HPV-DNA分型与临床(new).ppt

1、HPV DNA分型与临床,2,内容一览,HPV与宫颈癌,HPV分型检测与宫颈癌筛查,知识要点,1,2,3,4,HPV DNA分型检测液芯,3,1,2,3,4,知识要点,HPV是宫颈癌发生发展的必要条件 HPV亚型众多，不同亚型具有不同致病能力 HPV DNA分型检测应用于宫颈癌筛查，能够将宫颈癌早期筛查的检出率提升至98%100% 权威组织推荐：采用细胞学和HPV DNA分型联合检测筛查宫颈癌， HPV DNA分型液芯， 26种亚型1次呈现，分型明确，,4,内容一览,HPV与宫颈癌,HPV分型检测与宫颈癌筛查,知识要点,1,2,3,4,HPV DNA分型检测液芯,5,HPV与宫颈癌,无包膜微小

2、DNA病毒 二十面体对称结构 表面有72个壳体,HPV 的基本特性,6,1,2,3,4,HPV与宫颈癌,广泛分布 种属特异性 组织特异性 嗜上皮病毒 皮肤、粘膜、化生,HPV 的基本特性,7,1,2,3,4,HPV的基因组特征,HPV与宫颈癌,8,1,2,3,4,HPV的基因组特征,双链共价闭合的DNA分子，7.9kb E早期转录功能区（或称早期基因区） E1 (病毒DNA复制因子) E2 (DNA复制和RNA转录控制因子) E4（与病毒成熟胞质蛋白有关 ） E5 （调节生长控制机制 ） E6 (分解p53) E7 (结合pRB) E3、E8并非所有亚型的基因组都有 L （晚期转录功能区（或称

3、晚期基因区） ） L1 （主要衣壳蛋白） L2 （次要衣壳蛋白） URR上游调节区，或长控制区（LCR）或非编码区（NCR）,干扰细胞增殖周期,HPV与宫颈癌,9,1,2,3,4,HPV的分类与分型,根据感染部位划分 皮肤型 生殖道型 根据与宫颈癌相关性划分 低危型：6、11、40、42等 高危型：16、18、31、33等 根据L1 、 E6、E7等多态性基因位点开放 阅读框（ORF）之间的同源性进行分型 同源性90% 100 35 20,HPV与宫颈癌,10,1,2,3,4,HPV的感染途径,直接性接触传染 母婴传染 间接物体传染 自体接种,HPV与宫颈癌,11,1,2,3,4,HPV的繁殖

4、及其致病作用,促细胞增殖作用 病毒的大量快速增殖 良性：疣类疾病 病毒DNA与宿主细胞DNA的亲和力 恶性：多种癌症,HPV与宫颈癌,12,1,2,3,4,高危型HPV的致癌过程,HPV与宫颈癌,13,1,2,3,4,HPV的亚型与所致疾病,HPV与宫颈癌,14,1,2,3,4,HPV感染的可能转归,HPV与宫颈癌,HPV感染,其它疣类疾病,宫颈炎、宫颈糜烂、CIN I,宫颈癌、阴茎癌、外阴癌、肛门癌等,高、低危型HPV,高危型HPV,尖锐湿疣,15,1,2,3,4,HPV感染与宫颈癌的发生发展,出现HPV相关的细胞学改变,正常宫颈,高度鳞状上皮内病变 (HSIL,CIN II, III/CI

5、S),宫颈浸润癌,HPV 感染,高危HPV亚型 协同致癌因素,约60%在2到3年内自然逆转,30%-70% 在10年内演变为,低度鳞状上皮内病变 (LSIL, CIN I),约 15% 在3-4年内演变为,HPV与宫颈癌,16,1,2,3,4,宫颈癌前病变各期及宫颈癌的病理模式图,HPV与宫颈癌,正常宫颈 轻度不典型增生 中度不典型增生 重度不典型增生 浸润癌 CIN I CIN II CIN III/CIS Invasive CA,17,3,阴道镜下宫颈癌前病变各期及宫颈癌的表现,HPV与宫颈癌,1,2,4,18,内容一览,HPV与宫颈癌,HPV分型检测与宫颈癌筛查,知识要点,1,2,3,4

6、,HPV DNA分型检测液芯,19,1,2,3,4,女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌 全世界每年近50万宫颈癌新发病例，80%发生在发展中国家 我国每年13万新发病例，近2万人死于宫颈癌 宫颈癌年轻化趋势,宫颈癌发病情况,HPV分型检测与宫颈癌筛查,20,1,2,3,4,病程长 宫颈解剖位置特殊，便于治疗 早诊早治是关键： 癌前病变的治愈率可达100%，原位癌的5年生存率为100，早期癌为90-92，而浸润癌的5年生存率仅为67,宫颈癌可防可治,有效的筛查方法,HPV分型检测与宫颈癌筛查,21,细胞学 传统巴氏细胞学涂片 液基细胞学（liquid-based cytology ） 细胞学自

7、动阅片系统(PAPNET ，AutoPap) 肉眼法 (visual inspection) 醋酸白试验：用3%5%的冰醋酸染色，简称VIA（visual inspection with acetic acid） 碘黄试验：用4% 5%的碘液染色，简称VILI (visual inspection with Lugols iodine) 阴道镜检查 (Colposcopy) 病原学检测 免疫学 HPV DNA 检测,HPV分型检测与宫颈癌筛查,宫颈癌筛查方法,1,2,3,4,22,1,2,3,4,HPV DNA检测方法,直接核酸探针法 原位杂交 Southern印迹杂交 杂交信号放大法 HPV

8、 DNA杂交捕获 (HC II) 目的片段扩增法（基于PCR的检测方法） 低通量方法 PCR，荧光定量PCR 高通量方法 膜芯片、液态芯片,HPV分型检测与宫颈癌筛查,23,1,2,3,4,早期诊断 取材方便 结果客观,HPV DNA检测的优势,HPV分型检测与宫颈癌筛查,24,1,2,3,4,HPV DNA检测在宫颈癌筛查中的应用,HPV分型检测与宫颈癌筛查,Chavel C ,et al Br J Cancer,2001,84:1616-1623,25,1,2,3,4,权威组织一致推荐：采用细胞学检查和HPV DNA联检进行宫颈癌筛查。,HPV分型检测与宫颈癌筛查,26,1,2,3,4,我

9、国的宫颈癌筛查推荐方案,经济发达地区： 医生取材HPV DNA检测液基细胞学检查（TCT） 经济欠发达地区： 医生取材HPV DNA检测传统巴氏图片 贫困地区： 肉眼观察（VIA）,HPV分型检测与宫颈癌筛查,引自：宫颈癌筛查及早诊早治方案/乔友林等. 2003.7,27,1,2,3,4,HPV分型检测与宫颈癌筛查,引自：宫颈癌筛查及早诊早治方案/乔友林等. 2003.7,宫颈癌筛查处置流程,28,1,2,3,4,1977年，在宫颈癌活检组织中发现HPV病毒颗粒，提出了HPV感染与宫颈癌关系的假设 100%的宫颈癌患者的HPV感染为阳性 高度病变（CIN 2 和CIN 3）中约97%为阳性 低

10、度病变（ CIN 1）中的阳性率亦达61.4% HPV 感染的相对危险度（比数比，OR） 在宫颈上皮内高度病变/癌症(CIN 2)： 254.2 低度病变(CIN 1)：26.4,宫颈癌病因学研究进展,HPV分型检测与宫颈癌筛查,29,宫颈癌病因学研究进展,1995年，IARC专题讨论会确定了HPV是女性宫颈癌和宫颈上皮内高度瘤变（CIN /）发生的必要条件,HPV 检测 用于宫颈癌筛查,HPV分型检测与宫颈癌筛查,1,2,3,4,30,1,2,3,4,不同HPV亚型与宫颈癌发病之间的关系,HPV总感染率与宫颈癌发病率之间的矛盾 高危HPV感染率 低危HPV亚型仅导致CIN I、尖锐湿疣等良性

11、病变 高危HPV亚型所致的CIN I、尖锐湿疣病变可能演变成CIN III、CIS、CC、阴茎癌、外阴癌、肛门癌、炎喉癌等多种恶性病变 不同的高危HPV亚型之间，其致恶性病变能力是不一样的 HPV 的型别还与宫颈癌的病理类型有关，在宫颈鳞状上皮细胞癌中以HPV16 为主（占51%），而在宫颈腺癌和宫颈腺鳞细胞癌中HPV18分别占56%和39%,HPV分型检测与宫颈癌筛查,31,1,2,3,4,HPV感染及宫颈癌发病率与年龄的关系,引自：宫颈癌筛查及早诊早治方案/乔友林等. 2003.7,HPV分型检测与宫颈癌筛查,32,1,2,3,4,高危HPV感染率（）,山西省阳城和襄垣两县3250 年龄组

12、妇女高危HPV感染情况,引自：宫颈癌筛查及早诊早治方案/乔友林等. 2003.7,HPV分型检测与宫颈癌筛查,33,1,2,3,4,不同HPV亚型在宫颈癌中的分布,HPV分型检测与宫颈癌筛查,34,1,2,3,4,HPV亚型的地域/族群分布特点,HPV16、18 型感染很普遍 部分HPV亚型存在鲜明的地域分布特点 HPV45 型在非洲西部很常见 HPV39 和 59 型仅在美洲的中部和南部出现， HPV52，58 在中国妇女中检出率较高,HPV分型检测与宫颈癌筛查,35,不同HPV亚型的地域分布,HPV分型检测与宫颈癌筛查,1,2,3,4,36,1,2,3,4,HPV分型检测与宫颈癌筛查,20

13、05年2月，IARC确定了13种导致宫颈癌的高危HPV亚型，并明确提出在将HPV检测用于宫颈癌筛查时必须考虑不同高危亚型间的致癌能力差异,宫颈癌病因学研究进展,HPV 分型检测,37,内容一览,HPV与宫颈癌,HPV分型检测与宫颈癌筛查,知识要点,1,2,3,4,HPV DNA分型检测液芯,38,1,2,3,4,如此众多的HPV亚型， 如何准确检测并分型 ？,HPV DNA分型检测液芯,39,1,2,3,4,HPV DNA分型检测液芯,液态芯片,40,1,2,3,4,HPV DNA分型检测液芯,液态芯片,Luminex 100TM多功能流式点阵仪,41,1,2,3,4,HPV DNA分型检测液

14、芯,液态芯片,42,1,2,3,4,HPV DNA分型检测液芯,液态芯片,43,1,2,3,4,HPV DNA分型检测液芯,液态芯片,44,1,2,3,4,低危型: 7种 6、11 40、42、44、53、54,高危型: 19种 16、18 31、33、35、39、45、52、58、26、51、55、56、59、61、66、68、73、83,HPV DNA分型检测液芯,26种亚型，一次呈现,45,HPV DNA分型检测液芯的操作步骤,30-40min,2.5hr,15min,40sec/sample,收集检测部位的脱落细胞或病变组织细胞. 女性宫颈口样品 采样时，用棉拭子将宫颈口或尿道口过多的

15、分泌物轻轻擦拭干净，然后取出取样器，插入宫颈,紧贴宫颈口，用力转动五周，以取得足够的脱落细胞供检测, 将取样器放入装有标本保存液的瓶内振荡洗涤几次,尽量将细胞洗脱下来。盖紧瓶盖,做好标记。 尿道口或其它可疑感染部位的样品 皮损或切除的病变组织,HPV DNA分型检测液芯,1,2,3,4,46,透景HPV分型液芯检测原理,采用X-Map技术，液态芯片平台，一次反应同时检测26种HPV亚型。 26种编码微球分别交联相应探针 PCR扩增待检测样品 PCR产物和微球上交联的探针杂交 Luminex 100多功能流式点阵分析仪上检测荧光信号。,47,1,2,3,4,HPV DNA分型检测液芯的适用人群,

16、人群普查: 有三年以上性行为或21岁以上有性行为的妇女 高危人群筛查: 宫颈细胞学检测异常或可疑的患者 宫颈炎、宫颈糜烂患者 尖锐湿疣患者 男性尖锐湿疣患者的配偶 有不洁性生活史的患者 “特殊职业”妇女人群 免疫功能低下者：如HIV 阳性、器官移植、化疗患者,HPV DNA分型检测液芯,48,HPV DNA分型检测液芯的临床意义,HPV感染早于细胞学异常，早发现可指导医生更早地预警宫颈癌 不同型别的HPV致病能力可能不同 宫颈癌患者年轻化趋势明显，低龄患者宫颈癌的发生可能与多重感染有关 与疫苗的使用和开发密切相关 HPV16和18是感染比例最高的2种亚型，目前已有针对HPV16和18的疫苗，弄清是何种亚型感染对治疗致关重要,HPV DNA分型检测液芯,1,2,3,4,49,HPV分型检测液芯的优点,囊括经WHO认定导致宫颈癌的全部13种高危HPV亚型 收录其它13种常见对生殖道致病的HPV亚型 病例覆盖面达99%以上,HPV DNA分型检测液芯,1,2,3,4,50,1,2,3,4,HPV分型检测液芯的优点,专利技术（200510030338.2）， 26种H