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文档简介

1、生物素，亲和素标记技术，广州医学院第一附属医院检验科廖伟娇，一、生物素及其理化性质1概念2分子式结构特征溶解特性等电点及其他特性，1概念：生物素(biotin )是动、植物体内广泛分布的小分子生长因子，又称辅酶r或维生素h。 分子式： C10H16O3N2S分子量： 244.31，结构特征：咪唑酮环/四氢噻吩环结合亲和素侧链末端羧基结合蛋白质溶解特性：难溶于水，二甲基甲酰胺(DMF )、等电点： PH=3.5及其他生物素衍生物)， 生物素衍生物的种类和特性： 1生物素羟丁酸酯(BNHS): DMF制备：生物素N-羟基琥珀酰亚胺二环己基碳二亚胺标记的特征： BNHS中羧基与蛋白质中赖氨酸氨基的结

2、合被标记的目的是标记Ab、酶、 中性或偏碱性Ag长臂活化生物素(BCNHS): DMF 6-氨基己酸的制备：生物素N-羟基琥珀酰亚胺二环己基碳化二亚胺(在BNHS的b和羧基之间插入2分子的6-氨基己酸)标记特征： BCNHS中的羧基和蛋白质中赖氨酸氨基的结合酶，中性或甲碱性的Ag，DNA，3生物素酰肼(BHZ ) :配制：生物素水合酰肼标记的特征： BHZ与蛋白质中的醛基结合标记应用：甲酸性的蛋白质，酶，dhz 标记亲和素及其理化性质的概念2分子式链球菌：从链球菌属的菌培养液中提取的蛋白质分子量： A: 6.7KD SA: 66.5KD，3结构特征：每分子由4个亚基组成的溶解特性：可溶于水C=

3、5mg/ml等电点： A: PH=10.5 SA: PH=6.0比活性： A12u/mgP SA 14u/mgP、四、丙烯活性及其测定1丙烯活性：表示丙烯结合生物素，活性测定：羟基偶氮苯-2-羧酸(HABA (红色) B A-B (出现黄色时的b的量)分光光度法：五、生物素标记物及亲和素标记物的制备： 1生物素标记物的制备： B Ab/Ag/E交联剂B-Ab/Ag/E亲和素标记物的制备： A/SA Ab/Ag/E交联剂a/sa-ab/aab BAB法： agbabag-ab baag-ab b-Abe ag-ab b-a-be的特征：用游离a分别连接b-ab和B-E、 ba法：作为agbabag-的ABC法： abea-be- abcagbabag-abbabcag-ab b-ABC的特征：首先使b

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