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文档简介
1、实验六 酶的特异性,生物化学实验之,山东师范大学生命科学学院,【实验目的】 学习酵母蔗糖酶(粗提液)和唾液淀粉酶的制备,了解酶的特异性及检测方法。,【实验原理】 酶是生物催化剂,酶对所作用的底物有严格的选择性,即酶的特异性。 淀粉和蔗糖都是非还原性糖,分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖,蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。 Benedict试剂(含有Cu 2+)常用于检验还原糖的存在,其被还原后生成砖红色的Cu2O沉淀。,【器材及试剂】 (一)器材: 1. 恒温水浴锅 2. 试管及试管架 3. 离心机 4. 吸量管 5.烧杯、量筒 、漏斗等
2、 (二)试剂: 1. 2%蔗糖 2. 1%淀粉(内含0.3%的NaCl) 3. 唾液淀粉酶溶液 4. 蔗糖酶溶液 5. Benedict试剂,【实验步骤】 (一)淀粉酶的特异性,1.唾液淀粉酶溶液的制备: 先用蒸馏水漱口,然后用洁净试管1支, 取唾液(无泡沫)约2ml,蒸馏水20倍稀释, 备用。,2.取试管5支,标号,按下表所列的次序操作:,3. 摇匀,置37恒温水浴保温10min,然后每管加入Benedict试剂2ml,再放沸水浴5min。观察各管颜色变化,并解释实验结果。,(二) 蔗糖酶的特异性,1. 蔗糖酶溶液的制备: 取活性干酵母1.0g,置于研钵中,加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10
3、min,再加蒸馏水至总体积约为20ml,过滤或离心,滤液或上清液备用。,2. 取试管5支,标号,按下表所列的次序操作:,3. 摇匀, 置37恒温水浴保温10min,然后每管加入Benedict试剂2ml,再放沸水浴5min。观察各管颜色变化,并解释实验结果。,【注意事项】 唾液的稀释倍数因人而异,有时差别很大,稀释倍数可以是50300倍。,【思考题】 1、 若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min,实验结 果会发生什么样的变化? 2、 酶作用的专一性有哪几种?,量程的调节 1.按照从大体积调为小体积的方法调节。 2.用拇指和食指旋转取液器上的旋钮,使数字窗口出现所需容量体积的数字。 注意:千万不要将旋钮
4、旋出最大量程,否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而损坏了移液枪。,微量移液器的使用方法,枪头(吸液嘴)的装配 在将枪头(pipette tips)套上移液枪时,正确的方法是将移液枪(器)垂直插入枪头中,稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。,移液的方法 1.吸取液体时,用大拇指将按钮按下至第一停点,移液器保持竖直状态,将枪头插入液面下23毫米。2.然后慢慢松开按钮回原点。 3.接着将按钮按至第一停点排出液体,稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。,移液器的正确放置 使用完毕,可以将其竖直挂在移液枪架上,但要小心别掉下来。 当移液器枪头里有液体时,切勿将移液器水平放置或倒置,
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