微生物的实验室培养经典.ppt

1、微生物的类群,原生生物：,原核生物:,真菌:,病毒:,如酵母菌,单细胞的动植物,如草履虫、单细胞藻类等,微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物,无细胞结构,细菌、蓝藻,原核细胞,课题1 微生物的实验室培养,专题2 微生物的培养与应用,1.提供营养和条件,2.防止污染,一.培养基：,微生物生存的环境和营养物质,1.基本成分：,思考：微生物“吃”什么？,碳源、氮源、水、无机盐,碳源,无机碳源：,有机碳源：,CO2、CO32-、HCO3-,牛肉膏、蛋白胨等,自养微生物,异养微生物,氮源,无机氮源：,有机氮源：,NH4、NO3-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,注：含CHON的有机物为异养型微生物

2、提供碳源、氮源、能源,概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配制出供其生长繁殖的营养基质。,一.培养基：,微生物生存的环境和营养物质,1.基本成分：,碳源、氮源、水、无机盐,2.特殊营养：,维生素、碱基等,（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）,3.pH、氧气的需求：,4.种类：,固体培养基,液体培养基,有无 凝固剂琼脂,分离 鉴定,工业 生产,化学成分：,物理性质：,天然培养基 合成培养基,牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。,分析营养构成？,5. 配制原则,目的明确：,营养全面、浓度适宜、比例恰当,适宜的pH值：,有机碳源,异养型：,根据微生物的种类、培养目的选择

3、原料,自养型：,不加碳源,加入缓冲剂,细菌偏碱，真菌偏酸,（CO2碳源）,巴氏消毒法,耐高温需保持干燥的 物品，160170 12小时,接种环、接种针等 金属用具,7075、30min 80、15min,100、56min,消毒,灭菌,定义,方法,较为温和理化方法,杀死部分有害菌体,（不包括芽孢、孢子,强烈的理化方法，,杀死所有微生物,煮沸消毒法,化学药剂,紫外线,灼烧灭菌,干热灭菌,酒精、氯气、石炭酸等,高压蒸汽灭菌,培养基， 100KPa、 121、1530min,二.无菌技术：,防止外来杂菌的污染,1.消毒与灭菌：,请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。

4、（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手,思考,练习:说出无菌技术及相应的具体方法,工作台,操作者的手、衣着,培养基,培养皿,玻棒、,试管,接种环,牛奶,无菌水,饮用水,纱布,涂布器,2.无菌范围：,实验操作空间消毒,操作者的手、衣着消毒,实验用具灭菌,实验操作过程,酒精灯旁操作,超净工作台,单个 或少数菌体,2.特征：,大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。,3.功能：,1.定义：,三.菌落,鉴定菌种的重要依据,固体培养基上,大量繁殖,子细胞群体,四.大肠杆菌的纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1.计算：,培养基用量,依配方计算各成分

5、的用量,2.称量：,3.溶化：,牛肉膏黏稠，用称量纸称取,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖,牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解,取纸,蛋白胨、NaCl,琼脂,补水定容,4.调pH、分装、封口：,5.灭菌：,6.倒平板：,培养基、培养皿,分散成单个细胞,形成单个菌落,倒平板,约50,防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染,灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基,四.大肠杆菌的纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌：,平板划线法：,菌种,划3个平板,1个不划线,1.接种：,接种环,防止划破培养基,（重复实验）,（空白对照）,问题讨论,为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在

6、划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物,杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。,及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,6支试管，分别加入9ml无菌水,101,102,103,104,105,106,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,菌液,微量 移液器,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,b.涂布平板：,不超过0.1ml,各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照,滴,灼,试,涂,稀释103倍,稀释104倍,稀释105倍,平板划线法：,稀释涂布平板法：,2.培养：,将接种后的培养基和一个未接种的培养基,放入37恒温箱中培养12h24h后，,观察并记录,五.菌种的保藏：,1.临时保藏：,试管固体斜面培养基上,4,2.长期保存：,菌种易被污染、变异,甘油管藏,1ml甘油1ml菌液,20,一.培养基：,微生物生存的环境和营养物质,1.基本成分：,碳源、氮源、水、无机盐,2.特殊营养：,维生素、碱基等,（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）,3.pH、氧气的需求：,4.种类：,固体培养基,液体培养基,有无 凝固剂琼脂,分离 鉴定,工业 生产,化学成分：,物理