版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、实 验 二 酶促反应动力学实验,实 验 原 理,1、酶促反应的特性:高效性、高特异性、高不稳定性、可调节性。 反应体系的条件必须严格控制。 2、酶活性测定的基础是化学反应速度的比较,即酶催化的化学反应速度与无酶或酶失活情况下化学反应速度的比较。 反应速度通常以测定单位时间内产物生成量或底物的减少量来确定。,3、酶催化反应的典型曲线是随着时间的延长,反应速度下降,由起初的直线变为曲线。 测定酶活性的所有反应速率的比较都必须依赖该曲线的线性部分,因此要测定最初反应速度,即底物浓度变化在底物起始浓度的5以内的速度。,4、实验对象:碱性磷酸酶(AKP),磷酸苯二钠,碱性磷酸酶,苯酚磷酸氢二钠,4-氨基
2、安替比林,K3Fe(CN)6,醌衍生物(红色),碱性条件,一、pH对酶促反应速度的影响 碱性磷酸酶(AKP)的最适pH值是10。 二、温度对酶促反应速度的影响 碱性磷酸酶(AKP)的最适温度是37。,三、底物浓度对酶促反应速度的影响碱性磷酸酶米氏常数的测定,米-曼氏(Michaelis-Menten)方程:,Lineweaver-bulk(林贝氏方程)方程:,操作:,1、不同浓度基质液的配制:,混匀。,2、另取试管9支,做酶促反应:,混匀,37 水浴保温5分钟左右。,加入酶液后立即计时,各管混匀后在37 准确保温15分钟。 3、保温结束,立即加入0.5mol/L NaOH 1.0 ml 以中止
3、反应。 4、各管分别加入0.3% 4-氨基安替比林1.0 ml及0.5 铁氰化钾 2.0 ml,充分混匀,放置10分钟,以管1为对照,于波长510 nm处比色。,酶活性计算及Km值求取 1、在37C下保温15分钟产生1mg酚为1个酶活性单位,从标准曲线查出释放的酚量(ug),以此计算处各管的酶活性(v)。 2、以1/v为纵坐标、1/S为横坐标,在坐标纸上作图,求出酶的Km值。,Km?,四、抑制剂对酶促反应的影响,竞争性抑制作用,非竞争性抑制,反竞争性抑制,实验所用的抑制剂是磷酸氢二钠。,操作,1、不同浓度基质液的配制:,混匀。,2、另取试管9支,做酶促反应:,混匀,37 水浴保温5分钟左右。,
4、加入酶液后立即计时,各管混匀后在37 准确保温15分钟。 3、保温结束,立即加入0.5mol/L NaOH 1.0 ml 以中止反应。 4、各管分别加入0.3% 4-氨基安替比林1.0 ml及0.5 铁氰化钾 2.0 ml,充分混匀,放置10分钟,以管1为对照,于波长510 nm处比色。,酶活性计算及Km值求取 1、在37C下保温15分钟产生1mg酚为1个酶活性单位,从标准曲线查出释放的酚量(ug),以此计算处各管的酶活性(v)。 2、以1/v为纵坐标、1/S为横坐标,在坐标纸上作图,求出酶的Km值,并判断该抑制剂属于何种类型。,Km? 该抑制剂为?,注意事项:,配制的各种试剂及反应液必须混匀。 加酶液要准确快速,以保证各管酶促反应同时开始。 加入酶液后要立即计时,计时要准确
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 江苏省连云港市海庆中学2024年高一物理第二学期期末调研模拟试题含解析
- 江西省吉安市多校联考2023-2024学年高二下学期3月月考地理试题(含答案解析)
- 大数据在房地产营销中的应用
- 糖尿病足部护理专业指南
- 2023年山西汾飞发展集团有限公司招聘考试真题
- 医院感染防控年度工作总结报告
- 《行政职业能力测验》2022年公务员考试曲靖市沾益县最后冲刺试题含解析
- 糖皮质激素在航海医学中的应用
- 医院感染防控信息化建设
- 污水生物处理运行记录台账
- 设备维修合同
- 青春期健康教育工作总结6篇
- 超市商品分类明细表(经典实用)
- 委托检查协议书
- 花木兰电影观后感英文
- 制剂二楼多品种共线生产风险评估报告
- 学位英语作文范文带翻译(十篇)
- 【已填内容】个人业绩相关信息采集表含政治表现、最满意、主要特点、不足
- 国内机械式联轴器标准概况
- DB34_T 2757-2016 旅游休闲驿站设施及服务规范
- 水煤浆年产180万吨甲醇项目可行性研究报告
评论
0/150
提交评论