肠道致病菌检验技术.pptx

1、第七章肠道病原菌检测与鉴定，第一节概要，一、食品中常见的肠道病原菌沙门氏菌志贺氏菌大肠菌变形杆菌埃尔森菌，二、生物学特性，一、形态与染色均为革兰阴性杆菌，中等大小，无芽胞，多有全身鞭毛运动，志贺氏菌无鞭毛2 .培养与生化反应(2)、肠道病原菌不分解乳糖，多不分解病原菌而分解乳糖、葡萄糖酸或产酸气体。 (3)、可还原的硝酸盐为亚硝酸盐。 三、抗原类型、四、致病性、(一)、致病物质1、内毒素：可引起机体发热、白细胞减少、低血糖、血压下降、重症病例休克。 2、外毒素：对小肠黏膜细胞有特殊的毒作用，引起拉肚子。 (二)、所发病的疾病1、伤寒和副伤寒2、食物中毒3、细菌性痢疾、五、微生物检查的基本程序、

2、标本处理增菌培养分离培养生化试验血清学鉴定报告、思路、1、肠道病原菌具有什么生物学特性2、肠道病原菌具有什么抗原？ 别名为什么？ 有什么特点？ 3 .列出肠道病原菌检查的基本程序，第二节，沙门菌检查，一，概况(一)沙门菌的发现和食物中毒(二)根据沙门菌的命名依据疾病命名发现地区命名发现者的名字命名(三)沙门菌的抵抗力60 30，(四)沙门菌的分类埃希菌族、沙门菌属中的细菌2，定义为肠杆菌科中的形态和培养特征，生化反应和抗原结构相似，是分解为O1噬菌体的革兰阴性杆菌群。 二、生物学特性，(一)，形态和染色：革兰氏染色阴性，无荚膜，无芽胞，多有鞭毛，有动力，短小杆菌。 (二)、培养特性1、好氧或兼

3、性厌氧、最佳温度37、PH7.27.4。 沙门菌(红色)侵入人体细胞，2、对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，37，24 h，可形成菌落中等大小，直径23mm，圆形或卵形，表面光滑潮湿，无色半透明，边缘整齐的菌落发酵GLU、甘露醇、山梨糖醇酸气体发生剂(伤寒鸡伤寒菌少数不气体发生剂) 2、不发酵乳糖、蔗糖、侧金黄花醇3、多数产生H2S ()、靛蓝基质(-)、不分解尿素的苯丙氨酸脱氨酸(-)、(四)、抗原结构主要两种表面抗原(k抗原) d、菌毛抗原、2、o抗原(1) O抗原的表示方法有58种，字母o (2)沙门氏菌的分组和表示方法有a、b、c、d、e、F Z、O51 O63、O65 O67、

4、(3) 沙门氏菌中的主要菌群及其群特异性抗原a群-O2 B群-O4 C群-O6 C1群-O7、C2群- O6 O8、C3群O10族E3群-O3、O15 E4群-O1、O3、o19、3、h抗原(鞭毛抗原)、耐热性差： 6015或醇4、表面抗原：沙门氏菌有3种： Vi、m、5抗原、k抗原Vi抗原位于菌体最表层，包围o抗原，可阻碍o抗原的血清学凝聚试验。破坏Vi抗原：含有6030，1005 VI抗原的沙门氏菌：伤寒沙门氏菌、c型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、三、沙门氏菌食物中毒、(一)、引起食物中毒的最常见沙门氏菌：老鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌业界关注：美国的两种花生酱包括沙门氏菌，(三)中毒的

5、原因，1、食用病畜的肉制品食品2、病畜、带菌人和动物污染食品3、用污水处理食品(四)、临床症状(病原菌)，1、由肠热病伤寒和副伤寒菌引起，潜伏期77 急性胃肠类：主要症状：头疼、发热、恶心、呕吐、拉肚子、冷汗、全身不适，病程23 d 3，败血症：高烧、寒冷、厌食、局部炎症2 .选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，抑制其细菌3 .选择性平板分离培养：分离必要细菌4 .生化试验：分离的细菌(二)、检验操作要点1、增菌：恢复被检菌，抑制杂菌生长，提高检出率。 前增菌：加工食品，37，48 h或1824h，生杂菌。 增菌培养基：增菌液一般为MM和SC种，如伤寒菌用TTB，用42培养。 2、平板分离、选择性

6、培养基： BS、DHL、HE、WS、SS BS中最好，DHL、HE、WS最好，SS最差的一般为BS和WS/SS两个平板，BS主要用于伤寒沙门氏菌的H2S、靛蓝基质、ph 三糖铁培养，典型沙门菌在三糖铁培养上的特点：表面(-)粉红、底层()黄、H2S ()底层有黑色的TSI培养基，可排除表面()黄、H2S (-)的培养物，其他培养物可能是沙门菌。 (2)其佟四个生化实验，靛蓝基质PH7.2尿素酶KCN赖氨酸脱羧反应： A1、A2多见，B1少见，(3)典型沙门氏菌的五个生化反应及其检测利用，a，典型的五个生化反应： A1 H2S ()靛蓝b.h2s 即，H2S(-)靛蓝基质(-) PH7.2尿素酶

7、(-) KCN(-)赖氨酸脱羧e ()可以补充ONPE试验，判定沙门氏菌属和埃希氏菌属() (1)、 沙门氏菌诊断血清种类： 10种组合血清：主要伤寒和副伤寒沙门氏菌鉴定26种组合血清：常见病原菌定组和分型57种组合血清：常见定型，初步非AF组菌型144种组合血清：全组，(2)，血清学检测步骤经抗原准备AF多价血清检测(判定是否为沙门氏菌)群特异性抗体血清(如O2、O4、O3、O7、O8、O9、O10、o11(o群判定) o单因子血清检测h因子血清检测(分型)报告检测，在食品中发现沙门氏菌2，血清学鉴定与生化反应思考题：1、典型沙门氏菌的5个生化试验结果如何2 .沙门氏菌的形态特征、培养特性如

8、何3 .沙门氏菌检查时为什么要进行前增菌和增菌？ 4、沙门氏菌有哪些抗原？ 各有什么特点？ o、h抗原是如何显示的？ 在AF群沙门氏菌中，代表每个群的o特异性抗原的独特因子是什么？5、沙门氏菌的哪些菌型携带Vi抗原，Vi抗原对o抗原血清波动试验有何影响，对含Vi抗原的菌如何进行o抗原血清学试验？ 6 .沙门氏菌在SS平板、TSI培养基中生长的现象如何，说明其原理。 7 .分离纯化后，如何选择最少的生化试验方法，初步鉴定检验菌为沙门氏菌属细菌。 8 .如何进行沙门氏菌的血清学试验。 第三节，志贺氏菌检验，一，生物学特性(一)，形态和染色革兰阴性短杆菌，无荚膜，无芽胞，无鞭毛23um*0.50.7

9、um，(二)，培养特性，1 4 .在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。 (三)、生化反应、1、发酵葡萄糖、产酸剂、宋氏志贺氏菌除外，不发酵乳糖。 2 .不发酵一侧的金银花、肌醇、水杨酸。 3 .不产生h2s，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。 (四)、抗原结构、1、抗原构成： o抗原：群特异性抗原： a、b、c、D K抗原： b群之外，一般分为k抗原、2、志贺氏菌的分群和血清型，志贺氏菌为4群的c群(鲍氏志贺氏菌):115型d群(宋内氏志贺氏菌):1型，志贺氏菌属抗原的分类，布4、5、6福氏痢疾菌(1、2、3、4、5型)鲍5、7、9、11、13、15型、靛基质-、乳糖

10、、宋氏志贺氏菌、靛基质-、靛基质，10和11的相关b组：组抗原是b组各型间的共同抗原(2)组间抗原关系： c 属外抗原关系志贺氏菌与艾希氏菌属的o抗原关系非常密切，除a组9型和d组宋氏菌外，4，k抗原对o抗原血清学试验的影响阻碍o抗原的血清学凝集试验，煮沸处理即可。 (五)志贺氏菌的抵抗力、志贺氏菌属在外界环境中的生存力宋内氏最强，福氏菌次强，志贺氏菌最弱。 一般在湿润土壤中可生存34天，在37水中可生存20天，在粪便内(室温)可生存11天。 日光在30分钟、56-6010分钟内被杀死，对高温和化学消毒剂敏感，1%石炭纪中的15-30分钟内被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感，但容易产生耐药性

11、。 二、志贺氏菌的致病性和食物中毒，(一)流行病学、感染源、食物、患者、粪便、蝇等，(二)志贺氏菌的致病性，病原因子：侵袭力、菌内毒素，(二) b .慢性细菌性痢疾：慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。三、微生物检测，(一)检测步骤(程序)检测样品处理增菌培养SS，EMB平板分离培养初步生化检测最终血清学鉴定报告，(二)检测操作要点，志贺氏菌在常温下存活时间短，应尽快进行试验。 24h以内无法检查时，样品不能在冰箱内长时间检查，请放入低温冰箱内。 1、增菌培养、培养基： GN增菌液361 68h，培养液出现轻微混浊后停止培养。 2、分离培养，高选择性平板： SS或HE，WS弱选择性平板：

12、EMB或麦康数为工作中361培养1824h，菌落特征：无色透明，中等大小，光滑圆形菌落。 HE平板的原理和反应、发酵乳糖的某些肠杆菌、不发酵乳糖的某些肠道菌，以及产生硫化氢的沙门氏菌、不发酵乳糖的肠道菌、志贺氏菌、SS平板的原理和反应SS Agar (Salmonella Shigella Agar )、大肠菌等可能是黑色的没有黑色中心，可能是志贺氏菌的麦康凯琼脂平板，EMB平板照片和原理，3，初步生化鉴定，从平板中选取34个可疑菌落，接种TSI和葡萄糖半固体培养基各一管，36，1824 h，三糖铁(TSI )。organism test result1. Pseudomonas aerugi

13、nosa (绿脓菌):motile2. staphylococcusaureus:non-motile3. baci LLE (2)基底层没有产酸气体，呈黄色志贺氏菌在半固体培养基中生长：沿线生长，无动力。 志贺氏菌检查可以废弃的培养物： (1)在TSI表面扩展生长的培养物(1824h发酵乳糖、蔗糖的培养物(3)不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的培养物。 (4)产气剂培养物；(5)有动力的培养物；(6)h2s的培养物；(4)血清学试验和生化鉴定试验；(1)血清单位型：志贺氏菌凝固，采集三糖铁琼脂上的培养物，进行玻璃板凝聚试验。 首先用4种志贺氏菌的多价血清检查，如果因k抗原的存在而不发生凝聚，则呈煮沸菌液后必须检查的凝聚，则用A1、A2、b组多价和d组血清分别进行试验。 b组福氏志贺氏菌，用组和型因子血清分别检查。 福氏志贺氏菌的各型和亚型的型和群抗原如表1所示。 用群因子血清检查后，可根据群因子血清凝集的结果，依次选择型因子血清检查。 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可以用鲍鱼多价1、2、3分别检测，还可以用115