影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法.ppt

1、一.影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法,(1)试剂,1.观察外包装，内主份有无漏液，注意效期等。 2.仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。 3.操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性剂的溶解。,(2)加样过程应注意的问题,标本 ：1.血清或血浆标本分离不好即进行加样。 2.不加抗凝剂（以HBsAg影响较大）。 3.漏加样品或加样量不足的，加液器的校正。 加样时间： 4.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵 箱前等待时间过长(以HIV试剂较为明显。)；,(3)孵育过程中出现的问题,1.温箱孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔

2、壁，难于清洗彻底； 2.孵育时间人为延长，导致非特异性结合，难以清洗彻底。 3.孵育时温度不符合说明书的规定范围。,(4)洗板过程中易出现的几点情况,1.采用手工洗板,孔与孔之间液体容易交叉，切不可随意洗板。 2.采用洗板机洗板时，洗液注入孔中量不足，导致洗板不彻底，造成本底高。 3.由于血液中纤维原蛋白，造成洗板针堵塞，抽吸不完全，造成洗板不畅，导致洗板效果差，直接影响本底。 4.反应板过多，不能保证及时洗板，造成洗板等待时间过长，影响结果。 5.洗板前先将孔内液体甩出包被板。,(5)显色过程中易出现的问题,显色剂配制后放置时间过长或使用已经变色失效的显色剂； 2. 用排枪加A、B混合液时，

3、加样槽不够干净，造成花板 。 3. 不同厂家试剂的显色液混用。,(6)终止和读数时的注意事项,1加完终止后30分钟内读取数据。 2读板时板底如果不清洁，就会导致所读的 数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标板的 底部是清洁的。,二.实验完成后异常结果出现的原因分析,问题1：只有单次实验出现灵敏度偏低或 者偏高。,处理意见：重新实验，并在实验中注意试 剂盒的温度平衡、温育的时间、 显色的时间等影响因素的控制 。,问题2：质控品漏检,处理意见：检查质控品是否有反复冻融 的情况、质控品是否有批内 差异、质控品是否为4摄氏度 久置。,问题3：日常使用中出现弱阳性标本漏检。,处理意见：A标本本身由于各种因

4、素影响而表现 为弱阳性，实际上为阴性标本。 B由于标本自身含量较低，易随实 验水平位试剂盒调整等因素波动， 对这部份标本的处理应格外慎重， 有条件的地区应进行确证实验。,处理意见：C注意检查实验中所用的仪器设备 是否定期校准。 D注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否相同，不同批号 试剂不得混用。,问题4：质控品灵敏度偏高 。,处理意见：卫生部临检中心的质控品存在 批间批内差异。 实验室相关条件改变导致质控变化，看阳性对照品是否有明显变化。,问题5：多次实验灵敏度一直偏低。,处理意见：A保存环境不规范。 B孵箱温度不足。 C温育时间不足。,问题6：单次实验中出现假阳性,处理意见：注意实验

5、过程中的影响因素，特 别是实验中的洗板应设置浸泡 30-60秒时间。,问题7：临床实验中出现假阳性偏高。,处理意见：A注意检查洗涤液中结晶部份是否 完全溶解。 B注意检查实验中所使用的仪器设 备是否定期校准 。 C注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否相同，不同批号 试剂不得混用。,处理意见：D假阳性标本表现在临界值附近较 多，通常与当时实验的水平有关， 注意检查实验条件的波动 。 E避免加样时间过长 。 F由于试剂盒灵敏度过高而造成临 床假阳性偏高的结果。,问题8：多次实验重复性差。,处理意见：A加样后充分混均。 B尽可能使用同一加样器，装紧 枪头。 C测量波长保持一致。 D加样量、加试剂量保持一致。,三.血型常见问题分析,1.关于效价的问题： 目前公司内部质量规程规定A,B细胞均需达到1：128 O细胞需达到1：8。 2.关于凝集的问题： A , B细胞 1：128 + O细胞 1：8 + 此处的“+”为肉眼可见清晰的凝集颗粒。 3.关于变色及溶血的问题： 当细胞近效期时，有可能出现细胞浊液颜色发暗红，属正常现象。 正常细