HE4 崔恒 北京大学人民医院.ppt

1、新型卵巢癌标记物HE4的研究进展,崔 恒 北京大学人民医院 妇科肿瘤中心,世界范围统计资料,癌 新发 死亡 宫颈 470,000 230,000 卵巢 190,000 114,000 内膜 188,000 45,000,美国2008,卵巢癌的现状,一个难题：无成熟的早期诊断方法； 二个70%：确诊时约70%已属晚期；治疗后即使是已达到临床完全缓解的病人仍有70%最终将复发； 三个进展：手术病理分期、肿瘤细胞减灭术、紫杉醇+卡铂化疗方案 四个焦点：保留生育/生理功能、早期的辅助治疗、晚期的治疗、复发的诊断和治疗,卵巢癌的诊断策略-早期诊断,卵巢癌的早期诊断一直是卵巢癌研究中最具挑战性的课题 肿瘤

2、诊断的三大支柱 图像诊断：B超 CT、MRI PET/CT 血液与体液检测：肿瘤标记物 细胞学与组织学诊断,现阶段卵巢癌的诊断,目前常用的诊断方法包括：1）妇科三合诊；2）阴式彩色B超；3）血清CA125的检测；4）计算机断层扫描（CT）、磁共振成像（MRI）、正电子发射断层扫描（PET或PET/CT）等,关于诊断正在研究中的有： 放射免疫显像（RII） 新的或多种血清标记物的检测 血清中卵巢癌特异抗体的检测 恶性肿瘤危险指数评分（RMI) 癌基因和抗癌基因突变的检测，特别是与遗传相关基因的检测（芯片） 发现和寻找新的特异抗原和基因,肿瘤标记物的定义,与肿瘤相关的抗原或某种生物活性物质 肿瘤细

3、胞异常表达 反映癌变发生、发展过程 可被检出,有效的肿瘤标记物,特异性强 敏感性高 交叉反应小 早期诊断率高 随病情变化监测值变化明显,临床应用,肿瘤诊断及鉴别诊断 肿瘤残存 复发的预测及复发部位监测 疗效观察及预后评估 对无症状早期癌及高危人群的筛查,血清肿瘤标志物的检测,CA125是应用最多的卵巢癌血清肿瘤标志物，特别是最常用的监测卵巢癌复发的指标。 期卵巢癌患者仅有约30-50% 35u/ml，监测复发的敏感性、特异性、阳性预测值分别为79、95、100。 1健康妇女、3良性卵巢肿瘤、6非卵巢相关的良性疾病可有血清CA125水平升高。在子宫内膜异位症、盆腔结核、炎症等甚至高达50-70%

4、,卵巢癌相关的其它标志物,基因分析和组织化学分析已发现许多新的可能与卵巢癌相关的标志物 MUC1 Kallikreins：hK4, hK6, hK8, hK10 Mesothelin Antileukoproteinase 1 (ALP1) Osteopontin VEGF S100A1 Inhibin LPA B7-H4 HE4，表达上调在卵巢癌中最常见，且在早、晚期患者中mRNA和蛋白的表达均上调。,HE4,HE4 （Human Epididymis Secretory Protein 4,人附睾分泌蛋白4） 1991年由Kirchhoff等从人的附睾中克隆出cDNA，基因定位在染色体 2

5、0q12-q13.1，全长为12kb左右，由5个外显子和4个内含子组成，编码的蛋白质与细胞外蛋白酶抑制剂有很高的同源性，是一种酸性蛋白质。 1999年Schummer等发现HE4 mRNA在卵巢癌组织中高表达，而在癌旁组织中 不表达。HE4在恶性肿瘤中的高表达多见于卵巢癌、子宫内膜癌，少见于肺腺癌及间皮瘤。,HE4在早期（I期）的卵巢癌中的敏感性及检测卵巢癌总的敏感性均高于CA125，是卵巢癌敏感及特异的标志物，可用于对卵巢癌的早期诊断及辅助监控卵巢癌患者的治疗情况。 英国的一项研究对200，000妇女用30多种肿瘤标记物分别单独或与CA125联合进行卵巢癌筛查，HE4可以使诊断卵巢癌的敏感度

6、和特异度提高,Biochemistry of HE4,HE4 - Human Epidiymis secretory protein 4 Member of the WAP-gene family of protease inhibitors (new name WFDC-gene family) Characterized by an approx 50 aa sequence with 8 highly conserved cysteine residues that form 4 disulphide bridges. WFDC (Whey Acidic Protein Four Dis

7、ulphide Core) Tumour associated WFDC-proteins ALP1, Elafin, HE4 (WFDC2), PS20 (WFDC1),HE4 mRNA expression profile,Restricted expression profile in normal tissue Expressed in normal epididymis, and epithelia of the respiratory and reproductive tract Tumor-restricted expression in ovarian cancer 90 %

8、of serous ovarian cancer HE4 mRNA highly expressed in lung adenocarcinomas 60 % high expression in AdC 10 % high expression in SqC,From Galgano et al Modern Pathol (2006)19; 847 - 853,Expression of HE4 mRNA in cancer,HE4 antigen expression in Ovarian cancer,Galgano et al Modern Pathol (2006)19; 847

9、- 853,HE4 antigen is highly expressed in serous, endometroid and clear cell ovarian cancer Mucinous, germ cell or sex cord ovarian cancer barely express HE4,Drapkin et al Cancer Res (2005) 65;2162-2169,HE4 是一种适宜的卵巢癌血清标志物,HE4 可分泌入体液 正常卵巢不表达，而在卵巢癌高表达-特异性好 在早期和晚期HE4表达均呈高度上调 早期病例具有高度敏感性 HE4的表达独立于CA125的表

10、达 联合检测将较各自单独检测获得更 多的信息,HE4诊断试剂盒,HE4 EIA试剂盒由瑞典Fujirebio Diagnostics AB公司生产，已经获得了FDA认证和CE认证，在美国、欧洲等多个国家上市销售，现正在申请在中国上市注册。 Fujirebio Diagnostics AB公司研制的HE4 EIA试剂是国外唯一用于定量检测人血清中HE4的试剂，国内尚无任何检测HE4的试剂上市销售。,HE4 EIA 方法的建立,主要试剂： 2H5 and 3D8 MAb established using HE4-Mouse Ig fusion protein as immunogen Hells

11、trom et al, Cancer Research 63, 3695 3700, 2003 检测原理： Two-step forward sandwich immunoassay based on Bio 2H5 MAb for catching of HE4 and HRP 3D8 MAb for detection,HE4 用于监测卵巢癌,约 80%患者HE4与CA125相符，与病情一致,Study on 80 patients, 4,4 observations/patient Measured concordance between biomarker change 11-17,C

12、- 45,C- 45,TH: Teaching hospital NTH: Nonteaching hospital,Type of Surgeon Impacts Survival rates,Type of Hospital Impacts Survival rates,ROMA,ROMA value = expPI / 1 + expPI x 100,Risk of Ovarian Malignancy Algorithm (ROMA) value Estimate of the risk of ovarian cancer given that the patient had a pe

13、lvic mass; their HE4 and CA125 values; and their menopausal status,Biomarker and ROMA Scatterplot,ROMA Validation trial - Conclusions,At a specificity of 75%, the overall sensitivity for EOC+LMP was 89% Overall sensitivity for EOC was 94% Pre-menopausal women 89% Post-menopausal women 95% NPV 94% fo

14、r EOC+LMP in Pre- and postmenopausal women combined NPV 97% for EOC 17/279 (6%) patients classified as low risk had EOC or LMP 9/17 had LMP tumor 1 (0.4%) had late stage (III/IV) cancer ROMA effectively stratifies patients with pelvic mass into groups with low and high risk of having epithelial ovar

15、ian cancer,C- 50,ROMA vs RMI,Risk of Malignancy Index (RMI) RMI = U x M x serum CA 125 level U= 0 for imaging score of 0 = 1 for imaging score of 1 = 3 for imaging score of 2-5 M= 1 if premenopausal = 3 if postmenopausal,Jacobs I et al. Br J Obstet Gynecol.1990; 97:992-929.,ROMA has increased sensit

16、ivity compared with RMI,Benign and EOC: All Stages,*Two Sample Test of Equality of Proportions p=0.0129 CI: Confidence Interval,ROMA Has Increased Sensitivity vs RMI For Early Stage Cancer,Benign and EOC: Stage I & II,*Two Sample Test of Equality of Proportions p=0.0510 CI: Confidence Interval,表 患者被

17、ROMA划分为高危组和低危组的分布,月经状态 疾病 高危(例 ) 低危(例) 合计(例) 敏感性(%) 特异性(%) PPV (%) NPV (%) 绝经后 恶性 35 2 37 EOC 28 0 28 良性 4 8 12 合计a 32 8 40 100.0 66.7 87.5 100.0 合计b 39 10 49 94.6 66.7 89.7 80.0 绝经前 恶性 12 4 16 EOC 8 0 8 良性 23 103 126 合计a 31 103 134 100.0 81.7 25.8 100.0 合计b 35 107 142 75.0 81.7 22.9 96.3 全部 恶性 47 6

18、 53 EOC 36 0 36 良性 27 111 138 合计a 63 111 174 100.0 80.4 57.1 100.0 合计b 74 117 191 88.7 80.4 63.5 94.9 a：指EOC与良性肿瘤的合计，b：指恶性肿瘤与良性肿瘤的合计,HE4 Clinical Investigations,Italy Mestre-Venice Pelvic mass Milano Pelvic mass Brescia Endometrial cancer Roma Ongoing real life study Norway Oslo Many biobank studies

19、 Sweden Stockholm Biobank pelvic mass Brasil Sao Paolo Ovarian cancer Belgium Leuven Pelvic mass,HE4 Clinical Investigations,HE4用于卵巢癌的动态监测和对复发的诊断 血清HE4与CA125联合检测用于鉴别卵巢癌和卵巢子宫内膜异位症 血清HE4 检测用于子宫内膜癌的诊断和随访 血清HE4用于肺癌的诊断,HE4联合CA125鉴别诊断子宫内膜异位症和卵巢癌,HE4的编码基因WFDC2主要在卵巢子宫内膜样癌、子宫内膜癌中有表达, 并且在正常的子宫内膜腺体中也有表达，但是在子宫内膜异位病灶中是否有表达尚不明确，,我们实验室最检测了57例卵巢子宫内膜异位症患者血浆中HE4和CA125的浓度。数据结果与49例卵巢癌，60例卵巢良性肿物，50例健康对照作对比，初步探讨血清人附睾分泌蛋白4(HE4)