自身抗体检测及应用.ppt

1、自身抗体的检测及意义,自身免疫(autoimmunity) 免疫系统针对自身成分发生免疫应答反应 出现自身抗体或致敏淋巴细胞的现象 自身抗体(autoantibody) 针对自身组织、器官、细胞及其成分的抗体。 自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID) 自身免疫反应 导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。 免疫系统紊乱,几个概念,自身抗体,自身免疫性疾病的重要标志 高滴度存在于自身免疫性疾病患者 与疾病的活动性相关性 参与免疫病理性改变损伤,常用的检测方法,间接免疫荧光法（IIF） ELISA 免疫印迹法（Western-blot） 酶免疫斑点法,常检测的自身抗体,类风湿因

2、子（RF） 抗核抗体（ANA） 抗可提取性核抗原抗体（ENA） 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） 抗环瓜氨酸抗体（CCP） 抗心磷脂抗体（ACA）,类风湿因子 （rheumatoid factor, RF）,抗变性IgG Fc的自身抗体，主要类型是IgM型,检测方法： 1. 胶乳颗粒凝集实验 定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF 2. 速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE） 定量、准确、快速，测定IgM-RF 3. ELISA 定量、准确，可测定不同类型的RF,临床应用：,（1）RF在多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。,（2）RF滴度与RA患者临床表现呈正相关，IgM-RF效

3、价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。,抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）,真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的各种 细胞核成分为靶抗原 检测的自身抗体的总称。,ANA概念,指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。 广义：抗核酸（Nucleic acid）和核蛋白（Nucleoprotein）抗体的总称 某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富,ANA,中性粒细胞,DNP(DNA-Histone) + 抗DNP + 补体,均质体,LE细胞,LE细胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等结缔组织病，药物 过敏，慢活肝等亦可阳性

4、。抗DNP取代LE细胞的检测,+,间接免疫荧光法,间接免疫荧光法,分类和命名,以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、 抗Sa 抗体等； 以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B 抗体等； 以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等； 以抗原的化学性质进行分类命名，如抗DNA、抗RNP、抗组蛋白抗体等。,抗核抗体检测方法,间接免疫荧光法 （indirect immunofluorescence, IIF） 酶免疫斑点法 ELISA 免疫印迹法 （Western-blot）,ANA谱条法,ENA斑点法,细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期 均质型 核

5、糖体型 肌蛋白型 中心体型 斑点型 线粒体型 波形纤维蛋白型 纺缍体型 核仁型 高尔基体型 细胞角蛋白型 纺缍丝型 着丝点型 溶酶体型 原肌球蛋白型 中间体型 周边型 颗粒型 纽带蛋白型 PCNA型 核点型(dots) 结蛋白(桥粒)型,IIF检测ANA荧光染色模型,斑点型（nRNP/Sm）,高滴度的抗U1-nRNP为MCTD的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。,斑点型（SSA/SSB）,抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮 （100%）。抗SSB抗体几乎仅见于女性，可出现于SS和SLE。,均质型,抗dsDNA抗体 抗组蛋白抗体(histone) 抗ssDNA抗体 抗核小体抗体(nuc

6、leosome),抗dsDNA抗体,SLE特异性抗体，与病情活动度相关。,周边型,可见于胶原病、PBC、CAH等患者,核点型（DOTS）,见于SLE、SS、PBC、风湿病。,抗着丝点型,PSS局限型标志抗体。,抗PM-Scl（PM-1）抗体,见于重叠综合征（多发性肌炎PM /皮肌炎 DM / 弥漫性PSS ）,抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体,抗线粒体抗体（AMA）,SLE标志抗体,原发性胆汁性肝硬化标志抗体,抗Jo-1抗体,抗高尔基体抗体,多发性肌炎（PM）标志抗体,偶见于SLE和SS,抗肌动蛋白抗体,见于自身免疫性慢性活动型肝炎,抗ENA抗体谱,ENA (extractable nucle

7、ar antigen)： 可提取核抗原的总称 临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括： 抗Sm 抗U1-RNP 抗SSA 抗SSB 抗Jo-1 抗Scl-70 抗rib-P蛋白,检测方法,双向免疫扩散（ID） 对流免疫电泳（CIE） 免疫印迹法（Western-blot） ELISA 酶免疫斑点法,免疫印迹法,SDS-PAGE电泳,转移电泳,酶免疫检测,是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。,抗中性粒细胞胞浆抗体 （anti-neutrophil cytoplasmic autoantibod

8、ies, ANCA）,荧光染色型,靶抗原,ANCA荧光染色型与靶抗原,周边型抗中性粒细胞胞浆抗体 （pANCA）,主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）,胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体 (cANCA),主要见于Wegeners肉芽肿及微小多动脉炎,ANCA临床应用,髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新 月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎相关、,杀菌/通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病 并与长 期慢性绿脓杆菌感染有一定关系,蛋白酶3（PR3）与Wegeners肉芽肿（WG）密切相关。 仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3 可超过95%， 活动期几乎1

9、00%阳性。,组织蛋白酶G (Cath-G) 白细胞弹性蛋白酶(HLE) 乳铁蛋白(LF),可见于SLE、IBD、PBC、PSC等,AKA主要见于RA，阳性率36%59%，特异性95%99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的RA类型。,抗角蛋白抗体（AKA）,一组针对含有磷脂结构抗原物质的自身抗体，主要包括抗心磷脂抗体、抗磷脂酸抗体和抗磷脂酰丝氨酸抗体。 类型：IgG、A、M型，IgG型最常见，其次是IgM型，IgA型与自身免疫性疾病的关系较小。,抗磷脂抗体 （anti-phospholipid antibody, APLA）,检测方法： 常用ELISA 临床应用： 在SLE中总阳

10、性检出率达70%80%，与病情活动显著相关；ACA阳性者发生血管炎、溶血性贫血、心脏及中枢神经精神系统损伤的几率明显。 在RA患者阳性率为33%49%。 ACA阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。 与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性,部分自身免疫性疾病中 自身抗体的检出率,ANA在自身免疫性疾病中的检出率,系统性红斑狼疮 (SLE),混合性结缔组织病（MCTD）,类风湿性关节炎（RA）,原发性干燥综合征（SS）,进行性系统性硬化症（PSS）,多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM),自身免疫性慢性活动性肝炎(AIH),抗原类型,阳性率（%）,肌动蛋白（Actin）,4090,ANA(板层素，SSA等),3040,肝肾微粒体（LKM-1）,7,可溶性肝抗原（SLA）,100,线粒体2型（AMA-M2）,510,线粒体9型（AMA-M9）,10,原发性胆汁性肝硬化(PBC),怀疑