制作石蜡切片的常见问题及处理

1、制作石蜡切片的常见问题及处理石蜡切片是组织学和病理学的主要实验方法,也是临床中观察病理变化的重要手段,为教学、科研和临床诊断做出了卓越贡献。实践发现,切片制作过程中常常由于多方面的原因遇到困难,甚至导致制片失败。本文将对制作石蜡切片过程中的常见问题和处理方法作重点介绍。1切片不成带1常见原因:切片刀不够锋利。切片刀与蜡块的角度不当。蜡块四周留蜡边太少。石蜡硬度过大,黏度不够。解决方法:重新磨刀。调整切片刀的角度。可重新包埋或将蜡块四周熔化,再放入包埋框中补蜡,修理蜡块时组织块周围保留的石蜡以2mm左右为宜。蜡块过硬可适当加些蜂蜡,或更换熔点较低的石蜡重新包埋。将蜡块放入冰箱内延长冰冻时间,然后

2、迅速切片。2切片弯曲常见原因:组织成分及形状不规则。蜡块上下或左右两边不平行。蜡块与切片刀刀口不平行。切片刀各处的锋利程度不一致。解决方法:修整组织块时,注意修切整齐,切成方形或矩形,尽量不要切成三角形2。将蜡块四边反复修平对称。调节蜡块夹持器,使其与切片刀平行。移动切片刀,更换刀口位置。使用负离子发生器直吹切片处可防切片卷曲3。3切片上出现裂纹常见原因:切片刀上有小缺口,或刀口不平整。刀口上粘附有细微纤维(如毛发、纸或布丝等物。组织过硬变脆(如凝血块、胶冻样物质、囊腺瘤、甲状腺、腺瘤等4。组织中可能含有较硬之物质,如固定液之结晶石灰质。裱片的水温太高。包埋时石蜡冻结太慢。解决方法:切片刀某处

3、有缺口,可调换刀口部位或重新磨刀。刀口上缺口过多且不平整,可先将刀锋垂直在磨刀石上轻轻磨数次,然后按常规磨刀。擦净刀口。适当减少脱水、透明、浸蜡时间。组织中硬性物质太多,则不宜用。裱片的水温以45左右为宜。包埋时待蜡块周围凝结一层,即放入冷水中。4切片厚薄不均常见原因:脱水、透明、浸蜡过度、时间过长、温度过高4。蜡块太大,过硬,转动时刀刃受震动。切片微动部分失灵,齿轮跳格。解决方法:调整脱水、透明、浸蜡时间和温度。如蜡块过大,以后取材时注意取材的大小。蜡块组织过硬,可返回水中浸泡,再重新脱水和包埋。修理切片机失灵的部分,调整螺旋,加机油润滑零件,必要时需请专业技术人员调整切片机。5切片皱褶常见

4、原因:石蜡太软或室温过高。切片刀上粘有残余的石蜡,刀口不干净。组织浸蜡时间不够,或脱水、透明不够。切片刀不锋利。裱片的水温过高或过低。解决方法:可将蜡块放入冰箱中冰冻后切片,并在切片时一边切片一边用冰块冰冻或换蜡。如室温过高,可开空调降低室温。切片刀不干净,可用棉花沾少许二甲苯将刀口拭干净。重复浸蜡过程或延长脱水、透明时间。将切片刀磨锐利再行切片。裱片的水温以45为宜。组织蜡带先放入35%的漂片酒精中,再捞出放入温水中可预防皱褶6。6切片粘刀常见原因:切片时有静电作用,产生静电吸引,在冬季或气候干燥时常出现这种情况。解决方法:可用加湿器,以增加空气中的水分,而减少静电作用。把卫生纸用凉水浸湿后

5、围在切片机操作台,可以在切片机台周围形成静电屏蔽7。把展片时所用毛笔在湿纸上进行蜡屑清理。7切片脱落常见原因:取材太厚或组织含血成分多、脂肪多8。组织固定不佳,脱水、透明不彻底,致使石蜡无法浸入组织内。组织脱水透明过度,浸蜡时间过长或温度过高,引起组织收缩硬脆。载玻片清洗得不洁净。用急水冲洗或震荡过于剧烈。染液或试剂的酸碱度不适宜或停留时间较久9。烤片时间过短、温度过低或时间长、温度过高10。石蜡、二甲苯使用时间过久11。解决方法:取材不能太厚,载玻片下2/3处用右手的大鱼际肌均匀涂擦蛋白甘油,厚薄适中。按组织大小厚薄选择固定、脱水、透明时间。或者在不影响诊断的原则下将组织重新脱水,透明浸蜡,

6、包埋蜡熔度要比浸蜡熔点高35。先用温水润泽,再用冰硬化,然后再切片。彻底清洁载玻片,使之成中性。切片不能直接放于水流下冲洗或者改为浸泡12。同时经过煮沸,再次净化和蒸馏处理后的水可增加了蜡片与载玻片之间的吸引力,冷开水作为漂片用水既方便又经济应首选13。染液或试剂的酸碱度适宜、停留时间合理。一般在60,2小时为宜。二次浸蜡、更换二甲苯。8切片灰染常见原因:固定液浓度太低14或者组织固定不及时、不彻底15。取材太厚。水洗不够。脱蜡不充分16。解决方法:固定及时彻底。脱尽原染色,复染时延长苏木精的染色时间来补救。取材不宜太厚。水洗充分。脱蜡彻底。石蜡切片是组织学和病理学的主要实验方法,也是临床中观

7、察病理变化的重要手段,为教学、科研和临床诊断做出了卓越贡献。实践发现,切片制作过程中常常由于多方面的原因遇到困难,甚至导致制片失败。本文将对制作石蜡切片过程中的常见问题和处理方法作重点介绍。1切片不成带1常见原因:切片刀不够锋利。切片刀与蜡块的角度不当。蜡块四周留蜡边太少。石蜡硬度过大,黏度不够。解决方法:重新磨刀。调整切片刀的角度。可重新包埋或将蜡块四周熔化,再放入包埋框中补蜡,修理蜡块时组织块周围保留的石蜡以2mm左右为宜。蜡块过硬可适当加些蜂蜡,或更换熔点较低的石蜡重新包埋。将蜡块放入冰箱内延长冰冻时间,然后迅速切片。2切片弯曲常见原因:组织成分及形状不规则。蜡块9染色浅、深、不均、色素

8、沉着常见原因:固定液久存或者脱蜡不干净。苏木精过染或伊红过染。切片不均匀。封固时二甲苯已挥发完毕3。福尔马林色素17。解决方法:在备用的甲醛中放入适量大理石或白色粉笔作为中和剂,或经常更换脱蜡剂18。苏木精过染使组织呈深紫色,可延长分化和返蓝时间;伊红过染可通过水洗减轻伊红颜色19。切片均匀。封固前当二甲苯挥发后应重新放入到二甲苯中透明。在脱蜡水洗后可用10%饱和苦味酸无水乙醇溶液处理30min20。10切片褪色21-22常见原因:染色前脱蜡不彻底。染色过程中脱水不干净。苏木精染液PH值过小,或者伊红染液加促染剂冰醋酸过多。载玻片和盖玻片不呈中性。在潮湿多雨时封闭切片,导致湿气进入。二甲苯被氧化,生成苯甲酸和邻苯二甲酸而成酸性,可使碱性燃料褪色。切片在阳光下爆晒。解决方法:染色前彻底脱蜡。染色过程中脱水时间要充足。彻底清洗载玻片和盖玻片,使之呈中性。最好在干燥季节制作切片。切片复染。封固剂和切片避免阳光直射,以免氧化变酸。避光保存。11切片封固不良23-24常见原因:封固时二甲苯已挥发完毕。封固剂过稀或太稠。切片厚薄不匀。切片未展开。封固方法不当。组织脱水不彻底。解决方法:封固前当二甲苯挥发后应重新放入到二甲苯中透明。封固剂浓度要适当。切片完全展开,无皱褶、无气泡。封固时先将盖玻片一侧放置于滴有树胶的组织切片上,然后缓慢放下将空气完全排除避免产生气泡。彻