2017-2018学年高中生物第一部分微生物的利用1.1大肠杆菌的培养和分离2素材浙科版选修1

1、第1节大肠杆菌的培养和分离一、徽章配置：我们用牛肉奶油蛋白培养基培养了大肠杆菌。1000毫升的培养基配置(教师可以在实验前配置，也可以由学生分组在实验课上操作)。1、配方：5g牛肉奶油蛋白胨10gNacl 5g琼脂20g2、计量：各成分的准确名称。3.溶解：加热熔化，用蒸馏水定量到1000毫升。整个过程继续用玻璃棒搅动，以防止琼脂糊底部打破烧杯。4，pH调节：用1mol/L NaOH溶液将pH调节到7.033547.2。5.灭菌：将构成的培养基移入锥虫病后，放入棉塞，包裹牛皮纸，用橡皮筋拧紧，集中在高压灭菌锅内，以摄氏121度，100千帕的压力灭菌15min。58套培养皿用一包旧报纸包裹，在干

2、热灭菌锅内160170 C条件下灭菌2小时。6.逆板：灭菌后固体培养基冷却到50左右时，在酒精灯火焰附近工作。过程是：1将灭菌的培养皿放在火焰旁边，右手拿着装有培养基的三角瓶，左手拔棉塞。右手拿着三角瓶，使三角瓶的瓶口快速通过火焰。用左手打开培养皿比三角瓶入口稍大的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立即盖上盘子盖子。板冷却凝固后，将板倒置放置。倒置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。将杀菌的培养基移至培养皿时，也不要将培养基埋在盘子墙上。否则，空气中的杂菌将在牙齿粘合培养基中繁殖，污染盘子内的培养基。第二，大肠杆菌接种，培养：1.接种常用的方法是平板线法和稀释度法。(1)平板标记

3、方法：操作程序：将Petri盘子底部固定在大拇指和无名指上，在火焰旁边轻轻打开Petri盘子。同时，用环形接种针从火焰旁提取一些细菌悬浮液，迅速送到培养皿，在平板培养基的一侧制作1次平行线3-5个，将培养皿旋转约70度，通过冷却的接种针，通过第一次下划线部分制作第二次平行线，然后用同样的方法通过第二次平行下划线部分制作第三次平行线，当接种针与平板表面成30度左右。不要让接种针碰到培养皿盘子边缘，也不要撕裂培养基。画线后盖上盘子盖子，反转恒温器的培养。方法原理和注意事项：用接种环浸泡菌液后，在含有固体培养基的培养皿中画线，划线过程中，菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。如果划到最后，细菌之间的距离会变

4、大。培养10 20H后，一种细菌可以产生单细胞，菌落不重叠。将每个殖民地接种到包含固体培养基的试管斜面上，在斜面上画线，每个斜面上的菌落都是一个细菌产生的后代。在提取菌种之前，燃烧接种环的目的是消除接种环中的微生物。除了第一行以外，在划剩下的线之前燃烧接种环的目的是消除接种环上残留的菌种。在与菌种划清界限之前，都要求接种环冷却后进行，目的是防止高温杀死菌种。最后，燃烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作员。(2)稀释涂层板方法：首先稀释培养的菌液，通常在10-5-10-7之间稀释，然后将0.1毫升稀释度不同的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀在培养基平面上涂上涂层进行培养。根据适当的

5、稀释度，可能会产生徐璐分离的菌落。通常每个培养皿20个以内的单细胞最适合。将各群落接种于斜坡上，增强培养后进行功能性实验。2、训练：接种后将未接种培养基全部放入37孵化器，培养12小时和24小时，分别观察记录结果。三、实验评价相关问题：未接种的培养基中有殖民地吗？如果有的话，为什么？2、大肠杆菌接种培养基上有殖民地吗？颜色、形状、大小是否相同？3.如果培养基上出现其他菌落，请分析可能的原因。四、实验注意事项：实验中使用的棉花不能使用脱脂。脱脂容易吸水，吸水容易产生污染。灭菌后，通常在60 80烤箱中去除灭菌时的水分。物品要放在高压蒸汽灭菌锅里灭菌，然后首先打开排气阀煮沸，去除锅里的冷空气。其目的是帮助锅内温度升高，然后关闭排气阀，继续加热，加热结束，切断热源，然后将气压降低到0，以便自然降低温度。气压必须降到零。为了防止容器里的液体沸腾。在转移到任何器皿时，软木和封口只能夹在手上，不能放在书桌上，接种时要在酒灯火焰旁操作。培养基埋在三角瓶口、试管莲蓬头、培养皿盘子墙上渡边杏。否则容易污染。接种时要大胆细致，动作快。这是减