15189对分子诊断设备的要求及应用中的问题ppt课件

1、ISO15189认识到分子诊断设备的要求及其应用中的问题。1.学习和交流PPT，主要内容，1 .进行分子诊断测试的国家和行业相关法规2。进行分子诊断测试的主要设备。国际标准化组织15189在分子诊断领域的应用简介4。国际标准化组织15189对分子诊断设备的性能要求5。国际标准化组织15189对分子诊断测试的系统完整性要求。分子诊断设备制造商在帮助用户通过国际标准化组织15189认证过程中应注意的问题。学习交流PPT，分子诊断测试的国家和行业法规的第一部分，和3。学会交流PPT，体外分子诊断基因扩增试验的基本概念，俗称聚合酶链反应试验2002-2009 :本试验项目是唯一需要通过卫生部或省级临床

2、试验中心现场技术验收后才能进行临床试验的技术通道。2009年5月1日后：卫生部关于印发医疗技术临床应用管理办法的通知(卫发200918号)和医疗机构临床基因扩增实验室管理办法(卫办发2010194号)。4、研究和交流PPT，医疗技术可分为三类：第一类：医疗技术是指具有确切安全性和有效性的技术，医疗机构可通过常规管理确保其在临床应用中的安全性和有效性。第二类：医疗技术是指安全有效、涉及某些伦理问题或具有高风险、应由卫生行政部门控制和管理的医疗技术。(如聚合酶链反应)第三类：医疗技术是指需要卫生行政部门严格控制和管理的下列医疗技术之一：(1)涉及重大伦理问题；(2)高风险；(3)安全性和有效性需要

3、通过标准化临床试验进一步验证；(4)需要利用稀缺资源；(五)卫生部规定需要特殊管理的其他医疗技术。(共19项，基因芯片诊断技术第8项，现列为2类)，5项。研究和交流PPT，卫生部负责三类医疗技术的临床应用管理。第三类医疗技术目录由卫生部制定并公布，并根据临床应用的实际情况进行调整。省卫生行政部门负责第二类医疗技术临床应用的管理。第二类医疗技术目录由省级卫生行政部门根据本地区情况制定并公布，报卫生部备案。6。研究和交流PPT，回顾医学技术的临床应用能力。第三类医疗技术首次临床应用前，必须经过卫生部组织的安全性和有效性临床试验研究、论证和伦理审查。二级医疗技术和三级医疗技术临床应用前应实施第三方技

4、术审核制度。医务人员开展第一类医疗技术临床应用的能力和技术审核由医疗机构自行组织实施，也可由省卫生行政部门规定。卫生部指定或设立的机构和组织(以下简称技术审核机构)负责第三类医疗技术(1)临床应用能力的技术审核。中国医学科学院，2。中华医学会，3。中国医院协会，4。中国医师协会。中国口腔医学会)。省级卫生行政部门指定或设立的技术审核机构负责第二类医疗技术临床应用能力的技术审核。卫生部可以委托省级卫生行政部门组织对指定的第三类医疗技术的临床应用能力进行技术审核。，7，研究和交流PPT，发展分子诊断检测实验室的要求：实验室工艺布局人员证书(参考ISO 17025，第10章，第38条)的管理应标准化

5、如下：实验室验收证书(技术审核报告)，卫生行政部门注册(诊断和治疗学科)，8，研究和交流PPT，第二部分是发展分子诊断检测所涉及的主要设备，9。学会沟通PPT，主要设备(5.5检验流程)1，核酸提取器2，聚合酶链反应(1)普通聚合酶链反应仪(2)实时荧光聚合酶链反应仪(3)液体芯片3，杂交仪4，基因芯片5，集成/工作站6，测序仪10，学会沟通PPT，辅助设备(5.2设施和环境条件)1，样品进料器2，金属槽3，离心机4，冰箱5，生物安全柜6，不间断电源7，净水器(可去除核糖核酸酶)，11。学会用PPT交流。第三部分介绍ISO15189在分子诊断领域的应用：5.2、5.3、5.5和附录12。学会沟

6、通医学实验室质量和能力认证标准在分子诊断领域的应用说明，CNAS CL-36于2014年4月21日首次修订，并于2014年11月1日实施。13.学习和交流PPT，1范围本文件规定了CNAS在分子诊断领域的认证要求，包括核酸扩增试验、杂交试验(包括解剖学和病理学中的原位杂交试验)、核酸电泳分析等。注：“分子诊断”包括实验室医学领域的“分子检查”和病理检查领域的“分子病理学”。2标准参考文件下列文件是本文件应用的必要条件。所有注明日期的参考文件只有注明日期的版本适用于本文件。对于未注明日期的参考文件，最新版本(包括修改单)适用于本文件。GB/T 20468-2006临床实验室定量测定室内质量控制指

7、南CNAS-RL02能力验证规则CNSA-CL31内部校准要求、临床技术操作规范、病理学分册、医疗机构临床基因扩增实验室工作指南、病理科建设与管理指南(试行)、卫办郑怡法第200931号术语与定义第14节学习与交流PPT、标本接收与处理：流程要点和标本鉴定；试剂耗材质量检验：为什么质量检验，如何做核酸提取；原理和操作技术要领；污染预防；措施和意识；质量控制：程序和实际操作，失控分析和处理结果的分析和判断；结果评审、报告发布、评审过程中的主要评审内容；15.学习和交流PPT、5.2设施和环境条件；5.2.1应实施安全风险评估。5.2.2参与基因扩增检测的实验室原则上分为四个独立的工作区域：试剂储

8、存和制备区域；样品制备区；放大区域；放大产品分析区。如果使用自动分析仪(扩增产物的闭管检测)，扩增区域和扩增产物分析区域可以合并。具体的实验室划分应基于所使用的技术平台、检验项目和工作量。上述每个区域都应有足够的空间，以确保：样品处理符合分析前后的样品分区；仪器放置符合维护和操作要求；生物安全柜、离心机和冰箱等设备放置在样品制备区；印刷检验报告中交叉污染的控制。16、学会交流PPT、5.2设施和环境条件，工作区域应符合以下要求：c)实验室的每个分区应配备波长为254nm的固定式和移动式紫外灯，距离测试台的高度一般为6090cm辐射期间；e)样品制备区应配备二级生物安全柜和洗眼器，实验室附近应有

9、喷淋装置。所有分子病理学实验室应设立独立的标本预处理区，包括切片区和脱蜡区，用于组织切片、脱蜡、水合、染色等。脱蜡、水合和染色应在通风设施中进行。17，学会沟通PPT，5.2设施和envi工作后应立即清洁工作区域，必要时进行消毒和去污。应根据所用分析设备和实验过程的要求，制定并记录环境温度和湿度控制要求。应采取并记录温度和湿度失控时的处理措施。放大器应配备不间断电源(ups)；应根据用途(如用于核糖核酸检测的水)制定适当的水质标准(如去除核糖核酸酶)，并应进行定期检测。分子测试的每个工作区域都应清楚标明。进入基因扩增实验室的各个工作区域，应在单一方向进行，即试剂储存和制备区、样品制备区、扩增区

10、和扩增产物分析区。不同的工作区域应使用不同的工作服(如不同的颜色)。工人在离开每个工作区域时不应脱下工作服。18，学会交换PPT，5.3实验室设备，试剂和消耗品，以及5.3.1.1如果你从事核糖核酸检测，你应该配备70%的制冷设备。如有必要，配备高速冷冻离心机。标本制备区使用的一次性取样器尖端应配备过滤元件。聚合酶链反应检测容器应密闭，不同工作区域的设备和物品不得混放。组织标本预处理区的设备通常包括切片机、安装机、切片刀、电热培养箱、脱蜡筒、水合筒和he染色筒等。19、学会交换PPT、5.3 5.3.1.4实验室设备，按国家法律法规要求验证强制检验设备。如果设备满足测试目的和要求，应进行外部校

11、准的设备可根据制造商的校准程序进行校准。至少应校准分析设备的取样系统、检测系统和温度控制系统(如适用)。分析设备和辅助设备的内部校准应符合CNAS CL-31内部校准要求。ABI 5700 FAM/SYBR Green I、VIC/JOE、NED/TAMRA/Cy3、ROX/德克萨斯-瑞德和Cy5应定期校准基因放大器、样品进料器、温度计、恒温设备、离心机和生物安全柜。20，学会交流PPT，样品加热和冷却速率：快速模式：1.6-0.8/秒。标准模式：1.6/秒。加热块的最大加热和冷却速率：2.5/秒。温度范围：4-100。温度精度：设定值/显示温度的0.25(35-95)(在时钟启动后3分钟测量

12、)。温度均匀性：0.5(35-95)五色发射滤光片和电荷耦合器件成像系统安装有校准染料：SYBR Green I、FAM、维克、乔、奈德、TAMRA、ROX、德克萨斯、Cy3、Cy5。被动参考染料：ROX，21岁，学会交换PPT，5.3实验室设备，5.3.1.5设备故障后，应首先分析故障原因。如果设备故障可能影响方法性能，在故障修复后，可以通过以下适当方式进行相关测试和验证：(a)应对可校准项目进行校准验证，必要时应进行校准；质量控制物质的检查；(三)与其他仪器或方法相比，偏差符合附录三的要求；(4)重新检查以前检查过的样品，偏差符合附录A.5的要求.22、研究和交换PPT、5.3实验室设备，

13、5.3.2.1实验室应建立试剂和关键消耗品(如带过滤元件的离心管和吸头)的验收程序，相应的程序应有明确的判断符合性的方法和质量标准(参考附录a)。5.3.2.3实验室应对同一批号中新批号或不同批号的试剂和关键耗材进行验收，验收测试至少应包括：目视检查：肉眼可见，如包装完整性和有效期；性能验证：可以通过实验来判断，如试剂的核酸提取效率和核酸扩增效率、试剂的批次差异、关键耗材的抑制剂等。23、研究和交换PPT，5.3实验室设备和试剂性能验证记录应反映该批试剂的核酸提取效率和核酸扩增效率。在正常情况下，临床实验室，24，学习交流PPT、目标核酸提取的质量和纯化的目标核酸的完整性：样品的核酸提取物可以

14、通过凝胶电泳与核酸标准进行比较。核酸提取的产量可以通过A260读数来确定。核酸的纯度：血清或血浆中病原体的核酸纯化的纯度可以通过提取物的A260/A280的比例来判断。采用间接法，即将已知病原体含量的溶血性和/或脂肪性血液样品用待评价试剂提取，然后进行扩增检测，并将所得结果进行比较。25，学会交换PPT，试剂进行定性检验，并选择阴性和弱阳性样品进行试剂批号验证。对于用于定量检验的试剂，应验证新旧试剂批次之间的差异，方法和要求参照附录A.6的要求.消耗品抑制剂的验收：应测试关键消耗品是否存在核酸扩增抑制剂。方法和要求参见附录A.6。5.3实验室设备，26，学会交换PPT和试剂质量检查，强调试剂质

15、量检查对患者标本的重要性：在聚合酶链反应实验中有两个关键步骤：(1)从标本中提取核酸；(2)提取核酸的扩增。市售质控品和标准曲线结果良好，不能反映提取试剂的质量。27，学习交换PPT，推荐试剂质量检验方案，样本选择：一般选择5个用旧试剂测量过的患者样本，其中一个为阴性，另外4个样本一般应尽可能涵盖高、中、低和临界浓度差异。结果判断：用新试剂对上述5个样品进行重复测定，计算出偏差(%)。判断标准(根据实验室室内质量控制RCV和能力验证允许的总误差TEA)；关注关键和高价值！28，学会交换PPT，5.5检验过程，5.5.1.2定量检测方法和程序的分析性能验证应至少包括精度、准确度、线性度、测量和/

16、或可报告范围、抗干扰能力等。定性检验项目的验证内容至少应包括测定下限、特异性、准确性(方法学比较或与金标比较)、抗干扰能力等。验证结果应由授权人员审查。应使用经过验证的核酸提取和纯化方法，必要时应进行核酸定量。29、在完成产前检查的分子诊断前，学会交换PPT，并保持后备培养和跟踪监测实验的准确性；在检测胎儿标本前，应检测父母一方或双方的突变情况，并由同一实验室进行检测；如果有足够的样本，应该从两个不同的样本中提取DNA进行双重检查。实验室应了解测试方法受母体细胞污染的影响，并应有评估和减少这种影响的程序。ISH阳性信号应有一个明确统一的标准，并建立本实验室的阳性阈值。组织病理学ISH应结合组织

17、形态学进行解释，并应采用国际评分标准。5.5检验过程，30、研究和交流PPT，5.6检验结果的质量保证，5.6.2.1通则应建立室内质量控制程序，定量测定可参照GB/T 20468 -2006临床实验室室内质量控制导则进行定量测定。在质量控制程序中应该有具体的核酸检测和污染预防措施。应保存脱氧核糖核酸质量评估的记录。必要时，应评估核糖核酸的质量，并选择适当的管家基因作为内部控制，以评估提取的核糖核酸的完整性，并应保存核糖核酸质量评估记录和假阴性率监测记录。对于用于基因突变检测的石蜡包埋样品，病理学家应根据组织形态学评估肿瘤细胞的存在和数量，并决定是否需要富集肿瘤细胞。当分子诊断结果与临床和其他实验结果不一致时，应记录并分析原因，并进行纠正32