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文档简介

1、实验三、动物性食品生物性污染 物的检验,动物性食品卫生学实验,一.生物性污染的来源,微生物污染 (microorganism pollution ) 寄生虫污染 (parasitical pollution ) 昆虫污染 (insectical pollution ),内源性污染 外源性污染,外源性生物性污染是动物性食品微生物污染的主要途径,二.生物性污染的评价指标,菌落总数 细菌总数 大肠菌群值（MPN） 致病菌检测(PCR法) 其他,实验目的,掌握动物性食品菌落总数、大肠菌群测定及常见致病菌PCR检测的原理、步骤和方法 了解动物性食品菌落总数的卫生标准，进行卫生判定,1.鲜乳的微生物学检验

2、,菌落总数的测定,注 意 事 项,无菌操作 稀释度的选择 平均菌落数在30-300之间的稀释度为宜； 每个稀释度作两个平皿 记数要求 30-300 300 30 300或 30,2.鲜乳大肠菌群值的测定,报 告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)检样中大肠菌群的最可能数。,判定标准,3. 常见致病菌的快速检测 SE的PCR检测,原 理 以扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成。不断重复这一过程，可使目的DNA片段得到扩增。因为新合成的DNA也可以作为模板，

3、因而PCR可使DNA的合成量呈指数增长。,PCR的基本成分 模板DNA 特异性引物(SEF14) 热稳定DNA聚合酶 dNTP 二价阳离子 缓冲液 过 程 (高温变性、低温退火、中温延伸),引物设计 利用引物设计软件Primer5.0针对SEF14主要结构亚单位sefA的基因序列设计引物: 上游引物Usef A为5-ATGCGTAAATCAGCATCTG-3；下游引物LsefA为5-TTAGTTTTGATACTGCTGAAC-3,样品处理（模板制备）,反应体系,10Buffer 2.5uL dNTP 2.0 MgCl2 2.0 上游引物（20uM） 1uL 下游引物（ 20uM ） 1uL 模 板 2uL Taq DNA Polymerase 0.25 灭菌ddH2O up to 25uL,反应参数 1. Initial denature 95 5 min 2. Denature 95 60s 3. Anealing 47 60s 4. Elongation 72 60s Return to 2 for 30 cycle 5. Final elongation 72 10 min Keep 4 5 min,琼脂糖凝胶电泳,电泳条件：argrose

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