菠萝蛋白酶的制备及其活力的测定.ppt

1、菠萝蛋白酶的制备及活性测定菠萝蛋白酶简介菠萝蛋白酶广泛存在于菠萝果实、芽、叶和茎中，被称为从菠萝果实中提取的水果菠萝蛋白酶和从菠萝茎中提取的茎菠萝蛋白酶。菠萝蛋白酶的分子量为33000，是一种典型的巯基蛋白酶，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺。其蛋白水解活性比木瓜蛋白酶高十倍以上，因此具有广泛的应用。菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂，可用于肉类品质的嫩化、啤酒的澄清以及奶酪、明胶和水解蛋白酶的生产。在医学上，它可以用来溶解生物体内的纤维蛋白和血凝块，因此它可以用来治疗水肿和各种炎症；能迅速溶解痂皮，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。1.高岭土吸附法2。单宁沉淀法3。超滤法1.1高

2、岭土吸附法。高岭土吸附法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括压榨。将菠萝渣洗净，用压榨机榨出汁，加入0.05%苯甲酸钠保存，快速过滤去杂。吸附。将果汁转移到吸附罐中，搅拌，同时加入4%高岭土，搅拌约20分钟，在10吸附3060分钟，用虹吸管排出上清液，收集高岭土吸附物。洗脱。用16%氢氧化钠溶液调节吸附质的酸碱度至7.0左右，然后加入吸附质量为79的盐，搅拌30分钟，洗脱，然后快速压滤，收集滤液。盐析。将滤液收集在盐析罐中，用13盐酸调节酸碱度至5.0左右，边搅拌边向滤液中加入质量为25的硫酸铵，完全溶解后4小时后储存过夜；然后离心，收集盐析沉淀，即粗酶。溶解。将粗酶放入溶解罐中，加入10倍量的水

3、，用氢氧化钠溶液调节酸碱度至7.07.5，搅拌溶解，过滤除去杂质，收集滤液。沉淀并干燥。搅拌下用1:3盐酸调节滤液的酸碱度至4.0，静置1小时分离出酶，用离心机分离沉淀，真空或减压冷冻干燥得到精制菠萝蛋白酶。流程如图1所示。高岭土吸附法生产工艺和操作复杂，原料消耗多，设备要求高，酶活总回收率低，但产品质量较好，纯度较高，酶活可达4.0106U/g。高岭土吸附法提取菠萝蛋白酶的工艺流程为：菠萝下脚料、果汁、吸附质、湿酶、清液、湿粗酶饼、盐析、洗脱液、产品、压榨、 高岭土吸附、洗脱、压滤、盐析、离心、溶解、过滤、沉淀、干燥、鞣质沉淀等。加入稳定剂：将澄清液转移到生产罐中，搅拌下加入体积为0.05、

4、0.06、0.02的乙二胺四乙酸、二氧化硫和维生素C。 加入单宁：立即加入0.1%的单宁，在4下静置1小时，离心弃去上清液，收集沉淀。洗脱干燥：将沉淀物放入溶解罐中，加入23倍的抗坏血酸溶液，溶液的酸碱度为4.5(或用1:3盐酸调节酸碱度至3)，搅拌洗脱40分钟，然后过滤，收集滤液，减压干燥或冷冻真空干燥，得到精制菠萝蛋白酶。流程如图2所示。单宁沉淀法提取菠萝蛋白酶的工艺流程如下：菠萝下脚料、稳定液、单宁沉淀、果汁、澄清液、滤液、酶制品、压榨、除杂、加入稳定剂、加入单宁、洗脱、干燥、超滤，超滤法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括：压榨：将菠萝下脚料洗净，压榨机压榨。压滤或离心可以用来去除杂质。超

5、滤浓缩：将澄清后的液体在管式超滤装置中浓缩，使其体积浓缩至原来体积的1/5。沉淀：将浓缩液冷却至04，边搅拌边加入-20%的95%乙醇，直至混合溶液中的乙醇浓度为50，静置沉淀酶，除去上清液，得到湿酶。干燥：将湿酶在0减压干燥或冷冻真空干燥，得到精制菠萝蛋白酶。超滤生产工艺和操作复杂，设备一次性投资大。如果超滤后的浓缩液用高岭土吸附法或单宁沉淀法提取，可以大大节省其他辅助原料的消耗，降低总生产成本，产品质量好，纯度高，酶活高，酶活总回收率高，经济效益明显优于传统工艺。用有机溶剂沉淀法从超滤后的浓缩液中提取精制酶。由于低温的需要，生产成本增加，但产品质量、纯度和酶活性均优于前者，是菠萝蛋白酶提质的新技术。超滤提取菠萝蛋白酶的工艺流程如下：菠萝下脚料、果汁、清液、湿酶、浓缩液、酶制品、压榨、除杂、超滤浓缩、冷却、加入有机溶剂、沉淀、减压干燥、菠萝蛋白酶在医药中的应用、1。免疫刺激，控制免疫反应2。抑制血小板聚集和加速纤维蛋白原分解，具有抗炎作用。