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1、植物脱毒与快繁,201004-15,一 。病毒与危害,病 毒 与 危 害,一.,病毒颗粒,病毒病种类,病毒病危害,柑桔的病毒病、类病毒及类菌原体病已发现的有15种之多。最重要的有速衰病、裂皮病、鳞皮病、碎叶病、青果病、杂色花叶病等。苹果的病毒病已发现的有10种以上,最主要的有矮果病、矮化病、花叶病、扁枝病、星裂病等。 枣树的枣疯病几乎传遍我国南北各省,影响生长结果。 桃叶有花叶病、X病毒病。 葡萄上已发现扇叶病、卷叶病、软木皮病、茎枝凹斑病、绿蔓皮尔斯病、黄花叶病、无味果病等七种。 广东的番木瓜斑叶病几乎毁灭了全省的番木瓜生产。这些果树病毒病严重制约了果树的生产和发展。果树病毒病的病原是病毒、

2、类病毒和类菌原体,均为非细胞生物,它们由核酸和蛋白质或聚胺组成。通常,果树病毒和类菌原体心部为核糖核酸(RNA),且只能生活在植物活细胞中,属于纯寄生生物,在活的寄主细胞中增殖,他们对寄主有一定的选择性,并发生特定的症状。如柑桔黄龙病和亚洲青果病的病原已被证明是类菌原体。,果树病毒病的种类,类型很多,病株周身带有病毒,但症状只表现在树体的某一部分。通常有下列形态上的表现: (1)花叶:花叶是果树病毒病的通常表现,一般指叶片上色泽不匀,斑驳、条纹、条斑、斑点、沿叶脉黄化、突脉等,例如,苹果环斑病、柑桔传染性杂色花叶病、桃叶片黄化病、番木瓜斑叶病等。(2)变形:丛枝、簇枝、矮化、徒长、畸叶、畸果、

3、小果、瘤肿、扁枝等。例如,苹果扁枝病、柑桔黄龙病、石果病、枣疯病等。(3)组织坏死及变质:顶芽坏死、韧皮细胞坏死、溃疡、星裂。例如,苹果锈果病、苹果星裂病、柑桔鳞皮病、柑桔裂皮病等。,果树病毒病症状,果树病毒病和类菌原体病传染主要途径: (1)昆虫或螨类传染方式:有些果树病毒或类菌原体能够寄生在昆虫体内,另外有些病毒虽然不能寄生在昆虫体内,但能通过昆虫或螨类及线虫的口器、胃、肠、血液及唾腺等传毒。例如,柑桔速衰病是由蚜虫或棉蚜刺吸了感染病毒的寄主后,再刺吸健全的寄主,由蚜虫口器传染病毒到健康的细胞组织中,但往往吸食几次后就无病毒的传染性。果树上可以传毒的昆虫很多,如叶蝉、飞虱、蚜虫、盲椿象、螨

4、类等。柑桔黄龙病是由木虱传染的,这种木虱自病树韧皮部摄取汁液后,要在体内经过21天的潜服期,再在淋巴液增殖,然后移入唾液腺,当它在果树枝叶上吸食时,含毒唾液就射到健康枝叶上。这种木虱易防治,许多杀虫剂均可杀死它。(2)嫁接传染:嫁接发病枝后,健康树因树液流动而感染病毒。例如,苹果锈果病和柑桔的黄龙病、裂皮病、鳞皮病、青果病,以及枣疯病都可通过芽接、皮接、靠接传病。,侵染途径,叶蝉1,叶蝉2,泡桐丛枝病,北京泡桐丛枝病,其中河北、山东、河南、山西和陕西五省为枣树的主产区。可是枣疯病是枣树上的一种毁灭性病害，迄今几乎分布于我国所有的枣树栽培区。枣树染病后结枣少、品质下降或不结枣，甚至引起苗木死亡，

5、造成的极大经济损失。在多数病害发生和流行区此病害尚未得到有效控制，因而随着枣树栽培面积的扩大，此病害更有蔓延和加重趋势。此病害是一种传染性极强的周身感染的系统性病害，可通过嫁接、带病种苗和介体昆虫传播，种苗是病害长距离传播的主要途径。枣疯病除在韩国和印度发生外， 泗洪枣区因遭受毁灭性的枣疯病危害，至使泗洪枣区98%的枣树染病死亡。,枣疯病,枣疯病在发生普遍，山区的酸枣树发生更普遍。七十年代，著名的密云小枣毁于此病。九十年代初，密云西田各庄试图恢复此名产，试种200亩，也毁于此病。此病已成为发展枣树生产的主要障碍。 枣疯病是由一种细胞内的寄生物类菌质体侵染所致。枣树一旦补侵染，类菌质体在枣树体内

6、迅速繁殖、遍布全身，症状逐年加重，由病树长出的萌蘖也带有病原物。病树一般在2-3年内死亡。对病树目前没有有效的治疗方法，对病接穗也玩法进行消毒。 中华拟菱纹叶蝉是枣疯病的自然传播媒介，试验指出，该虫在疯树上饲喂7天即可传病。,症状感病桑树，节间缩短，叶序紊乱，簇生成扫帚状。病叶叶形变小，失绿变黄，质地粗硬，早落。病株先是局部枝条发病，后逐渐蔓延到全株。 症状可分为3种。 黄化型：病枝上部叶片缩小变薄，叶片反卷，显著变小，似猫耳朵。叶色梢黄，后显著黄化，叶片质地粗糙，叶脉变细。病株23年枯死。 萎缩型：病叶缩小，叶面皱缩或不皱缩。经数年后整株死亡。 花叶型：叶缩小，向上卷缩，在同一病枝上叶片常有

7、表现或不表现症状的间隙现象。叶有半边无缺刻，侧脉间出现黄绿相间的花叶，叶片质地粗糙。病株可延续多年不死，但易受冻害。,桑萎缩病,示萎缩型,示花叶型,二脱 毒 方 法,一茎尖脱毒,1。原理,2。芽的结构,3。茎尖附近情况,4。生长点的大小,茎尖培养无病毒植株病毒在植物茎尖呈梯度分布。Hollings测定石竹脉斑病,用0.1mm茎尖培养,感染病毒比例占33%,而1mm茎尖感染病毒比例占100%,这说明茎尖越小,携带病毒的组织就越少。英国果树研究所发现苹果矮化砧木M9、M26、M27发生病毒矮化症,用茎尖培养将M26矮化砧在8个月繁殖6万株无病毒砧木苗,开展工厂化育苗。柑桔茎尖培养表明0.2mm以下

8、的茎尖不带毒。操作时切取0.140.16mm茎尖,带23个叶原基,在MS培养基分化茎、叶、根。这些无病毒植株是无性繁殖的营养系,没有童期,能很快开花结果。,例 1,例 2,5。方法,二高温脱毒,植物脱毒箱,加热器,L,H,热处理治疗在高于正常温度下,植物组织中的很多病毒可被部分或完全钝化,但很少伤害甚至不伤害寄主组织。 可通过热水或热空气进行。热水处理对休眠芽效果较好,热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好,既能消除病毒,又不伤害寄主植物。 苹果的各种病毒能耐38C,把树苗先在38C暖气中处理两周 然后再放在46C暖气中,每天8小时处理7周, 最后放在50C暖气中,每天2小时共放3天。 在变温处理

9、时,加人工辅助光源6000Lx/m2,相对湿度维持5090%,取枝条顶端第48个芽嫁接,可以除毒。,果树病毒病的防治,柑桔接穗热处理时,要求在暖房中预处理 白天最高温度2840C, 夜晚2427C, 进行34个月， 再进行50C热处理4小时，效果较好。 接穗从果园取回,如果立即用湿热空气处理,它们不能存活。 但当接穗首先通过预处理接穗能很好存活。 如能应用自动控制的人工气候箱进行热处理,则更为方便,例证,三低温脱毒,四化学疗法脱毒,五愈伤培养脱毒,六茎尖微体嫁接,以成年品种组培繁殖的无根小苗（微枝）作接穗，用枝接或芽接的方法嫁接在核桃实生幼苗砧木上，获得无性系苗木。 该项技术在外植体准备、组培

10、苗培养技术以及嫁接方法、愈合环境控制等方面均有创新。用微枝及微芽（组培苗的顶梢或未萌发的侧芽）进行嫁接， 在温度25、相对湿度接近饱和的条件下，一、二级组培微枝和微芽的嫁接成活率分别达到80%和75%，嫁接苗田间移植保存率在95%以上，一年生嫁接苗高度随嫁接早晚、生长期长短而有所不同，可达到0.51.5米以上。核桃微体嫁接与常规嫁接方法相比，具有成本低、生长周期长、成苗快、苗木长势健壮、易于移植等优点，并能在短期内用离体快繁法获得大量新品种穗条，迅速繁殖大量优良品种。该技术在子苗嫁接技术的基础上，将现代生物技术应用于核桃良种繁育，是核桃良种繁育技术的重大突破，可有效解决我国核桃良种苗木紧缺问题

11、，加快核桃良种化进程。推广技术内容包括：优良核桃品种的组培快繁；砧苗培育；微枝嫁接方法；微芽嫁接方法；嫁接后愈合环境的控制。,核桃微体嫁接技术,茎尖微芽嫁接首先应用于柑桔无病毒良种培育,解决茎尖培养不易生根的矛盾。 取茎尖部分带有3个叶原基0.140.18mm的生长点, 嫁接在试管播种萌发的砧木苗上,获得高频率的无病毒植株, 脱除裂皮病、速衰病、叶脉突出病、缩叶病等病毒病。整个操作过程在超净台上和显微镜下进行。,茎尖嫁接,试管内嫁接法,接穗,砧木,培养基,无毒苗,微枝 茎尖,柑桔种子具有多胚性, 除了一个有性胚以外, 其它的胚是来源于不含病毒的珠心细胞。 通过培养珠心胚,可以得到脱除病苗的新生

12、系,然后嫁接繁殖成无病毒植株。 Navarro等用此法培养Washington、Newhall、Nevelina等甜橙的无病毒珠心苗,并进行结果品质鉴定。,七珠心胚培养,八花药脱毒,果树多为无性繁殖，长期种植后病毒积累较多，病毒病危害严重，花药培养也是一个很好的途径，目前已草莓上广泛使用，脱毒率在 90% 以上 。,九综合脱毒法1,高温箱,综合脱毒法2,1。选择无或少病毒植株 2。接种去分化长愈伤组织 3。快繁苗木 4。高温+茎尖处理 5。重复处理2-3次 6。鉴定有无病毒 7。生产应用,三。病毒检测,1,2,3,琼脂双向扩散+打孔,凝胶 + 抗体+抗原,柔化处理 + 抗原 +抗体,4,5,6

13、。PCR检测法,待测脱毒植物病毒总DNA序列 ACGGGTTATCGGTCGAATAACACGGGCAATTTTACGATTAGACTAACGGGGAGAC TGCCCAATAGCCA 引物 TGCCC 随机引物,ACGGGTTATCGGTCGAATAACACGGGCAATTTTACGATTAGACTAACGGGGAGAC TGCCC AATAGCCAGCTTATTGTGGCCCTTAAAATGCTAAT TGCCC TGCCC ACGGGTTATCGGTCGAATAACACGGGCAATTTTACGATTAGACTAACGGGGAGAC TGCCC AATAGCCAGCTTATTGTGCCCGTTAAAATGCTAATCTGATT GCCC CTCTG TGCCC TGCCC TGCCC,病毒标准谱带,待测植物谱带,A 随机引物,B