第3章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全.ppt

1、第3章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全,第一节 消毒灭菌的常用术语,Basic terms,sterilization灭菌 disinfection消毒 Antisepsis 防腐 Bacteriostasis抑菌 Asepsis 无菌,1、消毒(disinfection) ： 杀死物体上病原微生物的方法,称为消毒。(不一定能杀死含芽胞的细菌和非病原微生物) Disinfection (消毒): Reduce or eliminate pathogens in or on inanimate objects to a safe level, which are no longer heal

2、th hazard.,2、灭菌(sterilization) ：杀灭物体上所有微生物的方法。(包括杀灭病原微生物和非病原微生物、细菌的繁殖体和芽胞)要求比消毒高。Sterilization (灭菌): A physical or chemical process that completely destroys or removes all microbial life，including bacteria spore and viruses.,3、抑菌(bacteriostasis) ：抑制体内或体外细菌的生长繁殖，如各种抗生素即为常用抑菌剂。,4、防腐(antisepsis) ：防止或抑制

3、体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。 Antisepsis (防腐): Use chemical agents to inhibit or destroy the growth of microorganisms on skin or other living tissue .,6、清洁：指能减少微生物附着在无机物体表面的数量的方法，达到人类可以接受的水平，以满足公众的健康需要。 净化：指能显著减少或破坏一定空间中微生物数量和生物活性的方法，,5、无菌(asepsis) ：不存在活菌的意思。 无菌操作(asepsis manipulaiton )：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。 A

4、sepsis (无菌): No living microorganisms exist. The skill that prevents microbe from entering the body or other objects is called aseptic technique (无菌操作).,第二节 消毒灭菌的方法,一、 物理消毒灭菌法 主要有:热力、紫外线、电力辐射、超声波等。,Controlling Microorganisms By Physical Agents： High Temperature Radiation 辐射 Filtration 过滤 Low Tempera

5、ture Desiccation干燥,一）、热力灭菌法(Heat sterilization) 无芽胞细菌经55-60作用3060分钟死亡;湿热80经56分钟可杀灭所有细菌繁殖体、真菌和酵母菌。 干热灭菌法(dry heat sterilization) 湿热灭菌法(wet heat sterilization),(一)干热灭菌法(dry heat sterilization) 1.原理:脱水干燥和大分子变性。mechanism: The cells get dried through dehydration(脱水）. 2.方法: 焚烧（burn ）; 烧灼（cautery ）:用于微生物实验

6、的接种环和试管口的灭菌; 干烤（bake ）:烤箱灭菌;160-170,2小时;适用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品,例玻璃器皿、瓷器、玻璃注射器等的灭菌。 红外线（infrared):是一种0.77-1000m波长的电磁波，其中1-10m波长的热效应最强，但只能加热物体表面，温度与时间同干烤。,（二）湿热灭菌法(wet heat sterilization) 1巴氏消毒法(pasteurization) ：法国巴斯德创用 62，30分钟；71.71530秒 2.煮沸法 3.流动蒸气灭菌法:又称常压蒸气灭菌法 4.间歇蒸气灭菌法:Arnold(呵诺氏灭菌器) 此法用于不耐高热的含糖、牛奶等

7、培养基的消毒。 5.高压蒸气灭菌法:最有效的一种灭菌方法 1.05kg/cm2(15磅) 、121.3，1520分钟。用于一般培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温耐湿等物品的灭菌。,湿热灭菌的效力比干热灭菌的大,原因: 湿热中细菌菌体蛋白较易凝固; 穿透力比干热大; 湿热的蒸气有潜热存在。,二）、紫外线的杀菌作用（radiation for sterilization ) 波长200300nm的紫外线具杀菌作用，其中以265266nm最强。 原理:作用于DNA,使一条DNA上相邻的二个T共价结合而形成双聚体,因而改变DNA的分子构型,干扰DNA的复制与转录,导致细菌的死亡或变异。 应用：手术室传

8、染病房细菌实验室的空气消毒，或不耐热物品的表面消毒。,Ionizing Radiation 电离辐射,X-rays and gamma rays more energy and penetrating power than UV used to sterilize pharmaceuticals and disposable medical supplies such as syringes, surgical gloves, catheters导尿管, and sutures缝合线 used to retard spoilage in seafoods, meats, poultry, an

9、d fruits,三）、Filtration 过滤,sterilize solutions that may be damaged or denatured by high temperatures or chemical agents,四）、干燥与低温抑菌法,二、 化学消毒灭菌法 （Chemical method for sterilization）,一）、化学消毒剂的杀菌机制(Mechanism of disinfectant(消毒剂） killing bacteria) 菌体蛋白质变性或凝固（denaturizing the proteins of bacteria ）：例酚类(高浓度)

10、醇类等; 干扰细菌的酶系统和代谢（disturb enzyme activity ）：例重金属与细菌的-SH基结合使有关酶失去活性; 损伤菌细胞膜（damage the cellular membrane ）：例表面活性剂和脂溶剂（新洁尔灭等）,二）、消毒剂的种类与应用（自学）,按其杀菌能力分为三大类： 1、高效消毒剂（high-level disinfectants）:杀灭包括细菌、芽胞在内的所有微生物 1）含氯消毒剂：对金属制品有腐蚀作用，主要用于物品表面、应用水、皮肤、地面、排泄物和污水等的消毒。 2）过氧化物消毒剂：过氧化氢、过氧乙酸。其中过氧乙酸不能用于金属器械的消毒，可用于其他物品

11、表面和皮肤的消毒，熏蒸可用于空气消毒。 3）醛类消毒剂：甲醛和戊二醛，为烷化剂。具有广谱、高效、快速的杀菌作用。 4）环氧乙烷,2、中效消毒剂（intermediate-level disinfectants）:不能杀灭细菌芽胞，但能杀灭细菌繁殖体（包括结核分枝杆菌）、真菌和大多数病毒。 1）含碘消毒剂：常用为碘酊、碘伏，多用于皮肤粘膜、体温计和其他物品表面的消毒。碘酊对皮肤有刺激性，消毒后需用75%乙醇擦净。碘伏易洗脱，刺激性轻。 2）醇类消毒剂：乙醇（70%75%）或异丙醇（杀菌作用强，但毒性大，用于医疗器材和皮肤的消毒或浸泡体温计）。 3）酚类消毒剂：石碳酸、煤酚皂溶液（即来苏），对环境

12、可造成污染，现已不用。,3、低效消毒剂（low-level disinfectants）:可杀灭多数细菌繁殖体，但不能杀灭细菌芽胞、结核分枝杆菌及某些抵抗力较强的真菌和病毒。 1）季铵盐类消毒剂：我国使用最普遍的是苯扎溴铵（新洁尔灭（阳离子表面活性剂），使用时不能与肥皂（阴离子表面活性剂）合用）。可用于皮肤、粘膜、物品表面、地面消毒。 2）氯乙定（洗必泰）：为双胍类化合物，不能与阴离子表面活性剂合用，可用于皮肤、粘膜、物品表面、地面消毒。 3）高锰酸钾：多用于可用于皮肤、粘膜冲洗、浸泡消毒以及食具、蔬菜、水果的消毒。 消毒剂的应用见表22,第三节 消毒灭菌的运用,（一）高危器械物品 用时需进入

13、无菌组织的物品。所有这些物品都应该灭菌。 （二）中危器械物品 用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采用消毒即可。 （三）低危器械物品 只接触未损伤皮肤但不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。一般用后清洗、消毒即可。 （四）快速周转的医疗器械,一、医疗器械物品的消毒灭菌,二、室内空气消毒灭菌 1.物理消毒法 紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用；滤过除菌：空气通过孔径小于0.2 m的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃。 2化学消毒法 包括化学消毒剂喷雾和熏蒸：过氧乙酸（浓度0.5%）喷雾、熏蒸；过氧化氢喷雾；二氧化氯溶液喷洒；中草药点燃烟熏：1g/m3 三、手和皮肤的消毒 用肥皂和流动水经常并正确

14、洗手。病原微生物污染时应用消毒剂消毒。 常用包括：75%的乙醇、0.4%0.5%的氯乙定溶液、0.2%过氧乙酸、0.05%0.1%次氯酸钠水溶液、含有效碘10g/L的碘伏配制液,四、黏膜的消毒： 口腔粘膜用3%的过氧化氢；尿道、阴道、膀胱可用0.1%0.5%的氯乙定或1g/L的高锰酸钾 五、病人排泄物与分泌物的消毒灭菌 用含50g/L的有效氯的次氯酸钠、漂白粉等消毒液作用1小时；或用等量的200g/L漂白粉搅拌均匀，作用2小时 六、病人污染物品的消毒 小物品：0.5%的过氧乙酸浸泡30分钟；家具：0.2%0.5%的过氧乙酸擦洗、喷洒；运输工具：用0.5%的过氧乙酸擦洗、喷洒或2%的过氧乙酸8m

15、l/m3熏蒸1小时 七、饮水的消毒 八、环境的消毒,第四节 影响消毒灭菌效果的因素,主要因素： 消毒剂的性质、浓度和作用时间 微生物的种类与数量 温度:一般温度升高可提高消毒效果 酸碱度 有机物 其他:湿度、穿透力、表面张力及拮抗物质。,常用的化学消毒剂,第五节 病原微生物实验室生物安全,生物安全（biosafety）是生物技术安全（safety of biotechnology）的简称 狭义地指现代生物技术的研究、开发、应用及转基因生物可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜在的危害。 广义地指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜在风险。,*病原微生物所致的

16、安全问题，如病原微生物实验室的安全隐患、生物武器、生物恐怖、重大传染病的暴发流行等，也是人类社会所面临的最现实的生物安全问题。 *病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散和防感染。 *关于病原微生物实验室生物安全，我国法令包括对病原微生物的分类管理，对实验室的分级管理，实验室感染的控制以及监督和法律责任等。,一、病原微生物的分类,根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类： 第一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 第二类是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。

17、第三类是指能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。 第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等 第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。,二、病原微生物实验室的分级,*一、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动。 *从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有名以上的工作人员共同进行。在同一个实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度 。,*实验室工作人员

18、应掌握实验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能。应有符合要求的防护用品，应建立健康档案；进行预防接种。 *实验室应有科学、严格的管理制度，定期对实验室设施设备、材料等进行检查、维护和更新，应对废水、废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染。,生物安全,三、实验室感染的控制以及监督和法律责任,实验室感染控制工作包括定期检查实验室的生物安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和废气以及其他废物处置等实施情况。 实验室发生高致病性病原微生物泄漏时，预防、控制措施包括： 封闭被病原微生物污染的实验室或可能造成病原微生物扩散的场所； 开展流行病学调查； 对病人进行隔离治疗，对相关人员进行医学检查； 对密切接触者进行医学观察； 进行现场消毒； 对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。,*监督的主要内容是监督病原微生物实验室执行国家有关法律、行政法规、国家标准和要求的记录、档案及报告的情况。 *法律责任的核心是承担造成传染病传播、流行或者其他严重后果的法律责任。,1.杀灭芽胞最常用和最有效的方法是：_。 a.紫外线照射 b.煮沸5min c.巴氏消毒法 d.流通蒸气灭菌法