《生物化学》教学课件：第四章 酶与催化反应

1、第四章 酶与催化反应ENZYMES AND CATALYTIC REACTIONS,酶学研究简史,公元前两千多年，我国已有酿酒记载。 1833年，Anselme Payen提纯了麦芽淀粉糖化酶（淀粉酶）。 1878年，Wilhelm Khne首次提出enzyme一词。 1894年，Emil Fischer证明了酶的专一性，酶与底物之间作用的锁钥关系。 1897年，Buchner兄弟用不含细胞的酵母提取液，实现了发酵。 1913年，Leonor Michaelis和Maud Menten推导出酶反应的动力学方程式。 19261930年，James Sumner和John H. Northrop分

2、别将脲酶和胃蛋白酶、胰蛋白酶制成结晶，确定了酶的蛋白质本质。 1941年，George Beadle和Edward Tatum的“一个基因一个酶”假说首次将蛋白质与基因联系在一起，推动了生物化学与遗传学的结合。 1982年，Cech首次发现RNA也具有酶的催化活性，提出核酶(ribozyme)的概念。 1995年，Jack W. Szostak研究室首先报道了具有DNA连接酶活性DNA片段，称为脱氧核酶(deoxyribozyme)。,第一节 酶和酶促反应 Enzymes and Enzymatic Reactions,一、化学反应具有热力学和动力学特性,（一）热力学性质涉及反应平衡和能量平衡

3、,1反应平衡可用平衡常数来描述,一定的温度下，Keq与反应的初始浓度无关，它反映化学反应的本性。 Keq越大则反应越倾向于产物的生成；Keq越小则逆反应的程度越大。,2自由能的变化是化学反应的动力,自由能变（ G） 在生物系统中，生物分子在等温、等压条件下，在化学反应中能量的变化可以用自由能变（ G）来量度。,自由能的变化是化学反应的动力，影响化学反应的方向。,（二）动力学性质是对反应速率的描述,动力学是研究化学反应速率及其影响因素的科学。,反应速率： 是单位体积内反应进度随时间的变化率,由底物浓度和速率常数（rate constant, k）所决定。,一级反应（first-order rea

4、ction）:单底物反应 二级反应（second-order reaction） ：双底物反应,二、酶的化学本质是蛋白质,（一）单纯酶仅含有氨基酸组分,有些酶其分子结构仅由氨基酸残基组成，没有辅助因子。这类酶称为单纯酶（simple enzyme）。 如脲酶、一些蛋白酶、淀粉酶、酯酶和核糖核酸酶等。,（二）结合酶既含有氨基酸组分又含有非氨基酸组分,结合酶（conjugated enzyme）是除了在其组成中含有由氨基酸组成的蛋白质部分外，还含有非蛋白质部分,辅助因子分类 （按其与酶蛋白结合的紧密程度）,一些化学稳定的小分子有机化合物是重要的辅酶或辅基。,辅酶在反应过程中可与多种酶蛋白结合，作为

5、底物在不同的酶之间传递电子、质子或化学基团。在一种酶蛋白反应中接受化学基团，离开后到另一种酶蛋白中提供化学基团。,辅基在反应中不能离开与其结合的酶蛋白。,金属离子是常见的辅助因子，大概2/3的酶含金属离子。 金属酶(metalloenzyme)：两者结合紧密，提取过程中不易丢失的叫金属酶。 金属激活酶(metal-activated enzyme)：两者结合不紧密的叫金属激活酶，金属离子为酶的活性所必需，却不与酶直接结合，而是通过底物相连接,金属离子的作用,1. 稳定构象：稳定酶蛋白催化活性所必需的分子构象； 2. 构成酶的活性中心：作为酶的活性中心的组成成分，参与构成酶的活性中心； 3. 连

6、接作用：作为桥梁，将底物分子与酶蛋白螯合起来。 4.中和阴离子，降低反应中的静电斥力。,（三）单体酶和寡聚酶,三、按酶所催化反应的类型将酶分为六大类,氧化还原酶类：催化氧化还原反应的酶 转移酶类：催化分子间基团转移或交换的酶 水解酶类：催化底物发生水解反应的酶 裂合酶类：催化从底物移去一个基团并形成双键的反应或其逆反应的酶 异构酶类：催化同分异构体相互转化的酶类 合成酶类：催化两种底物形成一种产物同时偶联有高能键的水解释能的酶,四、酶可按其所催化的反应类型予以命名,（一）酶的系统命名,系统命名法:较烦琐 根据酶所催化的整体反应，按酶的分类对酶命名，每个酶都有一个名称和一个编号 。,酶的分类与命

7、名举例,（二）推荐名称简便而常用,由于系统名称较烦琐，国际酶学委员会为每一个酶从常用的习惯名称中挑选出一个推荐名称（recommended name）。 推荐名称是从每种酶的数个习惯名称中以简便实用为原则而选定的。 也叫惯用名,系统名称 L-乳酸：NAD+氧化还原酶 推荐名称 乳酸脱氢酶,五、同工酶,（一）同工酶是催化相同化学反应而结构不同的一组酶,定义:同工酶(isoenzyme)是指催化相同的化学反应，而酶蛋白的分子结构、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。,基因性同工酶,由不同基因编码的多肽链 ）多基因位点同工酶 ： 肽链由不同染色体或同一染色体上不同位点的基因所编码，彼此独立，受不同因

8、素调控，可以不同时表达。 ）等位基因酶（和复等位基因酶 ）： 基因位点发生遗传变异，酶蛋白上氨基酸置换或缺失，酶仍能催化相同反应。,同一基因不同mRNA的同工酶,同一基因生成不同mRNA： 由不同起始点转录； 原始RNA经不同剪接加工而生成不同mRNA。 不同mRNA翻译成不同多肽链组成的蛋白质。,乳酸脱氢酶同工酶,乳酸脱氢酶同工酶（LDH），基因性的多基因位点同工酶。为四聚体，由M、H两种亚基组成。在体内共有五种分子形式，五种同工酶在组织中分布和含量具有特征。 LDH1（H4） LDH2（H3M） LDH3（H2M2） LDH4（HM3） LDH5（M4）,人体各组织器官LDH同工酶谱（活性

9、%）,乳酸脱氢酶,NAD+,NADH+H+,心肌中以LDH1含量最多，LDH1对乳酸的亲和力较高。 因此它的主要作用是催化乳酸转变为丙酮酸再进一步氧化分解，以供应心肌的能量。 在骨骼肌中含量最多的是LDH5，LDH5对丙酮酸的亲和力较高，因此它的主要作用是催化丙酮酸转变为乳酸，以促进糖酵解的进行。,己糖激酶 ：作用于多种己糖 同工酶 ，型 肝外组织 肝脏 特点： 强亲和力 强专一性,催化同一反应，表现不同的催化特点,（二）同工酶在生物体中的表达分布具有时空特异性,同工酶存在于同一种属的不同个体；同一个体的不同组织、同一细胞的不同亚细胞结构； 以及同一组织、细胞的不同发育阶段。,人体各组织器官L

10、DH同工酶谱（活性%）,（三）检测组织器官同工酶谱的变化有重要的临床意义,1 在代谢调节上起着重要的作用； 2 用于解释发育过程中阶段特有的代谢特征； 3 同工酶谱的改变有助于对疾病的诊断； 4 同工酶可以作为遗传标志，用于遗传分析研究。,第二节 酶的工作原理 Mechanism of Enzymatic Reactions,、酶具有与一般催化剂相似的工作原理,（一）酶与一般催化剂一样能降低反应的活化能,活化能：指在一定温度下一摩尔底物，从低自由能的初始态转变成能量较高的过渡态所需要的自由能。 即过渡态中间产物比基态底物高出的那部分能量。,酶和一般催化剂加速反应的机制都是降低反应的活化能(ac

11、tivation energy)。 酶比一般催化剂更有效地降低反应的活化能。,（二）酶与一般催化剂一样能加速化学反应而不改变反应的平衡点,酶与一般催化剂一样，只能加快反应速率，使其缩短到达反应平衡的时间，而不能改变反应的平衡点。,反应达到平衡时自由能的变化仅取决于底物与产物的自由能之差。,任何催化剂都不能改变底物和产物自身的自由能。,二、酶具有不同于一般催化剂的显著特点,酶的催化效率通常比无催化剂时的自发反应高1081020倍，比一般无机催化剂高1071013倍。,（一）酶对底物具有极高的催化效率,酶的特异性或专一性（specificity）,酶对其所催化的底物和反应类型具有严格的选择性，一种

12、酶只作用于一种化合物，或一类化学键，催化一定的化学反应并产生一定结构的产物的现象。,（二）酶对底物具有高度的特异性或专一性,1.有的酶对其底物具有极其严格的绝对专一性,有的酶仅对一种特定结构的底物起催化作用，产生具有特定结构的产物。 酶对底物的这种极其严格的选择性称为绝对特异性（absolute specificity）。,脲酶仅水解尿素，对甲基尿素则无反应。,2.多数酶对其底物具有相对特异性,多数酶可对一类化合物或一种化学键起催化作用，这种对底物分子不太严格的选择性称为相对特异性（relative specificity）。,脂肪酶不仅水解脂肪，也可水解简单的酯。,胰蛋白酶水解由碱性氨基酸（

13、精氨酸和赖氨酸）的羧基所形成的肽键。,各种蛋白酶对肽键的专一性,人体内有多种蛋白激酶，它们均催化底物蛋白质丝氨酸（或苏氨酸）残基上羟基的磷酸化,3立体异构特异性：,一种酶只能作用于一种立体异构体，或只能生成一种立体异构体，称为立体异构特异性。 （1)光学专一性：光学异构体的识别。 例 L-glu脱氨酶：识别L-glu，不识别 D-glu,延胡索酸酶 延胡索酸 苹果酸 H2O,（2)顺反专一性 (几何）,（三） 酶的催化活性是可以调节的： 酶促反应受多种因素的调控，以适应机体不断变化的内外环境和生命活动的需要。 如代谢物对酶分子的变构调节、共价修饰，酶蛋白合成的诱导和阻遏等。,三、酶活性中心是酶

14、与底物结合并将底物转化为产物的特定部位,（一）酶分子上的必需基团与酶的活性密切相关,酶的活性中心由许多必需基团组成,必需基团(essential group) 酶分子中氨基酸残基侧链的化学基团中，与酶活性密切相关的化学基团。,活性中心内的必需基团,位于活性中心以外，维持酶活性中心应有的空间构象所必需。,活性中心外的必需基团,底 物,活性中心以外的必需基团,结合基团,催化基团,活性中心,目 录,组成酶活性中心的必需基团在一级结构上可能相距很远，但在形成三级结构时相互接近，形成具有三维结构的区域。 多是酶分子中的裂隙或凹陷所形成的疏水口袋。,（二）酶的活性中心的构象有利于酶与底物结合及催化反应,胰

15、蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶活性中心“口袋”,（一）酶与底物之间的相互作用表现有多种效应,1酶与底物结合时相互诱导发生构象改变,诱导契合假说（induced-fit hypothesis）,酶-底物复合物,酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相互变形和相互适应，进而相互结合。这一过程称为酶-底物结合的诱导契合假说 。,四、酶对底物具有多种催化机制,羧肽酶的诱导契合模式,2形成酶-底物过渡态复合物过程中释放结合能,底物与酶的活性中心相互诱导契合形成过渡态化合物，过渡态与酶的活性中心以次级键相结合，这一过程是释能反应，所释放的能量称为结合能。 结合能是酶反应降低活化能的主要能量来源。 如果酶不

16、能使底物形成过渡态，就没有结合能的释放，也就不能催化反应的进行。,3邻近效应和定向排列有利于底物形成过渡态,邻近效应（proximity effect）和定向排列（orientation arrange）将分子间的反应变成类似分子内的反应，使反应速率显著提高。,在疏水环境中进行酶反应有很大的优越性，此现象称为表面效应（surface effect）。,酶的活性中心多位于其分子内部的疏水“口袋”中，酶反应在酶分子内部的疏水环境中进行。 疏水环境排除周围大量水分子对酶和底物分子中功能基团的干扰，防止二者之间形成水化膜，利于底物和酶分子之间的直接密切接触和相互结合。,4. 表面效应有利于底物和酶的接

17、触与结合,（二）酶对底物呈现多元催化 酸-碱催化,酶是两性解离的蛋白质，酶活性中心上有些基团是质子供体（酸），有些是质子接受体（碱）。,有利于质子的转移，这种酸-碱催化可以使反应速率提高102105倍。,一般催化剂只有一种解离状态，仅表现酸催化或碱催化,酶分子中具有酸-碱催化作用的基团,共价催化（covalent catalysis）。,很多酶在催化过程中，与底物形成瞬时共价键，底物与酶形成共价键后被激活，并很容易进一步水解形成产物和游离的酶。这种催化机制称为共价催化（covalent catalysis）。,AB + E： AE + B H2O AE A + E：+ B,亲核催化或亲电子催化

18、,酶活性中心有的催化基团属于亲核基团，可以提供电子给带有部分正电荷的过渡态底物，形成瞬间共价键。这种催化作用称为亲核催化（nucleophilic catalysis）。,亲电子催化（electrophilic catalysis）可使酶活性中心的阳离子亲电子基团与富含电子的底物形成共价键。,第三节 酶促反应动力学 The Kinetics of Enzymatic Reactions,研究各种因素对酶促反应速率的影响，并加以定量的阐述。,单底物、单产物反应； 酶促反应速率（velocity，V）一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示； 反应速率取其初速率，即底物

19、的消耗量很小（一般在5以内）时的反应速率； 底物浓度远远大于酶浓度。 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定,研究前提,一、采用酶促反应初速率来研究酶促反应动力学,（一）酶活性是指酶催化化学反应的能力,衡量酶活性的尺度是酶促反应速率的大小。 酶促反应速率可用单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示。 由于底物的消耗量不易测定，所以实际工作中经常是测定单位时间内产物的生成量。,酶的活性: 以国际单位（international unit, IU）表示。 在规定的实验条件下（如温度、pH的限定和足够的底物浓度等），每分钟催化1mol底物转变成产物所需要的酶量为1个国际单位（IU）。,（二）酶促反

20、应初速率是反应刚刚开始时测得的反应速率,酶促反应初速率是指反应刚刚开始，各种影响因素尚未发挥作用时的酶促反应速率，即反应时间进程曲线为直线部分时的反应速率。,二、底物浓度对酶促反应速率的影响,（一）酶促反应速率对底物浓度作图呈矩形双曲线,在酶浓度和其他反应条件不变的情况下，反应速率V对底物浓度S作图呈矩形双曲线。,当底物浓度较低时,反应速率与底物浓度成正比；反应为一级反应。,随着底物浓度的增高,反应速率不再成正比例加速；反应为混合级反应。,当底物浓度高达一定程度,酶被底物所饱和，反应速率不再增加，达最大速率；反应为零级反应。,（二）反应速率与底物浓度的关系可用米-曼氏方程式表示,米-曼氏方程定

21、量地描述底物浓度与反应速率的关系,1913年Michaelis和Menten提出反应速率与底物浓度关系的数学方程式，即米-曼氏方程式，简称米氏方程式(Michaelis equation)。,S：底物浓度 V：不同S时的反应速率 Vmax：最大反应速率(maximum velocity) m：米氏常数(Michaelis constant),米-曼氏方程式推导基于两个假设： E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速率取决于慢反应。即 Vk3ES S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即SSt。,2米-曼氏方程的推导过程引

22、入了稳态概念,稳态：是指ES的生成速率与分解速率相等，即 ES恒定。 k1 (EtES) Sk2 ES + k3 ES,则(2)变为: (EtES) S Km ES,当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时，即EtES，反应达最大速率 Vmaxk3ESk3Et (5),将(5)代入(4)得米氏方程式：,KmS,Km值等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度，单位是mol/L。,（三）动力学参数可用来比较酶促反应的动力学性质,1Km值等于即刻反应速率达到Vmax一半时的底物浓度,2Km是酶的特征性常数,在酶的结构、溶液pH、温度等条件不变的情 况下，酶促反应底物的Km不因反应中酶浓度的改

23、变而不同。,同一酶对其所催化的不同底物有不同的Km； 不同酶对同一底物也有其各自的Km 。,Km的范围多在10-610-2mol/L之间。,3Km在一定条件下可表示酶对底物的亲和力,当k3 k2时，Km k2/k1。即相当于ES分解为E + S 的解离常数（dissociation constant, Ks）。此时，Km代表酶对底物的亲和力。,Km越大，表示酶对底物的亲和力越小； Km越小，表示酶对底物的亲和力越大。,4Vmax是酶被底物完全饱和时的反应速率,当所有的酶均与底物形成ES时（即ES = Et），反应速率达到最大。 即Vmax = k3 Et。,5kcat代表酶的转换数 当所有的酶

24、均与底物形成ES时（即ES = Et），反应速率达到最大。 即Vmax = k3 Et。,kcat = Vmax /Et,kcat表示酶被底物完全饱和时，单位时间内每个酶分子（或活性中心）催化底物转变成产物的分子数。,一些酶的转换数,（四）采用作图法可求得酶促反应的动力学参数,1林-贝氏作图法是求得 Vmax和Km的最常用方法,林-贝氏方程式（Lineweaver-Burk equation）,将米氏方程式两边取倒数，并加以整理，则得出米氏方程式的双倒数形式 ：,直线在纵轴的截距等于1/Vmax，而在横轴上的截距为1/Km,2其他一些作图法也可较准确地求得Vmax和Km,直线的斜率等于1/Vm

25、ax，横轴截距为-Km,三、酶浓度对酶促反应速率影响,当SE，酶可被底物饱和的情况下，反应速率与酶浓度成正比 关系式为：V = k3 E,A：底物浓度曲线，其中，E1 E2 E3。从图中可知， E的变化不影响酶促反应的Km。,B：反应速率对酶浓度作图，V与E呈直线关系。,四、温度对酶促反应速率的影响,双重影响： 一般来说，酶促反应速度随温度的增高而加快。但当温度增加达到某一点后，由于酶蛋白的热变性作用，反应速度迅速下降，直到完全失活。 酶促反应速度随温度升高而达到一最大值时的温度就称为酶的最适温度。 酶的最适温度与实验条件有关，因而它不是酶的特征性常数。,哺乳动物组织中酶的最适温度多在3540

26、之间,Taq DNA聚合酶最适温度为72,* 低温的应用,一般的酶在低温下活性降低，但酶本身不被破坏，其活性可随温度的回升而恢复,低温保存酶和菌种等生物制品,低温麻醉,五、 pH对酶促反应速率的影响,pH对几种酶活性的影响,pH对酶活性的影响主要有下列几个方面： （1）极强的酸或碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶变性； （2）影响酶活性中心催化基团的解离状态，使底物不能分解成产物； （3）影响酶活性中心结合基团的解离状态，使底物不能与它结合； （4）影响底物和辅酶功能基团的解离状态。,酶催化活性最高时溶液的pH值就称为酶的最适pH。 人体内大多数酶的最适pH在6.58.0之间。 酶的最适pH不是

27、酶的特征性常数。,观察pH对酶促反应速度的影响，通常为一“钟形”曲线，即pH过高或过低均可导致酶催化活性的下降。,Pepsin 胃蛋白酶 Cholinesterase 胆碱酯酶 Trypsin 胰蛋白酶 Papain 木瓜蛋白酶,六、激活剂对酶促反应速率的影响,必需激活剂（essential activator） 为酶促反应所必需，如缺乏则测不到酶的活性,Mg2+为己糖激酶的必需激活剂,非必需激活剂（non-essential activator） 可以提高酶的催化活性，但不是必需的,Cl-对唾液淀粉酶的激活作用,在酶促反应中，凡能与酶结合而使酶的催化活性下降或消失，但又不引起酶变性的物质称为

28、酶的抑制剂（inhibitor，I）。,七、抑制剂对酶活性抑制作用,抑制剂可与酶活性中心内或活性中心外的必需基团结合，从而抑制酶的活性。,根据抑制剂与酶是否共价结合及抑制效果的不同，将抑制剂对酶的抑制作用分为可逆性抑制剂（reversible inhibitor）和不可性逆抑制剂（irreversible inhibitor）。,（一）不可逆抑制作用： 抑制剂与酶分子的必需基团共价结合引起酶活性的抑制。 且不能采用透析等物理方法使酶活性恢复的抑制作用就是不可逆抑制作用。,不可逆性抑制作用的抑制剂 ：,基团特异性抑制剂（group-specific inhibitor） 底物类似物（substr

29、ate analog） 自杀性抑制剂（suicide inhibitor）,1基团特异性抑制剂与酶分子中特异的基团共价结合,半胱氨酸残基上的巯基是许多酶的必需基团。 低浓度的重金属离子(Hg2+、Ag2+、Pb2+等)及As3+等可与巯基酶分子中的巯基结合，使酶失活。,2底物类似物可共价地修饰酶的活性中心,与基团特异性抑制剂不同，底物类似物与底物的结构相似，可特异地与酶的活性中心共价结合，不可逆地抑制酶的活性。 此类抑制剂可作为亲和标记物，用来定性酶活性中心的功能基团。,酶的自杀性抑制剂可以作为酶的底物与酶活性中心相结合，生成酶-底物复合物，并接受酶的催化作用。 然而，经催化后的中间产物不游离

30、出产物，而是转化为酶的抑制剂，进一步与酶活性中心共价结合，对酶产生抑制作用。,3自杀性抑制剂是经过修饰的酶的底物,+,酶-底物复合物 无活性酶中 被修饰的FAD,N，N-二甲基丙炔酰胺,自杀性抑制剂N,N-二甲基丙炔酰胺在被单胺氧化酶氧化后，由于填加1个质子，使之与酶的辅基FAD结合生成稳定的烷化物，从而酶被抑制。,单胺氧化酶通过其辅基FAD氧化N,N-二甲基丙炔酰胺(N,N-dimethylpropargyl amine)：,（二）可逆抑制作用：,抑制剂以非共价键与酶分子可逆性结合造成酶活性的抑制，且可采用透析等简单方法去除抑制剂而使酶活性完全恢复的抑制作用就是可逆抑制作用。 可逆抑制作用包

31、括竞争性、反竞争性、和非竞争性抑制几种类型。,1.竞争性抑制（competitive inhibi-tion)： 抑制剂与底物竞争与酶的同一活性中心结合，从而干扰了酶与底物的结合，使酶的催化活性降低，称为竞争性抑制作用。 由于抑制剂与酶的结合是可逆的，抑制程度则取决于： 抑制剂与酶的相对亲和力 与底物浓度的相对比例。,竞争性抑制的速度方程与图形特征,抑制剂对反应速度的影响,竞争性抑制,竞争性抑制的特点： 抑制剂与酶的底物结构相似，往往是酶的底物类似物或反应产物； 抑制剂与酶的结合部位与底物与酶的结合部位相同，抑制剂与底物竞争结合酶的活性中心； 抑制剂浓度越大，则抑制作用越大；但通过增加底物浓度

32、可以减少甚至消除抑制。 动力学参数：Km值增大，Vm值不变。,丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制,磺胺类药物对二氢叶酸合成酶的竞争性抑制,对氨基苯甲酸,对氨基苯磺酰胺,对磺胺类药物敏感的细菌在生长繁殖时，不能直接利用叶酸。而是在体内二氢叶酸合成酶催化下以对氨基苯甲酸为原料合成二氢叶酸，再合成四氢叶酸，为核苷酸合成的辅酶。 磺胺类药物的对氨基苯磺酰胺结构与对氨基苯甲酸相似，是二氢叶酸合成酶的竞争性抑制剂，抑制二氢叶酸合成。细菌生长繁殖受阻。 人能直接利用食物中的叶酸。核酸合成不受磺胺类药物影响。,属于抗代谢物的抗癌药物，甲氨蝶呤，5-氟尿嘧啶，6-巯基嘌呤，都是酶的竞争性抑制剂。,2反竞争性抑制：

33、,抑制剂与酶和底物形成的中间产物（ES）结合，不能与游离酶结合，使中间产物ES的量下降。这样，既减少从中间产物转化为产物的量，也同时减少从中间产物解离出游离酶和底物的量。,反竞争性抑制的速度方程 与图形特征,反竞争性抑制的双倒数图形特征,反竞争性抑制的特点： 反竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的分子结构类似； 抑制剂与底物可同时与酶的不同部位结合； 必须有底物存在，抑制剂才能对酶产生抑制作用；抑制程度随底物浓度的增加而增加； 动力学参数：Km减小，Vm降低。,3非竞争性抑制：,抑制剂可与酶活性中心外的必需基团结合，不影响酶与底物的结合。 抑制剂既可以与游离酶结合，也可以与ES复合物结合。酶和

34、底物的结合也不影响酶与抑制剂的结合。底物与抑制剂之间无竞争关系。但酶-底物-抑制剂复合物（ESI）不能进一步释放出产物。,非竞争性抑制的速度方程 与图形特征,非竞争性抑制的双倒数图形特征,非竞争性抑制的特点： 非竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的分子结构类似； 底物和抑制剂分别独立地与酶的不同部位相结合； 抑制剂对酶与底物的结合无影响，故底物浓度的改变对抑制程度无影响； 动力学参数：Km值不变，Vm值降低。,抑制剂对反应速度的影响,各种可逆性抑制作用的比较,第四节 酶活性的调节 Regulation of Enzyme Activities,机体通过改变调节酶的活性或诱导、阻遏酶的生物合成，

35、可实现细胞代谢水平的调节；物质代谢的整体调节和激素水平的调节最终也都是通过影响酶促反应速率实现的。,一、调节酶的活性可受别构效应剂的调节,（一）别构效应剂与别构酶结合引发酶的构象改变,别构调节 (allosteric regulation),一些代谢物可与某些酶分子活性中心外的某部分可逆地结合，使酶构象改变，从而改变酶的催化活性，此种调节方式称别构调节。,别构酶（allosteric enzyme）：能发生别构效应的酶,别构效应剂（allosteric effector）： 能引起酶发生构象改变的化合物,调节部位（regulatory site）： 别构效应剂与酶结合的部位,别构酶也有两种构象

36、形式，紧缩态( T )和松弛态(R)。T态和R态对底物的亲和力或催化活性不同，别构效应剂就是通过引起酶R态与T态的互变，改变酶的催化速率。,（二）别构效应剂可引起别构酶分子中各亚基间的协同作用,亚基的构象改变可以相互影响，发生协同效应。（cooperativity）,同种协同效应（homotropic cooperativity）,别构效应剂引起的构象改变增加或降低后续亚基对同种别构效应剂的亲和力。,别构效应剂引起的构象改变增加酶对底物的亲和力，这种现象（属于异种正协同效应）称为别构激活作用（allosteric activation）。此别构效应剂称为别构激活剂（allosteric act

37、ivator）,（三）别构酶的动力学不遵守米-曼氏方程,正协同效应的底物浓度-反应速率曲线为S形曲线,负协同效应的底物-速率曲线外形类似矩形双曲线，但不是矩形双曲线,二、共价修饰,（一）磷酸化与去磷酸化是最常见的共价修饰方式,共价修饰(covalent modification)或 化学修饰(chemical modification),酶分子中的某些基团可在其他酶的催化下，共价结合某些化学基团； 同时又可在另一种酶的催化下，将此结合上的化学基团去掉，从而影响酶的活性。,酶的共价修饰种类：,1. 磷酸化（phosphorylation） 和去磷酸化（dephosphorylation）,2.

38、甲基化（methylation） 和去甲基化（demethylation）,3. 腺苷化（adenylation） 和去腺苷化（deadenylation）,4. 尿苷化(uridylation) 和去尿苷化（deuridylation）,磷酸化和去磷酸化修饰是最常见的共价修饰,酶的磷酸化与脱磷酸化,（二）共价修饰可引起级联放大效应,在一个连锁反应中，一个酶被磷酸化或去磷酸化激活后，后续的其他酶可同样的依次被其上游的酶共价修饰而激活，引起原始信号的放大。 这种多重共价修饰的连锁反应称为级联反应（cascade reaction）。,级联反应的主要作用是产生快速、 高效的放大效应。,三、酶原需经

39、激活后才具有催化活性,酶原 (zymogen)： 有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体，此前体物质称为酶原。,酶原的激活： 在一定条件下，酶原向有活性酶转化的过程。酶原的激活过程通常伴有酶蛋白一级结构的改变。,酶原激活的原理,胰蛋白酶原的激活过程,消化蛋白酶原的激活,酶原的激活的重要生理意义：,（1）保护酶的分泌器官本身不受酶的消化； （2）保证酶在其特定的部位与环境发挥其催化作用； （3）酶原还可以视为酶的贮存形式。,第五节 酶与医学 Enzymes and Medical Sciences,一、酶与疾病的发生、诊断及治疗密切相关,（一）许多疾病与酶的质和量的异常相关,（二）体液中

40、酶的活性可作为疾病的诊断指标,2. 恶性肿瘤可因肿瘤组织的增殖加快，其标志酶释放入血增多，有助于对该组织肿瘤的诊断。,前列腺癌病人血清酸性磷酸酶含量增高。,组织器官损伤可使其组织特异性的酶释放入血，有助于对此组织器官疾病的诊断。,急性肝炎时，血清中丙氨酸转氨酶活性升高。,3. 有些酶的清除和排泄障碍也可造成血清含量升高。,肝硬化时血清碱性磷酸酶活性升高。,4. 酶的诱导合成增多也可以从血清中检测出来，用于协助诊断和预后判断。,胆管阻塞时胆汁返流可刺激肝合成碱性磷酸酶增多。,（三）酶作为药物可用于疾病的治疗,胰蛋白酶、溶菌酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等可加强伤口的净化、抗炎和防止浆膜粘连等。,2.有些酶用于清洁伤口和抗炎,（四）有些药物通过抑制或激活体内某种酶的活性起治疗作用,一些药物通过抑制某些酶的活性，纠正体内代谢紊乱。 如抗抑郁药通过抑制单胺氧