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文档简介
1、实验九 过氧化氢酶的活性测定紫外吸收法,原 理: H2O2在240nm波长下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。,材料与设备,实验材料: 海桐叶,实验器材:紫外分光光度计;离心机;研钵;0.5ml刻度吸管2支,2ml刻度吸管1支;10ml试管3支;恒温水浴; 试 剂: O.1mol/L过氧化氢;,0.1mo1/L磷酸缓冲液,pH7.0、 pH7.8,操作步骤:,1称取植物材料0.3g,加入,0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分三次加入,最后两次用于洗研钵),在研钵中研磨成匀浆,以
2、 6000rmin 离心15分钟,倾出上清液。,操作步骤:,2.测定:取10ml试管3支,其中2支为样品测定管,1支为空白管,按下表顺序加入试剂。,紫外吸收法测定H2O2样品液配置表,操作步骤:,3测定 25预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2,每加完一管立即记时,并迅速倒入石英比色杯中,240nm下测定吸光度,每隔1min读数1次,共测2min,记录数据。,4.按下式计算酶活性。,结果计算: 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位(u)。 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=,式中:,A240 = AS0-,AS0加入煮死酶液的对照管吸光值; AS1, AS2样品管吸光值; Vt粗酶提取液总体积(ml); V1测定用粗酶液体积(ml); FW样品鲜重(g); 0.1A240每下降0.1为1个酶活单位(u); t加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。,作 业:,1.写实验报告 2.问题: (1)影
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