Agilent定量分析讲义.ppt

1、第七章 定量基础,各种积分事件,校正（定量） 校正即是利用某个峰的峰高或峰面积来确定其对应组分的浓度或含量 当检测器灵敏度针对不同的组分而变化；及检测器对同一组分不同含量响应值发生变化时须做校正 校正方法 *面积百分比法AREA% *峰高百分比法HEIGHT% 归一化法NORM% 外标法ESTD 内标法ISTD *不是校正方法,面积百分比法AREA% AREA(pk) AREA%=x100% AREA(pk) 假定 检测器响应都相同 所有组分都流出 所有组分都被检测到 优点缺点 无需做校正以上所有的假定 简单、快速的定量过程需测量所有的组分 进样量不要求严格所有的面积都必须准确,校正因子,绝对

2、响应时间 RF=含量/面积 校正检测器响应 与组分的含量及其它组分的存在无关,含量 100100 200 面积30002500 4000,归一化法(NORM) RF(pk) x AREA(pk) NORM%= x100% RF(pk) x AREA(pk) 假定 所有组分都流出 所有组分都被检测到 优点缺点 简单、快速的定量过程所有组分峰都要流出 进样量不要求严格需测量所有的组分 必须校正所有的峰,外标法（ESTD） 含量面积(pk) x RF(pk) 优点 校正检测器的响应 只对欲分析的组分峰做校正 无需所有峰都能被检测到 缺点 进样量必须准确 仪器必须有良好的稳定性 需定期做再校正,外标法

3、校正过程 首先准备一个混合标样，其中感兴趣组分的浓度须准确知道 运行标准样品 建立校正表 运行待测样品并使用校正表分析它 需要时进行再校正,单级校正 对每一峰只做一次校正 单级校正中做了如下假设： 响应因子不会因为某峰对应物质的含量变化而发生变化 响应曲线须通过原点,多级校正 对每一峰需做至少两次校正 可以补偿检测器对不同含量的样品组分而给出非线性响应。 响应曲线可以不通过原点,定量分析,多级校正过程 首先准备一个混合标样，其浓度应高于欲分析物的浓度 将浓标样等梯度稀释，其中最低浓度低于待测物的浓度 运行每一级稀释好的标样 在每一级上进行校正 运行待测样品并使用校正表分析它 需要时进行再校正,

4、线性拟合（最小二乘法）,含量,响应值 (A或H),点到点校正曲线,含量,响应值 (A或H),非线性拟合,含量,响应值 (A或H),含量,响应值 (A或H),含量,响应值 (A或H),含量,响应值 (A或H),内标法（ISTD） RF(pk) 面积(pk) 含量 RF(ISTD) 面积(ISTD) 优点 进样量不严格要求.内标的加入消除了由于进样量、仪器不稳定等因素带来的系统误差。 只对欲分析的组分峰做校正 缺点 必须加一个组分进到样品，易增加面积测量误差。,*内标含量 =,* 内标含量,面积(pk),面积(ISTD),RF,选择内标物的标准 样品中不存在 化学性质与样品相似 与样品有相同的浓度

5、范围 不会与样品发生反应 在感兴趣组分附近流出 * 可得到分离良好的、干净利落的峰 色谱性质稳定 可迅速容易得到,定量方法总结,优点缺点 AREA%无需校正检测器的响应必须一致 进样量不严格要求所有组分峰都须流出 所有组分峰都须被检测到 所有面积都须准确 NORM%进样量不严格要求所有组分峰都须流出 所有组分峰都须测定 必须校正所有的峰 ESTD校正检测器的响应进样量必须准确 只对感兴趣峰做校正仪器需有很好稳定性 无需所有峰都流出 无需所有峰都被检测到 ISTD进样量不严格要求必须在所有样品中加入 只对感兴趣峰做校正一个组分 校正检测器的响应样品和标样的准备工作 更加复杂,本章将学到: 如何设

6、置并调试定量数据 如何编辑定量结果 如何产生定量报告,定量数据分析,步骤 3: 查找限定离子,步骤 2: 保留时间窗口内查找目标离子,步骤 1: 在信号窗口内查找峰积分,化学工作站定量概念,分析标准物,分析未知物,建立标准曲线,由曲线计算含量,定量过程,连同校正表下载方法文件. 下载第一个标准数据文件 选择 Calibrate / Set Up Quantitation.,设置定量数据资料,选择Calibrate / Set Up Quantitation.,定量数据资料表,参考峰窗口：用于内标 非参考缝窗口：用于其它化合物 相关窗口：允许目标离子与限定离子的保留时间之差 默认值+/-：峰起点

7、与终点须在此范围内 浓度单位 内标浓度,是否用RTE积分,单击 Insert Above,输入化合物,输入化合物 (续),内标指令,用于: 增加新级别 级别再校正 删除级别,更新校正表,10。000,10。000,再校正,分别选择对浓度和保留时间是否再校正 分别对浓度和保留时选择再校正的方式（取代或平均）,选择再校正的级别,选择Recalibrate,化合物信息 - 第 1页,化合物信息 - 第 2页,化合物信息 - 第 3页,校正曲线,校正曲线,自动定量数据库,定量报告选项,“MultiView” 窗口结果演示,交叉定量,1. 选择 Method/Edit Method. 2. 选定Quan

8、t Report,3. 选定报告格式和目的地 4. 保存方法!,自动生成定量报告,使用 Qedit手动再积分,当前数据声明显示在所有报告中!,修改数据状态,使用下列工具: Trace Mode Quant Locate a Peak/Locate all Compounds EasyID,如果 peaks/限定离子找不到, 检查: 1. 积分 2. 数据文件中的质量数 3. 时间范围 4. 信号相关窗口 如果出现奇怪的校准曲线, 检查: 1. 数量 2. 积分事件 3. 响应,定量数据库故障排除,查找峰/查找所有化合物,修正保留时间 校正离子比率 设置信号萃取窗口,EasyID,点击Quantitate/Trace Mode Quant对痕量样品进行处理，列出所有相关化合物和内标的定