化学发光原理及应用.1.ppt

1、化学发光原理及其应用,主要内容,化学发光基本原理 化学发光的分类 化学发光法的临床应用 化学发光免疫测定的特点,Part I. 化学发光基本原理,一、化学发光原理：伴随化学反应的光发射现象 某些物质在进行化学反应过程中，由于吸收了反应产生的化学能而被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光，这种吸收化学能使分子发光的过程称为化学发光(chemiluminescence) 。 化学发光反应存在于生物体(萤火虫、海洋发光生物)中，称生物发光(bioluminescence)。,1877年 洛粉碱CL 1905年 洛粉碱类似物 1928年 鲁米诺 1935年 光泽精 发现许多有机反应可产生CL,

2、生物体化学发光现象的研究起源于古代，但是，直到十九世纪末，这种现象与简单的有机反应相联系才得到解释。,二、化学发光反应发生的条件,化学反应是放热反应。 必须存在形成电子激发态的通道。 激发态分子必须以辐射光子的形式回到 基态, 或将能量传递给荧光分子。,能量，通道，荧光物质,北京源德化学发光分析仪,MAGLUMI 化学发光分析仪,Part .化学发光的分类,按化学反应类型可分为：酶促化学发光和非酶促化学发光两类 按发光持续时间可分为：闪光和辉光两类,Part III. 化学发光法的临床应用,甲状腺功能的免疫分析 糖代谢紊乱的免疫分析 常见肿瘤标志物及其免疫分析 常见传染性疾病的免疫检测 病毒性

3、肝炎 HIV感染 严重急性呼吸综合征（SARS) 其他免疫检测项目,甲状腺功能的免疫分析,甲状腺机能的常见评价指标及其临床意义 1.甲状腺机能亢进 2.甲状腺功能减退 3.低T3和低T3、T4综合征,一、甲状腺机能亢进,1972年提出T3型甲亢的诊断标准： 1.甲亢的症状和体征，常无突眼征，但心血管症状较明显； 2.血清TT4、FT4值正常； 3.TT3、FT3值升高； T3型甲亢在临床上并非罕见，特别是缺碘地区患功能自主性腺瘤的部分患者，或用T3治疗后出现的碘甲亢，目前认为T3型甲亢不能算作一种独立疾病，因为发现T3型甲亢病人中有一部分虽然TT3升高但FT3正常或低于正常，因此改称高T3综合

4、征为妥。 T4型甲亢，即T4毒症患者血清T3、FT3浓度正常；而T4、FT4浓度升高。TSH值为正常低值或低于正常，并伴甲亢临床症状。,二、甲状腺功能减退,甲减为甲状腺激素分泌不足引起的代谢性疾病。临床上分为原发性甲减，又称魏甲状腺性甲减；以及继发性甲减，又称垂体-下丘脑甲减两类。血循环中甲状腺激素浓度的测定在诊断甲减方面，TSH和FT3、FT4是灵敏的诊断指标，明显优于总甲状腺激素，如TT3、TT4等。其价值依次为TSH= FT4TT4FT3TT3.,三、低T3和低T3、T4综合征,低T3综合征是一种由于非甲状腺疾病 造成的甲状腺激素异常，其发生与机体的代谢状态，基础疾病的性质和严重程度以及

5、外来因素，如用药等有关。代谢状态差、基础病情加重时其发生率随之增高；当病情好转、机体健康状况趋于正常时，低T3状态可自行消失。,四、其他与甲状腺疾病有关的免疫学指标,抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb） 多见于桥本氏甲状腺炎、自身免疫性甲状腺疾病、原发性甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进患者等。 抗甲状腺微粒体抗体（TMAb） 多见于桥本氏甲状腺炎、自身免疫性甲状腺疾病、原发性甲状腺功能亢进、原发性甲状腺功能减退。,小结,综上所述，若对甲状腺功能 指标进行全面评价，则上述各项指标对甲亢的诊断价值依次为FT3FT4TT3TT4；各项指标对甲减的诊断价值依次为FT4=TSHTT4FT3TT3,二、糖尿病的免

6、疫学检测,以下是临床上常见的有关糖代谢紊乱的免疫分析指标： 1. C肽 2.胰岛素 3.胰岛素抗体 4.谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab） 5.胰高血糖素,C肽,C肽测定用于了解II型糖尿病人是否需要胰岛素治疗，如果C肽水平较低，葡萄糖刺激反应差，则表示表明立即或最终需要胰岛素治疗，也可用于评价糖尿病酮症酸中毒病人的胰岛功能。C肽的另一个重要的临床用途是各种低血糖病因的鉴别。C肽水平升高科见于轻型糖尿病患者，常见空腹血糖升高不多者C肽大多高于正常。胰岛素瘤患者，如血中存在胰岛素抗体，血清C肽大都增高。胰腺肿瘤患者行胰腺切除后，如血清C肽仍可测出，提示手术未能全部切除胰腺组织。如果手术后一度阴性，

7、后又称为阳性，提示肿瘤复发或转移。 在肝硬化时，血浆胰岛素有升高趋势，其原因在于肝脏摄取和降解胰岛素减少；但空腹血糖正常。,胰岛素,胰岛素在糖尿病的分型和诊断中意义重大，其中 I型又称胰岛素依赖型糖尿病（IDDM），空腹血浆胰岛素较低，口服葡糖糖试验（OGTT)或馒头餐后上升及下降极缓慢，甚至无任何变化，说明其胰岛细胞功能极差。II型又称非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM），包括需胰岛素治疗和不需胰岛素治疗两类，其特点为空腹高胰岛素血症；OGTT后胰岛素释放延迟，高峰后移，但总释放量不低，约12%的病人呈低反应或延迟反应说明II型糖尿病和I型糖尿病有本质的区别。 另外胰岛素对肝病、胰岛素瘤、甲状

8、腺功能亢进的诊断也有一定的意义。,常见肿瘤标志物及其检测,胚胎性肿瘤标志物 含糖物质类标志物 酶类标志物 激素类标志物,胚胎性肿瘤标志物,这一类肿瘤标志物是指那些原本只能在胎盘期出现，但在机体发生肿瘤时，其基因表达被再度激活，从而重新再成年个体出现的蛋白，其常见的检测标志如下：,CEA,原发性结肠癌，患者CEA升高者占45-90%. 胰腺癌、胆管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系肿瘤，阳性率50-70%。 结肠癌患者手术切除后1-3周内血中CEA水平可降至正常水平。如术后CEA持续阳性，说明手术切除不完全或癌肿发生转移，提示病人预后较差或者有复发的可能。 良性肿瘤、炎症和退行性疾病，如结肠

9、息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎盒酒精性肝硬变病人CEA也有部分升高，但远远低于恶性肿瘤，一般小于20g/L.所以测定CEA可作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据。 吸烟也可能导致CEA升高。,AFP,原发性肝癌：AFP作为原发性肝癌重要指标之一，特异性强，灵敏度高。因此AFP为十分有价值的临床检查及普查项目，阳性率达90%。血清含量大于400g/L作为原发性肝癌的诊断阈值。 孕妇血清AFP与胎儿状态 当胎儿患低氧症、宫内死亡、遗传缺陷、先天性神经管畸形、无脑儿、脊柱裂等，母体血清AFP异常增高。 其他肿瘤 有报道指出，68%-92%卵黄囊肿瘤患者血清AFP上升,含糖物质类标志物,CA125 是上皮性卵

10、巢癌和子宫内膜癌的标志物 CA153 存在于多种腺癌内，如乳腺癌、肺癌、肺胰癌及卵巢癌等，是检测乳腺癌比较重要的抗原 CA199 通常作为胰腺癌和结、直肠癌的标志物 CA50 是胰腺和结、直肠癌的标志物 CA72-4 其检测结果与CEA有互补作用，可用于检测原发性乳癌、胃癌、直结肠癌以及卵巢癌患者残余肿瘤细胞，可与CA-125联合用于卵巢肿瘤的诊断及复发检测，可与CA-199联合应用于胃癌的诊断以提高阳性率，也可用于胃癌术后监测早期复发。 CA242 可用于胃肠道恶性肿瘤病人的治疗监控和复发检测。,酶类标志物,前列腺特异性抗原 PSA是前列腺癌的特异性标志物，也是目前少数几个器官特异性肿瘤标志

11、物之一。前列腺癌是男性泌尿系统的主要囊性肿瘤，血清PSA定量测定的阳性临界值大于10g/L,此时前列腺癌的诊断特异性达90-97%。 神经元特异性烯醇化酶（NSE） 对小细胞肺癌的诊断，鉴别诊断、病情判断及疗效的估计都有实际的意义。,激素类标志物,降钙素 ：（1）甲状腺髓样癌 此种癌起源于甲状腺滤泡旁细胞，可产生多种生物活性物质，其中以降钙素为主，患者血清降钙素水平高于正常数十到数百倍。（2）肺小细胞癌 人绒毛膜促性腺激素（HCG） HCG测定对葡萄胎、绒癌的诊断和化疗后的疗效观察，以及葡萄胎终止后的随访有重大意义，一般而言，良性葡萄胎、恶性葡萄胎、绒癌治疗前HCG均增高，其升高顺序为：绒癌恶

12、性葡萄胎良性葡萄胎。,常见传染性疾病的免疫检测,病毒性肝炎 HIV感染及艾滋病（AIDS） 严重急性呼吸综合征,病毒性肝炎,甲型病毒性肝炎 通过粪-口途径传播引起的急性传染性肝炎，目前尚未发现有慢性病例。 乙型病毒性肝炎 是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝脏炎性损害，是我国当前流行最广泛、危害最严重的一种转染病。乙肝常见免疫学指标有：A、潜伏期,HBsAg阳性或伴有乙肝病毒脱氧核糖核酸聚合酶(HBVDNAP)和HBsAg阳性。B、急性期， HBsAg，HBeAg,HBcAg,HBV-DNA, HBVDNAP，前S蛋白均可阳性。,乙肝定量检测的方法及其优点,a. 检测方法：目前有时间分辨，荧光定

13、量PCR定量检测，化学发光法。 由于乙肝病毒容易发生变异，再加上乙肝定性实验的局限性，会出现假阴性结果，导致不能及时发现乙肝的感染，也就不能及时的得到治疗，对医护人员和其他的患者也存在被传染的威胁。乙肝五项定量检测目前最先进的化学发光法，避免了假阴性和漏检的问题，而且准确，尤其对乙肝病人的疗效观察提供了依据，这是检验发展的趋势。 乙肝五项定量检测的独特优点： 一、对于乙肝患者而言： 1、通过定量检测乙肝标志物，能直观地显示体内五项指标的具体情况，不再是简单的“阴性”和“阳性”，有利于动态观察病情，为选择治疗方案提供重要依据； 2、定量检测方法更灵敏，能测出低水平复制的样本，特别是“窗口期”的感

14、染者，定量检测法可以有效检出，能减少漏诊； 3、定量检测的测定范围更宽，定性检测时候，高浓度的乙肝表面抗原样本需要稀释，否则会有假阴性出现，但是，定量检测能有效检出高浓度的乙肝表面抗原样本。 二、对正常体检者而言： 1、可反映HBV-抗体的浓度变化，有利于对机体免疫状况进行评估，对注射乙肝疫苗有指导意义。,几种常见的乙肝模式,几种少见模式,病毒性肝炎,丙型病毒性肝炎 是由丙型肝炎即HCV感染所致。其传播途径与乙肝类似，主要包括血液传播、性接触传播、母婴传播、日常生活接触等。,其他检测项目,临床常见药物的浓度检测 1.抗心甙类：西地兰、地高辛、洋地黄毒等； 2.抗癫痫药：苯妥英、苯巴比妥、酰胺咪

15、嗪、乙琥胺等； 3.三环类抗抑郁药：丙咪嗪、去甲丙咪嗪、去甲替林、阿米替林、多虑平等； 4.茶碱：氨茶碱； 5.抗心律失常药； 6.氨基甙类抗生素：链霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素； 7.环孢素A。 肾上腺激素：儿茶酚胺类激素等 性激素测定：促黄体生成素、卵泡刺激素、垂体泌乳素、睾酮、孕酮、雌二醇。 内分泌免疫分析：腺垂体激素、生长激素、促肾上腺皮质激素等。,Part .化学发光免疫检测的特点,敏感度高，甚至超过RIA 精密度和准确性均可与RIA相比 试剂稳定，无毒害 测定耗时短 发展成自动化系统,有专家做过试验，用化学发光法和放射免疫法同时测定60例甲胎蛋白（AFP）含量，结果表明，两种方法的相关性良好（=0