实验5 叶绿素a与叶绿素b含量的测定_第1页
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文档简介

1、实验六 叶绿素含量的测定,一、实验目的,1、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a、b和类胡萝卜素的方法及计算； 2、测定叶绿素含量a与叶绿素b含量的意义。,二、实验原理,叶绿素提取液中同时含有叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素，三者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的重叠，在不分离他们的情况下同时测定叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素的浓度，可分别测定在663nm、645nm、470 nm （分别是叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a、叶绿素b、和类胡萝卜素的浓度。,Ca=12.21A663-2.81A645（1

2、） Cb=20.13A645-5.03A663（2） CT=Ca+Cb=8.05A663+20.29A645 （3） Cx.c=(1000D470-3.27Ca-104Cb)/229 （4） Ca叶绿素a的浓度（单位为mg/L） Cb叶绿素b浓度（单位为mg/L） CT叶绿素的总浓度（单位为mg/L） Cx.c类胡萝卜素浓度（单位为mg/L） 82.04和9.27叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸收系数 16.75和45.60叶绿素a和叶绿素b在645nm下的比吸收系数,三、实验器料,1、材料： 菠菜或其它绿色植物叶片 2、试剂： 80%丙酮或96%乙醇；石英砂；CaCO3； 3、仪器：分

3、光光度计（分光光度计的使用）、高速离心机,四、实验步骤,1、提取叶绿素 选取有代表性的植物叶片，称取0.2g剪碎后置 于研钵中，加入5ml 80%丙酮，少许CaCO3和石英 砂。充分研磨（组织变白），再加10ml80%丙 酮，静止3-5分钟，冲洗研钵后转至离心管，定 容至15ml,3000转、15分钟，取上清液用80%丙酮 定容至25ml。,测定OD值： 取上清液1ml，加80%丙酮4ml， 以80%丙酮 作空白对照，用分光光度计分别测定叶绿 素提取液在645nm、663nm、470 nm下的吸光度。 3.计算： 把测出的吸光值带入(1)(2)(3)(4)式计算叶 绿素a、b、a+b和类胡萝卜素的浓度。 根据下式求出植物组织中叶绿素的含量： 叶绿素的含量（mg/g)=cvn/m C叶绿素的浓度（mg/L)；v提取液体积(ml)； n稀释倍数；m

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