒效果需要通过检查水体中是否含有总大肠菌群组和大肠埃希菌来判断。 指示菌的方法学定义，总大肠菌群组(Total Coliforms )大肠菌群组是指37培养24h能发酵乳糖、产酸瓦斯气体发生剂、好氧和兼性厌氧革兰阴性无芽胞杆菌组。 该菌群主要来源于人畜粪便，具有指标菌的特点，故以此作为粪便污染指标来做评

2、估饮用水的卫生质量。 耐热大肠菌群组(Thermotolerant Coliforms )，本名粪便大肠菌群组(Fecal Coliforms )是以提高培养温度的方法区分自然环境中的大肠菌群组和粪便中的大肠菌群组，将44.5仍可生长的大肠菌群组称为粪便大肠菌群组的水体是人畜粪便污染的较直接的指标。 大肠菌群(大肠菌群，E.Coli.)大肠菌群是指产生半乳糖苷酶(-D-galactosidase )而分解onpg(ortho-nitrophenyl-d )的葡萄糖醛酸酶催化剂分解mug (4- methyl-umbelle 大肠菌群是粪便大肠菌群群的组成部分，是水体被人畜粪便污染的最直接指标，

3、水中含有大肠菌群表示粪便污染。 已知有大肠菌群组、耐热大肠菌群组、大肠埃希菌、耐热大肠菌群组、大肠埃希菌、大肠菌群组，现在的粪便大肠菌群组的检测方法实际上不是大肠埃希菌，而是检测耐热大肠菌群组。 文献报道试验结果表明，阳性耐热粪大肠菌群组的15%实际上不属于大肠菌群，而属于总大肠菌群组。 这是因为耐热克雷伯菌不是人畜粪便，而是普遍存在于自然环境中，所以与人类疾病的发生也没有绝对的关联。 另外，假阴性的结果为10%是因为大肠菌群属不产生10个瓦斯气体发生剂(注1 )。 注1 :目前粪便大肠菌群群检测方法为产酸瓦斯气体发生剂为初步试验的阳性判定指标。粪便污染指示菌的比较、中国水质微生物指标(细菌)

4、、检测方法、多管发酵法(MTF )过滤法(Membrane Filtration，MF )固定基质DST )酶催化剂基质法(Enzyme Substrate TEST，est )、以及多管发酵法(MTF )为水样中大肠菌群最可能数(most probable number，most probable number )瓦斯气体发生剂平板培养1824小时革兰氏染色，镜检观察菌落形态，进行特征性菌落确认试验(培养242h，有产酸瓦斯气体发生者， 即确认存在全部大肠菌群组)、检查方法、过滤法(membrane filtration，MF )的选择性培养基上粘贴过滤烟嘴膜，培养后，校正过滤烟嘴膜上生长的

5、典型的大肠菌群组的菌落数， 修订数单位为菌落形成单位CFU(colony forming unit )储备培养基的制备过滤(器械灭菌等)培养(22-24H )阴性结果(没有典型的菌落)的产酸者，即确认存在全大肠菌群组)、酶催化剂基质法全大肠菌群组呈阳性原理、-半乳糖苷酶、-半乳糖苷酶、 酶催化剂基质法大肠埃希菌呈阳性原理，-葡萄糖醛酸酶催化剂，4-甲基丝氨酸，1，方法DST 2，培养基： Minimal Medium ONPG-MUG，简称MMO-MUG培养基3，优点假阳性，假阴性底操作简单，迅速定性，定量(51孔/97孔定量盘法) 50多个国家和组织身份验证了世界卫生组织ww的生活饮用水标准

6、检测方法在酶催化剂基质法中定义，并应用于科立，饮用水源水塑料瓶水再生水、废水、食品水畜产用水医疗用水在标准检测法内的APHA (美国公共卫生协会)、US EPA、AOAC、US NCIMS、UK DWI、 iii中收录的假阳性比较： vs过滤法、* Jacobs et al、AEM、1986. * Fricker et al、Water Res .1997、报告者：英国时报水务样本源：时报川1986. * Fricker et al、Water Res .以及产生原因传统方法用培养基非选择性、产生类似结果的假阳性反应培养基污染样品交叉污染操作误差结论试验证明过滤法可以与大肠菌群组进行大肠菌群，

7、并证明了colilerttt假阴性比： vs过滤烟嘴膜法和多管法，* Jacobs et al、AEM、1986. * Fricker et al、Water Res .1997，假阴性率发生原因为非特异培养基，由于杂菌能够干扰洗衣粉、盐、抗生素、毒素、温度等， 抑制反应的非发酵大肠菌群薄膜过滤法问题引起过滤膜的损伤的*Jacobs et al、AEM、1986. * Fricker et al、waterrral实验步骤： Colilert共托拉斯过滤法、过滤法72步骤、科立得：5步骤， 实验步骤： 97孔定量盘法vs多管发酵，试验时间比较表，经济成本分析，定性检测操作示范2步骤，加入科立得

8、试剂，摇匀直至溶解，36C培养26黄色且荧光大肠菌阳性44.5培养24小时，判定结果： 1，颜色无变化阴性2，黄色粪便大肠菌群组阳性，计量检验(51孔定量盘) 5 放入科立试剂后，摇晃至溶解，将Colilert溶液放入51孔(或97孔)中的定量皿Quanti-Tray放入可程序设计师定量封口机Sealer中封口，36或44.5培养24后，校正呈现呈阳性的晶格，计算MPN表校正数、计量检验(51孔定量皿) 基质技术固定酶催化剂基质法科所需的试剂和设备，得到定性科的定量科立得试剂取样瓶(可用玻璃瓶代替) 51孔/97孔定量皿计程仪柱定量封口机，Colilert使用总结， 科立得市场占有率美国的市场

9、占有率95%欧洲的市场占有率90%全国有20家环境监控站(如北京牌、上海、四川、厦门、郑州、沈阳等)、40家自来水公司、35家省市级中国疾病预防控制中心和水文站， 应用实例是2004年非典埃德斯把科立试剂慈善捐赠中国CDC和上海CDC，非典2008年汶川地震埃德斯公司在四川省CDC和环境监控站慈善捐赠1000定径套科立试剂，协助2008年奥运会北京牌自来水和北京牌CDC完成奥运会安全供水任务， 做中国环境监控站、上海环境监控站和厦门环境监控站和对比实验，2004年非典埃德斯把科立试剂慈善捐赠到中国疾病预防特罗尔中心和上海中国疾病预防特罗尔中心抗击非典， 案例分析2008年汶川地震埃德斯公司把四