用多聚酶链式反应扩增DNA片断.ppt

1、第一，基本知识，(a)，PCR技术的概念是在体外快速扩增DNA片段的技术，可以使用很少的DNA作为模板，在几小时内复制数百份DNA拷贝(2)，PCR技术的应用遗传疾病诊断，犯罪调查，古生物学，基因克隆，DNA。因此，DNA复制需要引物操作。2，DNA合成的方向，(1)DNA单链两端的命名，基本单位脱氧核苷酸，1碳，5碳，3碳，在一个核苷酸上的磷酸基团的“OH”和另一个核苷酸分子的第三位碳原子的羟基之间失去了一个水分子，形成了数量庞大的4茄子脱氧核苷酸3，5-通常DNA的羟基“OH”端称为3端，磷酸基团端称为5端，在一个核苷酸上的磷酸基团的“OH”和另一个核苷酸分子的第三个碳原子上的羟基之间失去

2、一个水分子，形成3，5-磷酸二酯键。庞大数量的4茄子脱产核苷酸3，5-磷酸二酯键徐璐连接，形成脱产核苷酸链。一般来说，DNA的羟基“OH”端称为3段，磷酸基团的末端通过5段、大量的4茄子脱产核苷酸3，5-磷酸酯键徐璐连接，形成脱产核苷酸链。一般来说，DNA的羟基“OH”端称为3段，磷酸基团的端称为5段，引物：单链DNA或RNA，通常2030个碱基与DNA母链的碱基序列互补配对。后续处理：DNA聚合酶I不仅可以引物切开，合成空处的DNA单链，然后连接到DNA连接酶不连续的DNA子链，促进DNA聚合酶形成磷酸二酯键，还具有校准功能。它每次引进一个核苷酸都要检查一次，碱基对不能出错才能收敛到继续以下

3、。为什么DNA分子能够准确地复制？DNA双螺旋结构提供了模板。碱基互补配对；DNA聚合酶复查功能。DNA聚合酶不能从一开始合成DNA，只能用3段扩展DNA链。DNA合成的方向从子链延伸到5段到3段，DNA聚合酶不能从头合成DNA，DNA链只能延伸到3段。DNA合成的方向从子链延伸到5段到3段，3，DNA复制的前提是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，双链解锁，温度控制，DNA双链，单链，变性(加热80-100)，复性(缓慢冷却)，4，DNA分子的热变性原理：变性目的：复性目的：变性：高温

4、聚合酶；调节温度，但不需要海鲜酶。2，PCR的反应过程可以提高大分子模板DNA完全变性的概率。1，周期前一次字典变性，2，PCR通常需要30多次循环。(1)变性：温度上升到90以上时，双链DNA就会释放。(2)复性：温度下降到约50，两个引物都通过碱基互补配对与两个单链DNA结合。(3)延长：温度上升到约72，溶液中4茄子脱酸核苷酸(A，T，C，G)根据DNA聚合酶的作用，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。第二，PCR的反应过程、第三，每个周期包括变性复性扩展、(1)PCR循环-变性、(95变性、(1)PCR循环-变性、95变性、(1)PCR循环。其他引物和引物，4，循环特性：最后一个循环

5、的产物是下一个循环的模板。结果第一个父链中有两个不同的子DNA分子。两个引物之间的DNA序列是金志洙生长2N，2，实验阶段：准备PCR反应系统的配方P62，使用手指轻轻弹回管壁，离心10分钟，将离心管插入PCR仪，设定循环程序，传记灵动检测PCR结果，3，操作提示1，操作提示1使用前，取出所需的试剂冰箱，放在冰上，慢慢融化。3在微量离心管中添加反应成分时，每吸一种试剂，移动器的枪头就必须更换。添加所有成分后，盖上严密的离心管的盖子，用手指轻轻弹出管的侧壁，均匀混合反应液，将微量的离心管放在离心机上，离心管底部约10s，将反应液集中在离心管底部，然后放入PCR仪中反应。目的：避免外源性DNA的大

6、量扩增引起假阳性反应。视频，实验程序：(1)根据模板所需的试剂(准备)(2)根据微量移液器配方，在微量离心管上盖上每一分钟(流动液)(3)严格离心管的盖子，然后利用手指(混合)(4) DNA的牙齿特征、四、结果分析和评价(理解)、二、具体方法如下：1)将样品稀释50倍。接受2LPCR反应液，加入98 L蒸馏水。2)将蒸馏水作为空白对照组，将波长260nm的紫外分光光度计(图5-12)的读数调节为0。3)将第一阶段的DNA稀释液100L放入比色杯中，测定260nm的光吸收值。4) DNA含量按以下公式计算：DNA含量(g/ml)=50 x(260nm读数)x稀释倍数，理论上计算DNA扩增数，1个，1个DNA，复制N次，DNA 2 n次，2个，A个DNA，复制N次；快速、高效、灵活、易于操作。回顾：PCR技术与体内DNA复制的差异：1。PCR不需要降解酶。需要在体内复制DNA，2 .PCR需要耐热DNA聚合酶